Антигены, выделение

Выяснение последовательности аминокислот в пептидных цепях иммуноглобулинов затруднено гетерогенностью этих белков. Антитела к данному антигену, выделенные даже в чистом виде, почти всегда неоднородны. Одной из причин этой неоднородности следует прежде всего назвать наличие у большинства антигенов нескольких антигенных детерминант к которым образуются различные по специфичности антитела. Кроме того, антитела даже к одной детерминанте могут принадлежать [c.10]

Разработаны несколько вариантов иммунохимического определения с электрохимическим контролем некоторых антигенов. Высокая чувствительность достигнута либо за счет использования каталитических токов выделения водорода на ртутном электроде, либо с помощью биосенсора на основе иммобилизованной холинэстеразы. [c.152]

Иммобилизованные ферменты могут быть использованы в качестве иммуносорбентов для выделения из антисыворотки специфических антител на эти ферменты. Эффективность адсорбции антител, количество адсорбированных антител и условия их элюции зависят от свойств иммуносорбента от количества связанного с матрицей белка-антигена, прочности связи антиген—носитель, конформации антигена и числа вовлеченных в ковалентное связывание субъединиц антигенов-олигомеров. [c.304]

Чувствительность в определении единичных аминокислотных замен в случае моноклональных антител значительно выше по сравнению с антисывороткой и позволяет использовать моноклональные антитела даже для детекции тонких конформационных изменений молекулы белка. Благодаря высокой чувствительности, с которой моноклональные антитела определяют антигенные детерминанты, их можно использовать для точного установления границ и структуры детерминант, а также для идентификации и выделения чистых специфических пептидных фрагментов антигена. [c.306]

Все белки, изученные до сих пор, обладают антигенными св-вами. У белков различают линейные детерминанты, построенные из аминокислотных остатков, расположенных рядом в одном участке полипептидной цепи, и конформационные, к-рые слагаются из аминокислотных остатков разных участков одной или большего числа полипептидных цепей. Антитела, полученные при иммунизации данного животного определенным белком, могут реагировать, хотя и с небольшим сродством, с нек-рыми пептидами, выделенными из гидролизата зтого белка. Такие пептиды, построенные из 5-7 остатков, часто располагаются на изгибах или выступающих отрезках пептидной цепи и, очевидно, являются детерминантами или их частями. Однако в иных условиях, напр, при иммунизации др. вида животного, могут образовываться антитела к иным участкам молекулы того же белкового А. Практически вся пов-сть белковых молекул обладает антигенными св-вами, она, т. обр., представляет собой сумму перекрывающихся детерминант, каждая из к-рых может вызывать иммунную р-цию или не вызывать ее в конкретных условиях. Последние определяются различиями в строении между белковым А, и собственными белками организма, а также регуляторными иммунными механизмами, находящимися под генетич. контролем. По-видимому, почти все детерминанты белков конформационно зависимы. Согласно данным рентгеноструктурного анализа, антигенные детерминанты обладают повыш. подвижностью. [c.174]

Выделение, очистку и концентрирование антигенных токсинов проводят обычными химическими методами. В этих процессах нельзя допустить денатурацию специфического белка (антигена). Чаще всего токсины высаливают растворами нейтральных солей или осаждают спиртом или ацетоном. [c.126]

При введении в кровь человека чужеродных клеток или биополимеров (антигенов) происходит выработка антител, способных специфически связываться с введенными антигенами. При повторном введении антигена могут наблюдаться две различных реакции 1. Антиген взаимодействует с антителом и быстро удаляется из тока крови, в результате чего наблюдается невосприимчивость, например, к заражению бактериями данного вида (иммунитет). 2. Взаимодействие антитела с антигеном сопровождается выделением веществ, возбуждающих нервные окончания, в результате чего происходит резкое повышение чувствительности организма к данному антигену (анафилаксия). В некоторых случаях анафилаксия может приводить к смерти. Подробнее о явлениях иммунитета и анафилаксии см. . [c.604]

Наиболее выпукло способность к узнаванию выражена у белков иммунной системы — уже упоминавшихся в 1.4 иммуноглобулинов, или антител. Иммуноглобулины определенной специфичности начинают активно вырабатываться организмом в ответ на появление чужеродного антигена и обладают способностью избирательно связывать именно этот антиген. Если в роли антигена выступает большая молекула, например молекула белка, то антитело опознает не всю молекулу, а некоторый ее участок, называемый антигенной детерминантой. Белковые молекулы обычно имеют серию антигенных детерминант, и уже по этой причине в ответ на появление в организме чужеродного белка вырабатывается целый набор антител, направленных на разные детерминанты. Более того, к каждой детерминанте вырабатывается, как правило, несколько различных иммуноглобулинов. Поэтому даже иммуноглобулины, специфичные к одному определенному антигену, представляют собой не индивидуальные белки, а смесь большого числа сходным образом построенных молекул. А так как организм непрерывно встречается с разнообразными антигенами, то фракция иммуноглобулинов сыворотки крови представляет собой смесь огромного числа различных антител, причем содержание каждого из них, как правило, очень мало. Трудность выделения индивидуальных иммуноглобулинов долгое время была препятствием для их биохимического исследования, в том числе для установления их первичной структуры. [c.38]

Антигенные свойства выделенной культуры изучают, как правило, с помощью реакции агглютинации (см. подразд. 1.4). [c.35]

Видовую принадлежность аэробных бактерий определяют путем сравнения обнаруженных морфологических, культуральных, биохимических, антигенных и других свойств выделенной культуры со свойствами бактерий известных видов и вариантов. [c.35]

Выделенную чистую культуру идентифицируют по морфологическим, антигенным и биологическим свойствам, определяют ее чувствительность к антибиотикам. [c.126]

Идентификацию выделенной культуры проводят на основании изучения физиолого-биохимических признаков и антигенных свойств (табл. 2.8). [c.133]

На 3-й день исследования чистую культуру выделенных бактерий сеют в среды пестрого ряда и проводят ориентировочную, а потом развернутую РА. Ставят реакции с поливалентной сывороткой, с сыворотками А, В, С, О, Е, и редких групп. При положительном ответе определяют группу, а также, с помощью моно-рецепторных О- и Л-сывороток, полную антигенную формулу (серовар) сальмонеллы. [c.148]

Выход препарата и степень очистки приведены в табл. 5.2. Электрофореграмма очищенного антигена показана на рис. 5.9. Легко заметить, что антиген, выделенный из мозга, выглядит точно так же, как и антиген из селезенки. Небольшие различия по мол. массе обусловлены разным углеводным составом [33]. По сравнению с дезоксихолатным экстрактом выделенный антиген очищен в 110000 раз, что соответствует 170 000-кратной очистке исходного гомогената мозга. При выделении антигена ОХ-45 не было отмечено ни неспецифического связывания, ни утечки антител с колонки, хотя при этом удалось очистить один из компонентов гомогената мозга, содержащийся в очень небольшом количестве. ОХ-45 мозга содержится в основном в мозговых капиллярах [33]. [c.194]

Рис. 5.9. Электрофорез антигенов MR ОХ-45 в 10%-ном полиакриламидном геле в присутствии ДСН. С — антигеи, выделенный из селезенки, М — антиген, выделенный из мозга. Для окрашивания серебром на гель наносили 1,3 мкг белка (дорожки 1, 2 и 5) для окрашивания йодной кислотой — реактивом Шиффа— наносили 5 мкг белка (дорожки 3 и 4). Образцы во всех дорожках, кроме 1, были восстановлены днтнотреитолом

Многие растворимые белки, ферменты в том числе, выделенные из различных тканей животных, обладают антигенными свойствами, т. е. при введении в организм вызывают в нем образование антител. Однако их антигенные свойства (иммуногенность) различаются, что проявляется в разной способности стимулировать продукцию антител. В известных пределах иммуногенность коррелирует с молекулярной массой антигена. Иммунохимически чистые антигены применяются обычно в виде 0,01 — 1,0%-ных растворов, тогда как неочищенные антигены и смеси антигенов приходится вводить в большей концентрации. Слабоиммуногенные антигены необходимо вводить со стимуляторами иммуногенеза, из которых наиболее часто используют адъювант Фрейнда. Антисыворотки против растворимых нативных белков можно получить повторными инъекциями (внутримышечно, подкожно, внут-рикожно) эмульсии раствора белка с адъювантом или внутривенными инъекциями раствора белка без адъюванта. [c.307]

На иммунизацию организм отвечает синтезом очень неоднородной популяции антител, молекулы к-рых могут сильно отличаться друг от друга по сродству к антигену. Такая неоднородность объясняется участием в иммунном ответе очень большой популяции В-лимфоцитов, каждый из к-рых синтезирует лишь одну разновидность молекул антител. С помощью техники гибридом (гибридные клетки, получаемые слиянием злокачественных и нормальных анти-телобразующих клеток лимфоцитов) удается получить в больших кол-вах однородные моноклональные антитела, к-рые широко используют в качестве высокоспецифич. реагентов для обнаружения, локализации и выделения разл. в-в, а также для диагностики и лечения нек-рых заболеваний. Гомог. И. накапливаются в больших кол-вах в крови и моче больных при ряде злокачеств. поражений лимфоцитов (т. наз. миеломные И.). [c.217]

Выделение чистых И. проводится с помощью ионообменных смол с послед, гель-фильтрацией. Для мн. целей используют препараты миеломных И., особенно минорных классов. Антитела выделяют с помощью иммуносорбентов - фиксированных на нерастворимых носителях (напр, целлюлозе) антигенов. Обнаружение и количеств, определение И. разных классов проводят иммунологич. методами с помощью соответствующих антисывороток. Для определения кол-ва антител используют методы преципитации (иммунная р-ция осаждения антигена антителом), агглютинации (взаимод. антитела с двумя клетками), нейтрализации бактерий и вирусов и др. Широкое распространение получают радиоиммунные и ферментно-иммунные методы, обладающие исключительно высокой чувствительностью и позволяющие определять очень малые кол-ва антител (или антигенов) в смесях с др. в-вами. [c.217]

СТАФИЛОКбККОВЫЕ ЭНТЕРОТОКСЙНЫ (СЭТ), токсины, продуцируемые стафилококками. Выделены и изучены четыре типа С.э. со специфич. антигенными св-вами (А, В, С и Р). Наиб, подробно изучен С.э. типа В (ЗЕВ), к-рый выделен в высокоочищенном состоянии (мол. м. 35 380) изучена его первичная структура. Среди аминокислотных остатков в полипептидной цепи токсина больше других представлены остатки аспарагиновой к-ты (17,92% мол. м ), лизина (15,25%) и тирозина (11,2%). ЗЕВ-устойчивое соед., выдерживает кипячение в течение 30 мин. [c.420]

В этих методах используют главным образом фракцию иммунных сывороток или даже антитела, выделенные из этой фракции посредством иммуноаффииной хроматографии, применяя иммобилизированный чистый антиген. Для мечения антител используют также белок А, который связывается специфическим образом с фрагментом F большинства IgG в этом случае сам белок А маркируют коллоидным золотом такая техника практикуется в электронной микроскопии [95]. [c.106]

Весьма интересная в методическом отношении особенность антител иммунных сывороток заключается в их способности узнавать иммуноген, даже если изменились некоторые его физикохимические свойства. Например, противоферментные антитела зачастую распознаются в неактивной форме, а причинами неактивного состояния могут быть действие ингибитора, точковая мутация, удаление простетической группы или присутствие фермента в форме предшественника [1, 23]. Это свойство использовалось для изучения различных (физиологических, биохимических, генетических) аспектов при исследовании растительных ферментов [26]. Другой пример такого свойства продемонстрирован способностью специфических антител очищенных белков, выделенных из экстрактов растительных органов, реагировать с белками, синтезированными in vitro, особенно с теми из них, которые в избытке содержат сигнальный пептид однако примеры, которые дали исследования по молекулярной биологии растений, показали, что в данной области возможны отклонения от этого свойства [29], и поэтому в некоторых случаях для формирования конкретной антигенной структуры необходимы определенные посттрансляционные Модификации. [c.115]

Лектины. От 5 до 10 % массы белков, выделенных из листьев термокоагуляцией, связаны с моносахаридами (6 % у люцерны). Значительную часть определенной фракции этой массы составляют арабиногалактаны [30]. Известно о существовании в листьях белков-арабиногалактанов, которые реагируют с антигеном Ярива (1аг1у [118]) и называются (3-лектинами [12, 13]. Эти белки содержат гидроксипролин, который не был обнаружен в препаратах белков листьев, также как не упоминалось возможное антипитательное действие, отмечавшееся у других лектинов. [c.258]

В агаровом геле или на ацетат-целлюлозной мембране белковый антиген и специфические антитела диффундируют навстречу друг другу и образуют в месте контакта линии преципитации, которые можно видеть невооруженным глазом или выявить специальным окрашиванием. При анализе двух белковых смесей, например двух разных сывороток или выделенных нативных белков, с помощью этого метода можно не только узнать число индивидуальных белков, присутствующих в нашей системе, но и получить данные об их имму-нохимической идентичности, родственности или различиях. Все эти выводы могут быть сделаны на основании числа и взаимного расположения линий преципитации. [c.20]

Заслуживает особого внимания применение высокомолекулярных комплексообразователей для выделения полисахаридов. Простейшим примером могут служить комплексы целлюлозы с амилозой или растительными галактоманнанами , образование которых объясняется сходством линейно построенных молекул этих соединений. Некоторые белки образуют нерастворимые комплексы с полисахаридами, например, кон-канавалин-А осаждает гликоген и некоторые другие высокоразветвлен-ные полисахариды . Наиболее избирательным методом осаждения полисахаридов является действие соответствующих антисывороток , применяемое в аналитических и, гораздо реже, в препаративных целях (подробнее об антигенных свойствах полисахаридов и явлении иммунитета см. стр. 518 и 604). [c.485]

Важную роль в защитных реакциях организмов играют гликопротеины плазмы крови [36]. Непосредственным участником защитной иммунной реакции в организме является так называемый комплемент , который, соединяясь с комплексом антиген— антитело, вызывает разрушение чужеродных клеток. Комплементарные системы играют защитную роль при воспалительных и аллергических реакциях биологичес(шх организмов. Они способны снижать гемолитическую активность при активации или ингибировании систем. К числу антикомплементарных полисахаридов относятся вещества, выделенные из китайской травы [67]. Два из них были экстрагированы горячей водой и оказались разветвленными арабиногалактанами, содержащими в разветвленной части макромолекулы остатки галактозы и арабинозы. [c.266]

Несмотря на многообразие и высокую разделяющую способность методов, описанных в 7.1, они оказываются бессильными при решении задач по выделению индивидуальных компонентов из сложных биологических смесей. Уже отмечалось, что иммуноглобулиновая фракция сыворотки крови состоит из тысяч различных антител, которые весьма сходны по общей структуре, что не дает надежды разделить смесь на индивидуальные компоненты традиционными методами, основанными на различиях тех или иных физико-химических характеристик компонентов. Единственным заведомым отличием каждого индивидуального иммуноглобулина является его специфичное сродство к определенному антигену. То же самое имеет место в случае смеси мРНК, которые несущественно различаются по нуклеотидному составу. Тем не менее они имеют различные нуклеотидные последовательности и соответственно могут обладать селективным сродством к олигонуклеотидам или нуклеиновым кислдтам с комплементарными последовательностями. [c.246]

Важной группой аффинных сорбентов являются иммобилизованные антитела, или антигены. В первом случае сорбенты могут бьпъ использованы для специфического выделения определенных антигенов, или гаптенов, из сложных смесей. В этом случае эти сорбенты называют иммумосорбентами. Во втором случае иммобилизованные антигены способствуют выделению антител с определенной специфичностью из сложной смеси антител. [c.248]

Новые возможности для специфичного выделения отдельных фрагментов белка открылись а связи с разработкой техники моноклональных антител (рис. 15). Иммуносорбенты на основе моноклональных антител к различным участкам белковой молекулы могут быть использованы для селектианого выделения пептидных фрагментов, несущих антигенные детерминанты этих антител. Поскольку в основном антигенные детерминанты находятся во фрагментах полипептидной цепи, располагающихся на поверхности глобулы, метод применяется также для изучения топографии белков. [c.56]

На третьем этапе из выросшей на скошенном агаре культуры делают мазки, окрашивают их по Граму. О чистоте ьсультуры судят по однородности роста, формы, размера и окраски микроорганизмов. Для идентификации выделенной чистой культуры, кроме изучения морфологических, тинкториальных и культуральных особенностей микроорганизмов, необходимо определить их ферментативные и антигенные свойства, фаго- и бактериоцино-чувствительность, токсигенность и другие признаки, характеризующие их видовую специфичность. [c.32]

На четвертом этапе выросшую на среде Китта — Тароцци культуру проверяют на чистоту и идентифицируют по морфологическим, культуральным, биохимическим, антигенным и другим свойствам (см. выше). Иногда для идентификации выделенных культур (или прямого обнаружения анаэробов в исследуемом материале) методом газожидкостной хроматографии определяют характерные метаболиты анаэробного дыхания — летучие жирные кислоты (рис. 1.9) [c.38]

Серологическое исследование. Серодиагностику проводят при хронической гонорее, когда у больного отсутствуют выделения и провести бактериоскопическое или бактериологическое исследование не представляется возможным. В этих случаях сьгеоротку крови больного исследуют в РСК или РНГА со стандартным гонококковым антигеном. [c.122]

При идентификации и дифференциации выделенных культур учитывают их тинкториально-морфологические, антигенные и другие свойства. При окраске по Граму вместо сафранина лучше использовать фуксин (в этом случае лучше видны тонкие бледно-розовые палочки). Возбудители легионеллеза, как правило, не дают флюоресценции при облучении длинноволновым ультрафиолетом, [c.137]

Через 18 — 24 ч инкубации при 37 °С изучают характер колоний на плотных средах (см. цв. вклейку, рис. 7, а). Эшерихии патогенных сероваров по культуральным свойствам и способности ферментировать лактозу не отличаются от банальных эшерихий, обитающих в кишечнике человека (за исключением лактозоотрицательных ЭИКП). Поэтому принадлежность выделенных микроорганизмов к патогенным группам вначале устанавливают по антигенной структуре с помощью РА. При этом отмечают на среде любые 10 лактозоположительных колоний и агглютинируют их на стекле смесью ОА -сывороток патогенных серогрупп . Смесь готовят таким образом, чтобы конечное разведение каждой сыворотки составляло 1 10. Отрицательная РА свидетельствует об отсутствии патогенных Е. соИ. [c.141]

Таким образом, диагностику эшерихиозов проводят преимущественно путем выделения возбудителя, его идентификации и дифференциации с непатогенными эшерихиями (по антигенным и патогенным свойствам). [c.145]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология