Методы ступенчатой ферментативной деградации

МЕТОДЫ СТУПЕНЧАТОЙ ФЕРМЕНТАТИВНОЙ ДЕГРАДАЦИИ [c.98]

Методы ступенчатой ферментативной деградации 101 [c.101]

Каковы же перспективы использования метода ступенчатой химической деградации для выяснения последовательности оснований Он может оказаться эффективным при анализе олигонуклеотидов, когда структурные или конформаци-онные особенности затрудняют или делают недостоверным использование ферментативных методов. Химическому методу совершенно несвойственна специфичность, столь характерная для ферментативных реакций. [c.123]

Известны два основных метода деградации белковой молекулы — частичный кислотный гидролиз и ферментативный гидролиз. Первый метод менее селективен, по с его помощью могут быть получены ценные данные относительно структуры низкомолекулярных белков определенного молекулярного веса. Полный гидро.-лиз белков до составляющих аминокислот не позволяет установить последовательность расположения аминокислот в белке. Однако количественное определение соотношений отдельных аминокислотных, остатков дает возможность судить о гомогенности данного белка. На основе этих данных можно рассчитать эмпирические формулы и сравнить их с формулами, полученными нри помощи элементарного анализа. Это необходимо сделать до проведения частичного гидролиза белка или его ступенчатого расщепления для определения последовательности аминокислот. Подобная методика приведена в статьях Белла и сотр., посвященных определению структуры одного из физиологически активных компонентов кортикотронина [И, 25, 152, 153]. [c.392]

Химический метод последовательного отщепления нуклеозидных остатков с З -конца полирибонуклеотидной цепи 2 2,283 основан на следующей схеме. Полинуклеотид ЫУ, содержащий на З -конце цепи единственную на весь полимер диольную группировку, обрабатывают перйодатом полученный диальдегид ЬУ в мягких условиях избирательно расщепляется за счет р-элиминации с образованием полинуклеотида ЬУ1, укороченного на одно звено. После ферментативного дефосфорилирования последнего образуется полинуклеотид ЬУИ, идентичный по концевой углеводной группировке исходному ЫУ этот новый укороченный нуклеотид может быть вновь подвергнут той же ступенчатой деградации. Разработано [c.65]

Если олиго- или полинуклеотид фосфорилирован по З -концу, первой стадией является ферментативное дефосфорилирование. Затем следует периодатное окисление, превращающее З -концевой нуклеозидный остаток в 2, 3 -диальдегид XVI, в котором 5 -фосфо-диэфирная связь находится в р-положении к З -альдегидной группе (подробнее о периодатном окислении см. стр. 531). Завершающей стадией является расщепление 5 -фосфоэфирной связи в диальде-гидном производном XVI под действием различных первичных аминов. В результате образуется олиго- или полинуклеотид, укороченный с З -конца на одно нуклеотидное звено. Весь цикл превращений может быть повторен. От продукта превращения бывшего З -концевого нуклеотидного звена XVII при действии кислоты (рН< 3) или щелочи (pH > 11) отщепляют основание, определяемое далее обычными аналитическими методами. Разрешающая способность метода (возможность определять достаточно длинную З -концевую последовательность олигонуклеотида или РНК) зависит от полноты прохождения каждой стадии реакции. Важнейшей из этих стадий является расщепление фосфодиэфирной связи в диальдегиде XVI под действием аминов. Первоначально для этой цели использовали глициновый буфер (pH 10—10,5 37° С, 18 ч) 175,176 Хаким методом была проведена ступенчатая деградация 3 ряда динуклеотидов [c.588]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология