Определение инфекционного титра

ВВС титруют стандартным методом бляшек. Однако этот простой и точный метод определения инфекционности применим не ко всем рабдовирусам. Для многих с успехом применялись альтернативные подходы, в том числе модификации метода бляшек. [c.116]

Определение инфекционного титра [c.276]

Оба описанных выше метода определения титра вируса страдают одним общим недостатком — необходимостью строить калибровочные кривые на основе точных стандартов. Кроме того, этими методами нельзя различить дефектные вирусы и полноценные инфекционные частицы. Очевидно, что наиболее информативными следует считать такие методы титрования вируса, которые основаны на определении количества инфекционных частиц с помощью биологических тестов. В случае репликационно-компетентного MLV этой цели отвечает анализ бляшек с использованием ХС-клеток [15]. Однако обычно нет нужды [c.298]

Количество бактерий в сточных водах бывает довольно значительное. Оно может достигнуть многих миллионов в 1 мл. Объем бактериальной массы (содержащей 85% воды) при количестве 100 млн. бактерий в 1 мл составляет 0,04% от объема сточных вод. Наличие большого количества бактерий в сточных водах характеризует степень их загрязненности. Однако этот показатель не является исчерпывающим. Во-первых, могут быть очень загрязненные воды, не имеющие бактерий, но содержащие токсичные вещества, во-вторых, помимо патогенных бактерий, бывают и сапрофитные, т. е. полезные. Поэтому, кроме определения количества бактерий в мл сточных вод, важно знать, какое количество кишечных палочек (бактерий коли ) присутствует в сточных водах. Наличие кишечных палочек в воде еще не говорит о зараженности ее инфекционными началами, например брюшного тифа. Но факт обнаружения кишечной палочки свидетельствует о нахождении в воде выделений человека и животных, что является отрицательным санитарным показателем. Бактериальную загрязненность сточных вод характеризуют величиной коли-титра, т. е. наименьшим объемом воды в мл, ъ котором содержится одна кишечная палочка. Так, если коли-титр равен 10, то это значит, что в 10 лгл найдена 1 кишечная палочка при коли-титре, равном 0,001, в 1 мл обнаруживается 1000 кишечных палочек. Коли-индекс означает количество кишечных палочек в 1 л жидкости. В сточных водах коли-титр может быть 0,000001 и даже меньше. [c.227]

Многие из описанных здесь методов титрования исходно создавались для диагностических целей тем не менее они вполне применимы и для исследования антигенного родства между вирусами или механизмов репродукции. Титры инфекционности одного и того же вируса, определенные разными методами, как правило, неодинаковы. Обычно максимальный титр получают при внутримозговом заражении новорожденных мышат, однако материал из мозга животных иногда невозможно использовать без дополнительной многостадийной очистки. [c.105]

Инфекционность ВВС определяют, заражая вирусом моно- слойную или суспензионную культуру клеток ВНК-21. Как правило, предпочитают суспензионную культуру, поскольку в этом случае адсорбция проходит более равномерно. Для определения титра ВВС можно использовать и другие культуры, в частности фибробласты куриного эмбриона или L-клетки мыши [10, 16]. [c.117]

Одной из серьезных проблем, возникающих по мере па-лучения заготовок вирусов герпеса, является их очистка от клеточного материала, поскольку большая часть вируса тесно связана с клетками. Клетки разрушают, проводя ряд циклов замораживания и оттаивания, однако это может привести и к снижению титра вируса. Обработка клеток ультразвуком небезопасна из-за возможного образования аэрозолей, содержащих инфекционный вирус. Поэтому лучше всего проводить дезинтеграцию в ультразвуковой бане в закрытом сосуде. К сожалению, мы не можем рекомендовать какую-либо определенную марку ультразвукового дезинтегратора. Необходимо проверять эффективность каждого из них. Вирусные заготовки обрабатывают ультразвуком до полного разрушения клеток. [c.274]

Идея лечить инфекционные заболевания заранее приготовленными препаратами антител, хотя и вытесняемая успехами антибиотикотерапии, все же сохраняет свою ценность в определенных ситуациях (рис. 19.17). Когда токсины уже проникли в кровоток (например, при дифтерии, столбняке или после укуса змеи) и для их нейтрализации требуется высокий титр специфических антител, жизнь больного удается спасти только вве- [c.373]

В этом разделе мы рассмотрим ряд методов определения концентрации вируса в различных препаратах. При необходимости определение инфекционного титра проводят методом бляшек (см. разд. 6.1), который позволяет наилучшим образом охарактеризовать вирусный препарат. Недостаток данного метода состоит в том, что он требует довольно много времени. Во многих случаях приблизительный титр определяют по проценту инфицированных клеток методом иммунофлуоресцентного окрашивания на Т-антиген (для этого сравнивают значения, полученные при инфицировании культур тестируемым препаратом и препаратом, титр которого известен). С помощью реакции гемагглютинации (см. разд. 6.2) так же, как и путем измерения оптической плотности или электронной микроскопии препаратов, можно определить общее количество вирусных частиц, в том числе пустых капсидов, псевдовирионов (содержащих вместо вирусной ДНК фрагментированную ДНК клетки-хозяина) и ДИЧ [12]. По соотношению между БОЕ и ГАЕ можно сделать вывод о наличии дефектных частиц в препаратах вируса. Для хороших заготовок вируса это соотношение составляет около 5-105—10 [13]. С большей точностью дефектные и другие нестандартные вирионы можно выявить, экстрагируя вирусную ДНК из небольшого объема заготовки (или лизата) и исследуя ее с помощью рестрикционного анализа или электрофореза (см. разд. 6.3). [c.235]

Возможно, наиболее важный результат исследований Шлезингера состоял в следующем. С помощью дифференциального центрифугирования неочищенных фаговых суспензий и пропускания их через фильтры с градуированным диаметром пор ему удалось выделить фаговые частицы в количествах, достаточных для определения их массы затем с помощью прямого химического анализа очищенного фага он показал, что фаг состоит в основном из примерно одинаковых количеств белка и дезоксирибонуклеиновой кислоты. Хотя фаговые частицы невозможно видеть под обычным микроскопом, Шлезингеру удалось непосредственно определить общее число фаговых частиц в очищенном препарате, подсчитав число светящихся точек в темном поле микроскопа. Таким путем он установил, что число фаговых частиц в препарате приблизительно равно инфекционному титру, определенному методом Д Эрреля. [c.253]

Специалисты считают, что при всей трудности доказать связь между купанием в загрязненном водоеме и частотой некоторых инфекционных заболеваний, практика и эпидемиологические наблюдения делают совершенно необходимым установление определенных границ допустимого загрязнения. Так, по Хабенихту, коли-титр ниже 0,1 дает уже основание считать место купания сомнительным при коли-титре на уровне 0,1 водоем может быть использован для этих целей, а при коли-титре выше [c.179]

При различных инфекционных заболеваниях накопление специфических антител в сьшоротке вдет с неодинаковой скоростью и достигает разных величин. В связи с этим принято говорить о диагностическом титре антител—той величине титра, при которой можно с уверенностью поставить серологический диагноз заболевания в определенный его период. При многих инфекциях наиболее надежным диагностическим признаком считается не наличие антител, а нарастание их титра в динамике заболевания, которое выявляется путем постановки серологических реакций с парными сьшоротками, т. е. полученными дважды от одного и того же больного. [c.108]

Таким образом, для исследуемого штамма МЕР 50% цитопа-тогенная доза равна 10- >5, Учитывая, что объем каждого испытанного разведения составлял 1 мл, легко вычислить концентрацию вируса в неразведенном материале. Она равняется 10 ТЦДго в 1 мл. В том случае, когда вирус титруется в объеме меньшем, чем 1 мл (0,1 0,25 0,3 мл и т. д.), это необходимо учитывать при определении содержания вируса в исходном материале. Так, если титр равен 10 , а культуру ткани заражали 0,2 мл инфекционного материала, то конечная концентрация вируса будет равна 10 5 в 1 мл. Путем логарифмирования приходим к более простому выражению (lg 10 = -5,9 [c.193]

Для сохранения активности вируса при дифференци а льном центрифугировании необходимо выбрать оптималь ные условия осаждения вируса. Не следует без надобности применять высокое гравитационное поле и продолжительно центрифугировать, так как образуется очень nnoTHHI осадок, из которого трудно приготовить гомогенную суспензию для последующего определения титра биологиче ской активности или для других исследований. При низкоскоростном центрифугировании такой суспензии удаляют ся и агрегированные вирусные частицы, что приводит i большим потерям вируса [632]. Кроме того, при ультра центрифугировании лабильшлх вирусов может наблюдать ся инактивация. Например, птичий аденовирус после ультрацентрифугирования при 190000 g в течение одног< часа терял 99% своей инфекционности [377]. [c.56]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология