Флуоресцентное окрашивание

Микоплазма. Источником заражения микоплазмой при культивировании клеток могут быть культуральная среда, сыворотка, трипсин или сам исследователь. Заражение не выявляется невооруженным глазом, и, поскольку оно не приводит к изменению роста культуры, заражение микоплазмой часто остается незамеченным. Следует регулярно (один раз каждые 1—3 мес) проверять культуры на наличие в них микоплазмы, поскольку такое заражение существенно изменяет биохимию клеток, их антигенные свойства и параметры роста культуры. Предложено несколько методов выявления микоплазмы, но наибольшее распространение получил метод флуоресцентного окрашивания ДНК по методу Чена (см. гл. 4). [c.25]

Рис. 9.2. Флуоресцентное окрашивание микоплазмы. Клетки окрашивали Хехст 33 258, флуоресцирующим в комплексе с ДНК. А — клетки ЗТ6 можно видеть позитивное окрашивание цитоплазмы, особенно заметное в делящихся клетках. Б — не содержащие микоплазмы клетки PyY. [Содержащие микоплазму клетки ЗТ6 любезно предоставлены доктором Льюисом из Flow Laboratories.]

Методы флуоресцентного окрашивания для контроля [c.180]

Ж. Двухцветное флуоресцентное окрашивание [c.206]

Красители часто дают настолько сильное окрашивание, что их необходимо разбавлять в какой-либо прозрачной среде для возмохсности получения наибольших цветовых эффектов. Это в особенности справедливо для некоторых флуоресцентных красок. Родамин адсорбируется на измельченном в порошок силикагеле, так что добавление нескольких процентов этого красителя дает интенсивное флуоресцентное окрашивание [631]. [c.827]

Рис. 20-42. А. Электронная микрофотография фрагмопласта в делящейся клетке растения. Микротрубочки направляют движение пузырьков, содержащих предшественники клеточной стенки, к растущей клеточной пластинке. Подробности см. на рис. 13-71. Б. Флуоресцентные микрофотографии цитокинеза клеток из кончика корня лука. Окрашивание флуоресцирующими антителами позволяет выявить развивающуюся клеточную пластинку и два набора микротрубочек фрагмопласта, располагающихся по бокам этой пластинки (слева) флуоресцентное окрашивание ДНК (справа) дает возможность увидеть расположение двух дочерних ядер, которые будут разделены новой клеточной стенкой. (А - о, любезного

С помощью оптики Nomarski или флуоресцентного окрашивания ДНК ) убеждаются, что ядро находится в таком положении, чтобы при инъекции не была повреждена вак 0ль. Если клетки или протопласты вплавлены в агарозу, выбирают именно такую клетку. При использовании удерживающей пипетки пытаются переориентировать клетку в оравильное положение. [c.229]

Флуорохромы можно присоединять непосредственно к моноклональным антителам, или, как это делается чаще всего, можно пометить вторичный реагент для непрямого выявления антител, такой, например, как белок А из Staphylo o us aureus или антитела против иммуноглобулинов. Флуоресцентное окрашивание дает существенную информацию о распределении антигена в смешанных клеточных популяциях, однако наблюдения в микроскоп занимают много времени и их интерпретация не всегда объективна. К тому же флуоресцентный клеточный сортер не всегда доступен, и работа на нем обычно требует предварительных заявок и планирования. [c.218]

Одна из наиболее трудных проблем при цитометрии связана с неспецифическим окрашиванием. Клеточный сортер с чрезвычайно высокой чувствительностью детектирует флуоресцирующие молекулы — обычно с большей, чем глаз. Поэтому реагенты, используемые при работе с сортером, должны быть более высокой степени очистки, чем для других методов анализа. Как правило, гетерологичные сыворотки должны подвергаться очистке на аффинных сорбентах даже в тех случаях, когда они достаточно специфичны для непосредственного использования при флуоресцентной микроскопии. Моноклональные антитела не всегда требуют очистки. Мы с успехом использовали супернатанты многих продуцирующих моноклональные антитела гибридом, которые культивировали в средах с добавлением и без добавления сыворотки, а также асцитные жидкости (конечно, в соответствующем разведении). В случае непрямых методов флуоресцентного окрашивания влияние контаминирую-щих молекул в культуральных жидкостях сводится к минимуму. Если конъюгированные с флуорохромом антитела строго специфичны по отношению к иммуноглобулинам, то даже при связывании клетками молекул, не относящихся к иммуноглобулинам, эти молекулы не будут детектироваться (по флуоресценции). В случае применения асцитных жидкостей активность моноклональных антител обычно настолько высока, что эффекты контаминирующих иммуноглобулинов и других компонентов чаще всего не выявляются. Однако при прямом конъ-югировании препаратов антител с флуорохромом наличие в них белковых примесей неиммуноглобулиновой природы может стать причиной высокого уровня неспецифического окрашивания. Следовательно, любой конъюгат используемый при сортинге клеток, должен быть тщательно очищен. [c.332]

При применении метода иммунофлуоресценции результат должен быть подтвержден контрольной пробой на специфичность. Сравнительно надежна в этом отношении реакция торможения флуоресцентное окрашивание подавляется после предварительной обработки среза не-конъюгированной специфической антисывороткой обработка неиммунной сывороткой не приводит к торможению. [c.298]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология