Плазмида мультимерные формы

Указанный недостаток устраняется использованием для трансформации мультимерных плазмид или созданием in vivo условии для закольцовывания мономерных однонитевых ДНК. В первом случае успешная трансформация обеспечивается повышенной вероятностью попадания в трансформируемую клетку таких однонитевых фрагментов, которые содержат перекрывающиеся и комплементарные области плазмидной ДНК. Это может привести к образованию хотя бы частично дуплицированных кольцевых молекул, способных к репликации, и к восстановлению целого или укороченного плазмидного генома. Мультимерные формы плазмид получают лигированием смеси линеаризованных мономерных молекул. Во втором случае эффект (до 2x10 трансформантов на 1 мкг ДНК) достигается наличием в плазмиде дуплицированного участка (Бойцов, Голубков, 1980) или участка, гомологичного бактериальной ДНК, а также присутствием в клетке другой плазмиды, имеющей область гомологии с трансформирующей плазмидои В каждом из трех вариантов этого случая создаются условия для рекомбинационного объединения концов линейных однонитевых фрагментов, для последующего синтеза комплементарной нити и образования нативной плазмидной ДНК. Разумеется, в этом случае для трансформации можно использовать только Re клетки. [c.235]

Анализ трансформированных клеток В. subtilis показал, что плазмидная ДНК проникает в компетентные клетки в виде линейных одноцепочечных структур. Цепи существенно де-градируются с концов, поэтому при введении в компетентные клетки мономерных плазмид для образования трансформанта необходимо, чтобы в клетку попало не менее двух молекул ДНК. Для мультимерных форм плазмид достаточно единичной молекулы, чтобы обеспечить трансформацию. [c.237]

Особенности механизма плазмидной трансформации компетентных клеток В. subtilis, в частности, необходимость мультимерных форм плазмид, затрудняют клонирование фрагментов ДНК в составе гибридных плазмид в данной системе. Несомненно, получать in vitro мульти-мерные молекулы гибридных плазмид гораздо сложнее, чем мономерные. Поэтому было разработано несколько вариантов трансформации компетентных клеток В. subtilis, позволяющих использовать мономерные плазмиды. [c.237]

В. subtilis. Перенос облегчается тем, что в препарате плазмиды, выделенном из клеток Е. соИ, содержатся мультимерные формы. Наличие в таких челночных векторах последовательностей плазмид Е. oli дает возможность значительно увеличить спектр рестриктаз, по сайтам [c.249]

В бактерии посредством Т. можно ввести также ДНК плазмид. Конечным результатом этого является возникновение клетки, несущей чужеродную плазмиду в автономном состоянии или включенную в состав хромосомы. Механизм проникновения в клетку плазмидной ДНК такой же, как и хромосомной. Однако возникновение однонитевой ДНК и др. процессы, сопутствующие поглощению, настолько уродуют плазмиды, что вероятность правильного восстановления кольцевой реплицирующейся формы низка (Т. клетки мономерными формами плазмид не эффективна). Поэтому употребляют мультимерные (состоящие из неск. плазмид) формы или плазмиды с прямыми повторами нуклеотидов, отчего шансы на сборку полноценной плазмиды повышаются. [c.626]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология