Антигены и аититела

Твердофазные иммунореагенты вначале использовали для выделения антигенов и аитител. Впоследствии иммобилизованные антитела применили для радиоиммуноанализа белков [1, 2] и гаптенов [3,4 ], где с их помощью удалось упростить разделение свободного и связанного с антителами определяемого вещества. Реагенты (антитела или антигены) связывали с носителем или ковалентно, или с помощью пассивной адсорбции. Ковалентное связывание требует проведения химических реакций и тщательной очистки готового продукта. Связывание путем пассивной адсорбции занимает много времени, а полученные таким способом реагенты сложно ис- [c.52]

Если в такую систему добавить немеченый антиген (определяемое вещество), он будет конкурировать за связывание с любым центром связывания аитител, который освобождается молекулой меченого антигена. Степень связывания последнего будет уменьшаться во времени в силу его диссоциации, осуществляющейся по первому порядку. Уменьшение количества связанного меченого ан-гигена и, следовательно, снижение поляризации флуоресценции зависят от количества добавленного немеченого антигена. Если константа аффинности антител равна примерно 10 л/моль, то иечеиый антиген диссоциирует быстро, т.е. константа 2 высока [20 ]. В случае антисыворотки против фенобарбитала поляризация [c.145]

Для выделения поверхностных антигенов исследуемых клеток из экстрактов, полученных с помощью детергентов, применяют аффинную хроматографию на иммобилизованных антителах, но перед этим производят частичную очистку аитител. [c.50]

Некоторые белки клеточной поверхности в присутствии нейтральных детергентов образуют агрегаты (Standring et al 1978), Чтобы предотвратить это, после осаждения ядер центрифугированием к экстракту, полученному с помощью детергентов, добавляют дезоксихолат до концентрации 1—2%, Это вещество— относительно мягкий анионный сурфактант, и в его присутствии четвертичная структура белков и их антигенные и ферментативные свойства ие меняются. Однако было показано, что дезоксихолат может мешать взаимодействию аитител с [c.59]

В этой главе описан -непрямой метод га.птеннзированиых аитител (НМГА), дающий возможность выявлять н изучать любую данную пару антигенов клеточной шверхпостн независимо от того, находятся ли онн на одной и той же плн иа разных клетках. [c.160]

Главным инструментом при изучении антигенов клеточных мембран служат флуоресцирующие антитела. Соответствующий метод, впервые разработанный Кунсом и его сотрудниками еще в 1941 г. (обзор СоМтап, 1968), состоит в применении аитител, конъюгированных с флуорохромами, для определения точной локализации специфических антигенов на срезах ткаией или мазках. Этот метод, сочетающий гистохимические и иммунохимические подходы, благодаря своей универсальности, специфичности и простоте занял важное место в клеточной биологии. Чувствительность окрашивания можно повысить, если ис-пользовать непрямой метод. Прн этом немодифициро-ваниую специфическую антисыворотку наносят на исследуемый образец, и антитела соединяются с антигеном. Затем образец отмывают от избытка антисыворотки и обрабаты1вают меченными флуоресцеином антителами к иммуноглобулинам того вида животных, от которого была получена первая антисыворотка. [c.161]

Как прав1ИЛо, для упомянутых исследований обычные прямой и непрямой методы флуоресцирующих аитител не совсем пригодны. Дело в том, что большинство дифференцировочиых антигенов выявляются только как аллоантигены, н поэтому [c.161]

Следует подчеркнуть, что ввиду чрезвычайно мягких условий, в которых Осуществляется разработанная нами реакция конъюгации гаптенов с белками, ее можно применять ие только для получения гаптенизированных аитител, но и для гапте-иизацин других лигандов к антигенам клеточной поверхности (разд. IV, Г). [c.185]

Приведет ли им.муиизация к выработке аитител костным мозгом, зависит от ряда факторов (см. разд. VI), Как правило, после повторной внутривенной иммунизации Т-зависимыми антигенами костный мозг образует антитела. Этот иммунный ответ, судя по образованию зои гемолиза, имеет характерную кинетику. на которую не влияют свойства использованного Т-зависимого антигена н повторная доза антигена (Веппег et al., 1974), Ответ можно разделить на две фазы. Первая фаза (дли- [c.281]

При изучении аитител к антигенам клеточной поверхности обычно использовалнсь свежие нли фиксированные клетки в суспензии, что требовало затраты времени на центрифугирование. Недавно был описан метод (Sto ker, Heusser, 1979), в котором клетки иммобилизуются иа поверхности пластика и используются как нерастворимый антиген для различного рода иммунологических реакций. Ннже описаио применение этого [c.329]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология