КаК-градиент как буфер ДцН а-Контроль

Электрофорез зарекомендовал себя как полезный метод при анализе сложных смесей, например сыворотки крови, на содержание в них альбумина и различных фракций глобулина. Поскольку растворителем служит обычно вода и разделение ведется большей частью при температурах 1°, белки подвергаются в этом случае довольно мягкому воздействию. Электрофорез служит высокочувствительным методом определения чистоты препарата (при благоприятных обстоятельствах удается обнаружить примеси в количестве менее 1%). Для контроля чистоты используются два метода. Первый состоит в том, что электрофорез проводят в возможно более широкой области изменения pH, буфера, ионной силы и концентрации белка. Обычно pH выбирают вдали от изоэлектрической точки с тем, чтобы свести к минимуму взаимодействие белковых молекул. Вторым методом является метод обращения направления распространения границы при pH, соответствующем изоэлектрической точке. При наличии примесей в белке граница будет расплываться быстрее, чем это должно было бы происходить за счет одной лишь диффузии. Конвекция за счет градиентов температуры также будет обусловливать размытие границы, однако этот эффект не изменяется при перемене полярности электрического поля. [c.219]

Коэффициент диффузии макромолекул обычно измеряют путем создания границы между буфером и раствором макромолекул с известной концентрацией с последующим наблюдением уширения этой границы во времени. Теоретически это измерение выглядит очень простым, однако на практике оно заключает в себе потенциальную ошибку. Например, О макромолекулы настолько мал (от 10- до 10-5), что для получения измеряемого уширения требуется в нормальных условиях целый день. В течение всего этого времени система не должна испытывать никаких механических воздействий, а точный контроль температуры должен исключить термическую конвекцию. Кроме того, если молекула заряжена (например, имеет общий положительный заряд), наличие в растворе дополнительных ионов ОН, которые диффундируют быстрее, чем макромолекула, приводит к образованию градиента электрического потенциала, который направляет макромолекулы, несущие заряд, в область с низкой концентрацией. Отсюда следует, что измерение коэффициента диффузии следует проводить в изоэлектрической точке или вблизи нее в растворе с достаточно высокой ионной силой, чтобы нейтрализовать или устранить влияние создаваемого электрического поля. Кроме того, поскольку теория основана на допущении, что молекулы [c.356]

Для быстрого количественного определения глютаминовой кислоты в мелассе, особенно в производственном контроле, можно рекомендовать электрофорез на бумаге [14]. Для этого был использован прибор ЭМИБ, применяемый для разделения белков крови. Электрофоретическое отделение глютаминовой кислоты удовлетворительно проходит в ацетатном буфере с рН-3,7 в течение 3 ч при градиенте потенциала около 10 в см. После сушки и обработки хроматограммы нингидрином количественное определение заканчивается, как описано выше. [c.216]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология