Челночные векторы

Создание челночного вектора на основе бакуловирусов для Е. соИ и клеток насекомых [c.146]

Главным условием автономной репликации является наличие в составе плазмиды участков ri, т.е. области начала репликации. Эти участки резко отличаются у прокариот и эукариот. Поэтому челночный вектор должен содержать два таких участка. [c.304]

Что такое челночные векторы Приведите примеры. [c.289]

Принципы конструирования и функционирования челночных векторов одинаковы, они должны включать в себя репликоны тех генетических систем, в которых будет происходить репликация челночного вектора. При этом используются области начала репликации генетических элементов, которые автономно суще- [c.103]

Внехромосомные экспрессирующие векторы млекопитающих обычно применяют для синтеза гетерологичных белков, использующихся в научных или медицинских целях. Они представляют собой челночные векторы с сайтами инициации репликации вируса животных и Е. со//-плазмиды. Регуляторные элементы транскрипции обычно происходят из генома вируса животных или из геномов млекопитающих. Для отбора трансфицированных клеток используют доминантные селективные маркерные гены. Некоторые системы отбора основаны на введении в среду возрастающего количества цитотоксичного соединения и позволяют получать клетки, содержащие большое число копий вектора, что увеличивает выход чужеродного белка. [c.155]

Большинство плазмидных векторов с широким кругом хозяев реплицируются только в грамотрицательных микроорганизмах, поэтому необходимо создать векторы, специально предназначенные для экспрессии в oryneba terium и Breviba terium spp. Это могли бы быть челночные векторы Е. соИ- oryneba terium. Та их часть, которая происходит из плазмид Е. соН, может со- [c.255]

Поскольку клонирующие векторы не содержат генов vir, они сами не способны обеспечивать транспорт и интеграцию Т-ДНК в клетки растения-хозяина. Чтобы решить эту проблему, было разработано два подхода. В первом случае используют бинарную векторную систему (рис. 17.6, А). Бинарный клонирующий вектор содержит сайты инициации репликации и для Е. соН, и для А. tumefa iens, но не несет генов vir, т. е. это практически челночный вектор Е. соН -А. tumefa iens. Все стадии клонирования прово- [c.377]

Челночный вектор (Shuttle ve tor) Плазмидная ДНК, способная реплицироваться в клетках двух разных типов (например, в Е.соИ и ютетках дрожжей). [c.564]

Нередко возникает задача ввести ген в клетки эукариот, например в дрожжевые клетки, в которых могут нарабатываться белки, прошедшие после их образования необходимые стадии модификации, несвойственные прокариотическим клеткам. Для этой цели используют специальные, так называемые челночные, векторы, которые могут автономтю размножаться как в прокариотических, так и в эукариотических клетках, например в Е.соН и дрожжах. В эукариотические клетки плазмиды вводят на заключительных стадиях, поскапьку многие предварительные этапы клонирования существенно проще проводить в кле гках прокариот. [c.304]

В качестве иллюстраций векторных систем приводим рис 68а, на котором изображены плазмиды ol El, pBR322, вирус SV40 и челночный вектор [c.197]

Перенос рДНК в клетки прокариот или введение последовательностей клонированной ДНК в рецепторные эукариотические клетки (например, млекопитающих) с помощью фаговых векторов называют трансфекцией Альтернативный метод — использование вирусов эукариот, то есть когда эукариотическая клетка инфицируется — (заражается) вирусом В качестве векторов при этом чаще используют литические вирусы типа вируса полиомы и SV40, а также челночные векторы, сконструированные на основе ретровирусов и папилломавирусов [c.202]

Рис. 6.8. Специфическая локализация гибридных белков САТ-8У-40 после трансфекции клеток МШЗТЗ рекомбинантными конструкциями на основе челночных векторов. А. Реакция гибридного белка САТ-фрагмент большого Т-антигена (аминокислоты —271) с моноклональными антителами, узнающими К-концевой участок Т-антигена, демонстрирует, что гибридный белок локализуется в ядре. Б. Реакция гибридного белка САТ-фрагмент малого 1-антигена (аминокислоты 1—174) с моноклональными антителами, узнающими уникальный участок последовательности 1-антиге-на, демонстрирует, что гибридный белок локализуется в цитоплазме. Для выявления связывания антител с гибридными белками использовалась пероксидазная система иммунодетекции (как описано в табл. 6.7).

Для клонирования пео-содержащих провирусов предложены две упрощенные методики каждая из них предполагает селекцию искомого клона в клетках . oli на устойчивость к канами-цину. Одна из методик представляет собой модифицированную процедуру спасения маркера и предусматривает прямое клонирование провируса в плазмидном векторе. Другая методика, гораздо более эффективная, требует применения специальных ретровирусных челночных векторов, описанных в разд. 9.3.2.4. [c.300]

Так называемые ретровирусные челночные векторы (один из прототипов — pZIP-Neo SV(X) 1 i[22]) разработаны специально для того, чтобы облегчить клонирование соответствующих провирусных ДНК. Как описано в разд. 9.3.2.4, челночные свойства pZIP-Neo SV(X) 1 обусловлены сочетанием в единой конструкции трех элементов области начала репликации SV-40, области начала репликации pBR322 и гена neo. [c.301]

Ori Pu . 12. Челночный вектор pFH7 (a) и экспрессирующий вектор pPR-TGATG-1 (б) Обозначено расположение генов и уникальных сайтов рестрикции [c.102]

Все основные принципы, используемые при конструировании бактериальных векторов, применимы и для получения векторов эукариотических клеток. Как и в случае бактерий, эукариотический вектор представляет собой небольшую молекулу ДНК, способную автономно реплицироваться в клетках животных или растений. Помимо последовательностей нуклеотидов, обеспечи-ваюпдих репликацию, эукариотические векторы могут содержать гены, используемые в качестве селектируемых маркеров, а также один или несколько уникальных сайтов рестрикции, по которым производится встраивание клонируемых последовательностей нуклеотидов ДНК. Поскольку непосредственное клонирование рекомбинантных ДНК в клетках животных или растений было бы дорогостоящей и малоэффективной процедурой, эукариотические векторы используют, как правило, для получения экспрессии уже клонированных последовательностей нуклеотидов в клетках высших эукариот, а сам процесс клонирования проводят в бактериях. Следовательно, эукариотические векторы, помимо всего прочего, должны быть челночными векторами. Для экспрессии в клетках рекомбинантные ДНК помещают под контроль регуляторных элементов, узнаваемых и используемых ферментативными системами эукариотических клеток. [c.133]

Молекулярная биотехнология принципы и применение (2002) -- [ c.62 , c.136 , c.147 , c.148 ]

Биотехнология (1988) -- [ c.317 ]

Биотехнология - принципы и применение (1988) -- [ c.317 ]

Новое в клонировании ДНК Методы (1989) -- [ c.204 , c.205 , c.284 , c.301 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология