Межмолекулярно сшитые белки

МЕЖМОЛЕКУЛЯРНО СШИТЫЕ БЕЛКИ [c.192]

Применение межмолекулярно сшитых ферментов для терапевтических целей преследует те же цели, что и в случае полимер-ферментных конъюгатов увеличение сроков циркуляции в кровяном русле, снижение иммуногенности и стабилизацию фермента при максимальном сохранении ферментативной активности. В отсутствие полимерной защитной оболочки достижение этих целей более сложно. В то же время нарушение нативной конформации белка при межмолекулярном сшивании обычно меньше, чем при модификации полимерами, содержание белка в конъюгате почти 100 %, а внутримолекулярные сшивки ответственны за наблюдаемую в ряде случаев стабилизацию. [c.199]

Незначительные изменения конформации белка, например набухание молекул сывороточного альбумина при нодкислении раствора до pH 4 [384, 385], часто обратимы. Обратимость конформационных переходов особенно благоприятна в том случае, если полипептидная цепь имеет внутримолекулярные дисульфидные мостики, которые накладывают ограничения на разворачивание цени. Наглядным примером такой обратимой денатурации является проведенное Германсом и Шерагой [395] исследование рибонуклеазы, молекула которой состоит из простой полипептидной цепи, сшитой четырьмя дисульфидными группами. Известна полная последовательность аминокислот в этом ферменте, и схематическое изображение полипептидной цени с указанием места поперечных связей [396] приведено на рис. 45. Отсюда возникает вопрос, можно ли разрушить поперечные связи путем восстановления, что позволяет цепи разворачиваться и возобновлять нативную конформацию с соответствующими нарами тиольных групп, окисленных до дисульфидных мостиков. Решающий эксперимент был поставлен Уайтом [397], который показал, что большая доля ферментативной активности, утерянная при восстановлении дисульфидных групп, может быть в основном восстановлена путем повторного окисления. Особенно важные результаты были получены Анфинсеном и др. [398], которые обнаружили, что воссоздание дисульфидных связей происходит быстрее, чем восстановление ферментативной активности белка. Так как восемь аминокислотных остатков, принимающих участие в создании четырех дисульфидных мостиков, могут соединяться друг с другом 105 различными способами и поскольку образование межмолекулярных дисульфидных связей влияет на ход внутримолекулярной реакции [399], образование многих поперечных связей в начальной стадии может протекать нерегулярно. Такие молекулы [c.137]