Получение заготовок вируса

Полученную заготовку вируса для определения титра и степени чистоты следует протестировать одним или несколькими методами, перечисленными ниже [c.229]

Основной метод заражения описан Ватсоном и др. [5]. Целесообразно перед началом работы получить первичную и вторичную (один пассаж из первичной) заготовки вируса, которые по возможности следует разместить в нескольких холодильниках на —70 °С. Как правило, рабочие заготовки получают из вторичных и таким образом исключают длительное пассирование вируса. При этом сводится к минимуму возможность получения вирусных заготовок, сильно отличающихся по номеру пассажа, что создает трудности в прямом сравнении данных, полученных в разных экспериментах. В большинстве случаев для получения вирусных заготовок мы используем роллерные [c.271]

Любая стандартная среда для культивирования клеток может быть использована для получения вирусных заготовок. Обычно для выращивания клеток мы используем среду с 10% ТС. Уменьшение концентрации сыворотки приводит к некоторому снижению выхода вируса, однако при этом экономится дорогостоящая сыворотка. Заготовки вируса получают, используя следующую методику [c.273]

В больщинстве случаев самым удобным для работы является титр 5-10 —1-10 БОЕ/мл. Чаще всего вирусные заготовки, полученные, как описано выше, имеют подобный титр и могут быть использованы непосредственно или же после необходимого разведения. В тех случаях, когда требуется более высокий титр, вирус концентрируют ультрацентрифугированием (3 ч, 80 000 g, 4°С) и ресуспендируют в соответствующем объеме среды или буфера, содержащего 5% ТС. С другой стороны, можно получить необходимую заготовку из очищенного и диализованного вирусного препарата (см. разд. 5). [c.230]

Обрабатывают ультразвуком и центрифугируют 20 мин при 1000 д. Второй супернатант объединяют с первым. Полученная Суспензия и представляет собой заготовку вируса. Клеточный осадок, перед тем как выбросить, обрабатывают либо С1огох, либо 5%-ным гипохлоритом. [c.229]

В этом разделе мы рассмотрим ряд методов определения концентрации вируса в различных препаратах. При необходимости определение инфекционного титра проводят методом бляшек (см. разд. 6.1), который позволяет наилучшим образом охарактеризовать вирусный препарат. Недостаток данного метода состоит в том, что он требует довольно много времени. Во многих случаях приблизительный титр определяют по проценту инфицированных клеток методом иммунофлуоресцентного окрашивания на Т-антиген (для этого сравнивают значения, полученные при инфицировании культур тестируемым препаратом и препаратом, титр которого известен). С помощью реакции гемагглютинации (см. разд. 6.2) так же, как и путем измерения оптической плотности или электронной микроскопии препаратов, можно определить общее количество вирусных частиц, в том числе пустых капсидов, псевдовирионов (содержащих вместо вирусной ДНК фрагментированную ДНК клетки-хозяина) и ДИЧ [12]. По соотношению между БОЕ и ГАЕ можно сделать вывод о наличии дефектных частиц в препаратах вируса. Для хороших заготовок вируса это соотношение составляет около 5-105—10 [13]. С большей точностью дефектные и другие нестандартные вирионы можно выявить, экстрагируя вирусную ДНК из небольшого объема заготовки (или лизата) и исследуя ее с помощью рестрикционного анализа или электрофореза (см. разд. 6.3). [c.235]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология