Раствор Кребса

Животных быстро забивают, дают вытечь крови и немедленно извлекают мозг. Затем приготовляют срез из интересующего исследователя участка мозга. Этот срез толщиной 2—4 мм помещают в 0,25 М раствор сахарозы или раствор Кребса — Рин-гера и рассматривают на охлаждаемом столике стереомикроскопа. Стереомикроскоп снабжен окулярами с 20-кратным увеличением и вспомогательной передней линзой, дающей 20— 160-кратное увеличение. Источники света закрывают инфракрасными фильтрами, поглощающими тепло. [c.278]

После регистрации вызванных изменений через тест-секцию пропускают раствор Кребса — отмывают полоску. После достижения исходных величин МПП и ЭТП проводят аналогичный эксперимент, но в безнатриевом растворе. Результаты одного из подобных опытов представлены на рис. 39. Фиксируют выявленные отличия и объясняют их с точки зрения современных представлений об ионных механизмах генерации электрических процессов иа плазматической мембране мышечных клеток. [c.153]

Ретикулоциты (незрелые эритроциты) содержат митохондрии, способные как к аэробному, так и к анаэробному окислению глюкозы. В опыте, в котором эти клетки инкубировались в оксигенированном растворе Кребса — Рингера с 10 мМ глюкозы, добавление антимицина А приводило через 15 мин к изменениям концентрации метаболитов, указанным в таблице . [c.518]

Клетки вместе с частью глии осторожно отделяют от среза, вводя под клетку заостренную проволочку из нержавеющей стали ( М1сгоШа1 Г., АВ КапЛа , Халлстахаммер, Швеция) диаметром 18—20 мкм. Каладую клетку извлекают из тканевого среза и помещают в раствор Кребса — Рингера. Эти манипуляции производят вручную, поэтому стереомикроскоп должен быть снабжен упорами для рук. [c.278]

Такие клетки помещают в ионный раствор, не содержащий субстрата, в течение 2 ч в них микроманометрически измеряют поглощение кислорода [3]. В это время скорость поглощения кислорода, выражаемая в мкл Ог -10 на клетку, была близка к нулю. После добавления глюкозы или р-оксибутирата, дыхание немедленно восстанавливается и в течение 10 мин достигает 10 мкл Ог-Ю на клетку, сухой вес клеток равен 2-10 г. Выделенные нервные клетки сохраняют также способность к фосфо-рилированию [14]. Далее выделенные клетки помещали в раствор Кребса—Рингера с добавками бикарбоната и глюкозы. Затем в них под визуальным контролем вводили микроэлектроды и измерялись мембранные потенциалы [15]. Средний мембранный потенциал 120 клеток при 23 °С достигал 40 мВ. В атмосфере, содержащей 95% N2 и 5% СО2, мембранные потенциалы падали до 20 мВ. При замене азота атмосферы на кислород (95% О2 и 5% СО2) мембранный потенциал вновь возрастал. [c.280]

На рис. 37 представлена схема камеры сахарозных промежутков. По обе стороны тестирующей секции в расположены сахарозные секции 6i, 62, через которые беспрерывно протекает изотонический раствор сахарозы. К наружной стороне каждой сахарозной секции прилегает еще по одной секции а, аг), через которые пропускается нормальный раствор Кребса или изотонический раствор КС1. В секциях в и U2 камеры (рис. 38) участки мышечного препарата через вытекающие из секции растворы соединяются с отводящими неполяризующимися каломельными электродами. Участки мышц в секциях и в через поступающие в камеру растворы соединяются с раздражающими Ag — Ag l-электродами. Необходимая температура используемых растворов поддерживается ультратермостатом ТЛ-150. Все растворы в камеру сахарозных промежутков поступают из мариотовских сосудов, что обеспечивает постоянную скорость протекания растворов. [c.151]

Глюкозу прибавить перед опытом.) 3. Безнатриевый раствор Кребса (соли Na заменяют изоосмотическим количеством сахарозы). 4. Изотонический раствор сахарозы (309,2 мМ) с удельным сопротивлением не ниже 1 10 ОмХ Хсм. 5. Изотонический раствор КС1. 6. ЭГТА (этиленгли-коль-бис-N, N -тетрауксусная кислота). 7. Строфантин К (лучше оуабаин). [c.152]

ЭТП регистрируется после подачи на полоску тока разной полярности (попеременно через 1—2 мин) силой 4— 6 мкА. Для определения МПП в тест-секцию пропускают изотонический раствор КС1. Наблюдается сначала быстрая, а затем медленная деполяризация мышечных клеток. Полная деполяризация и соответствует величине МПП, зарегистрированной этим методом. Затем через тест-секцию пропускают раствор Кребса и после установления исходной величины МПП можно проводить исследование влияния ЭГТА (или строфантина К) на МПП, ЭТП, ПД неисчерченных мышечных клеток. Для этого к раствору Кребса [c.152]

Оптимальной, на наш взгляд, схемой получения устойчивых к Са + дифференцированных клеток сердца является разработка Нага и соавторов [19], учитывающая преимущества более ранних методик. Извлеченное сердце гепаринизированной перед забоем (1000 ед гепарина на 1 кг массы) крысы (200—300 г) помещают в 10 мл охлажденного до О °С бескальциевого физиологического раствора Кребса—Рингера (РКР) на фосфатном буфере, pH 7.4, содержащем 5 10 М глюкозы и 1 % бычьего сывороточного альбумина. Перфузионный аппарат наполняют 50 мл бескальциевого РКР, предварительно оксигенированного продуванием смесью 95 % Ог и 5 % СО2. Через аорту (извлекая сердце, сохраняют ее участок длиной около 5 мм) вводят канюлю и промывают сердце РКР в течение 15 мин при 37 °С (на эту процедуру обычно расходуется около 25 мл физиологического раствора) при этом сердце часто сохраняет.сократительную активность. Перфузию продолжают оксигенированным РКР, содержащим 0.1 % коллагеназы, 0.1 % гиалуронидазы и 1 % бычьего сывороточного альбумина (к этому времени сокращения миокарда прекращаются). После окончания перфузии размягченную и потерявшую упругость ткань разрезают на 4 кусочка, удалив предсердия и крупные сосуды, затем повторно по 10— 15 мин до 3—4 раз инкубируют в растворе ферментов в РКР, отделяя клетки легким встряхиванием. Полученные фракции объединяют и отмывают центрифугированием (3—5 мин при 37 °С, 800 об/мин) на настольной центрифуге. Сходная методика получения изолированных клеток для культивирования описана Клэйкомом и Лэнсо-ном [14]. [c.292]

Техника применения срезов тканей животных для исследова- ния метаболизма манометрическим методом бьша введена Варбур- гом около 50 лет назад,. Она основывается на допущении, что в срезе протекают те же реакции, что и в целом органе. В некоторых случаях такое допущение спорно. В срезе не сохраняется ни иннервации, ни кровоснабжения, а газообмен ограничивается диффузией. Вполне вероятно поэтому, что в толще среза клетки находятся в анаэробных условиях, в то время как клетки поверхностных слоев подвергаются воздействию токсических концентраций кислорода, поскольку обычно в таких экспериментах инкубацию проводит в атмосфере, на 95% насыщенной кислородом. Кроме того, может сказываться отсутствие некоторых белков и гормонов, обычно содержащихся в крови и влияющих на проницаемость клеток in vivo. Как следствие этого некоторые субстраты, возможно, не смогут проникнуть внутрь клеток тканевого среза. Несмотря на все эти ограничения, данный метод оказался необычайно полезным. Ряд перечисленных выше трудностей преодолевают, приготавливая очень тонкие срезы одинаковой толщины (0,2 мм) и помещая их в соответствующую среду. Обычно это растворы Кребса—Рингера которые по своему ионному составу приближаются к сыворотке крови млекопитающих, что позволяет сохранять целостность исследуемых клеток (разд. 1.7). [c.254]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология