Эндонуклеаза расщепление чужеродных ДНК

Молекула вектора должна отвечать определенным требованиям быть небольшой, содержать уникальные участки расщепления рестрикционными эндонуклеазами, иметь маркеры для оптимальной селекции рекомбинантных клеток. В качестве векторов для включения чужеродной ДНК в клетки Е. соИ используются плазмиды (термин предложен Дж. Ледербергом) и бактериофаги. И те и другие являются репликонами. [c.430]

Многие бактерии обладают способностью разрушать проникшую в них чужеродную ДНК (включая и ДНК фагов). Это явление, получившее название рестрикции (ограничения), обусловлено активностью ферментов эндонуклеаз. Защита генома бактерий от действия собственных эндонуклеаз происходит благодаря специфической модификации (обычно метилирования) отдельных нуклеотидов, входящих в определенные последовательности разной протяженности (участки расщепления). При инфекции клеток большим количеством фага рестрикционные эндонуклеазы ие всегда успевают разрушить все геномы инфицирующих фагов. В случае репликации генома фага, избежавшего рестрикции после инфекции, вновь синтезированная ДНК фага модифицируется и поэтому возникшее потомство фага уже не будет при вторичной инфекции исходных бактерий подвергаться ограничению. Участки, чувствительные к рестрикционным эндонуклеазам, распределены в геноме каждого фага определенным образом. Мутационная утрата таких участков делает фаг менее чувствительным к ограничению при инфекции бактерий. [c.203]

Микроорганизмы, синтезирующие эндонуклеазы рестрикции, выработали систему самозащиты они метилируют одно или несколько оснований рестриктазного сайта, и расщепление ДНК в этом сайте гомологичной эндонуклеазой рестрикции блокируется. Грамотрицательные микроорганизмы имеют еще один механизм защиты эндонуклеазы рестриьщии у них локализованы в периплазматическом пространстве. Благодаря такой компартментализации происходит физическое разделение рестриктаз и ДНК и при этом обеспечивается свободный доступ метилирующего (модифицирующего) фермента к хромосомной ДНК. Кроме того, это защищает клетку от проникновения в нее любой чужеродной ДНК, например вирусной. [c.248]

Эти ферменты являются компонентами системы рестрикции — модификации прокариотических клеток, которая предназначена для их защиты от чужеродных ДНК. К рестрикционным эндонуклеазам относятся также и все другие ферменты, специфически расщепляющие ДНК по определенной последовательности, хотя часто их роль в процессах рестрикции — модификации не доказана. В зависимости от характера узнаваемой нуклеотидной последовательности ( сайта ), мест расщепления и условий реакции ре-стриктазы делятся на три класса. [c.309]

Интересно, что этот короткий участок ДНК, метилированный или неметилиро-ванный, обладает внутренней симметрией относительно центральной точки, показанной красным цветом. Если повернуть этот участок на 180° в плоскости рисунка вокруг центральной точки, то он будет читаться точно так же, как до поворота. Такой тип симметрии характеризуется осью симметрии второго порядка. Больщинство проверенных последовательностей модификации-рестрикции обладают симметрией второго порядка. Рестриктирующая эндонуклеаза Hind II расщепляет обе цепи в середине этого участка в любой ДНК, в которой эта последовательность не метилирована. Будучи расщепленной таким образом, чужеродная ДНК не может быть исправлена и поэтому не может реплицироваться. [c.880]

Эволюция наделила различные вццы бактерий уникальными эндонуклеазами, позволяющими им отличать их собственную ДНК от чужеродной. Тем самым природа снабдила ученых богатым набором высокоспецифичных реактивов для расщепления ДНК. Нри изучении ДНК больщое значение имеют две важные особенности рестрикгируюпщх эвдонук-леаз. Первая связана с замечательной способностью фермента узнавать специфические короткие нуклеотидные последовательности в ДНК. Вторая состоит в том, что существует больщое количество различных эндонуклеаз рестрикции, каждая из которых узнает специфическую последовательность. [c.214]

Рестриктируюгцие эндонуклеазы обнаруживаются у самых различных прокариот. Биологическая роль этих ферментов состоит в том, чтобы расш еплять чужеродные молекулы ДНК. Собственная клеточная ДНК при этом не расщепляется, так как участки, узнаваемые своими ферментами рестрикции, у нее метилированы. Взаимосвязь между ресткрикцией и модификацией рассматривается в гл. 30 (разд. 30.9). Важное значение имеет тот факт, что многие ферменты рестрикции узнают специфические последовательности ДНК длиной от четырех до шести пар оснований и гидролизуют фосфодиэфирные связи в обеих цепях в этой области. Удивительная особенность таких участков расщепления - их симметрия относительно оси вращения второго порядка. Другими словами, узнаваемая последовательность пар оснований представляет собой палиндром. [c.38]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология