Ионообменники в аффинном элюировании

В методе аффинного элюирования наиболее часто используемыми полимерами являются ионообменники. Если сорбируемая молекула связывается с помощью групп, расположенных в связывающем участке фермента, то любой ионообменник может рассматриваться в качестве аффинного полимера, содержащего Oi6-щие лиганды . Когда образуется комплекс белка со свободным аффинным лигандом, заряженные группы в его связывающих центрах становятся защищенными от взаимодействия с ионообменником. Это защита может быть обусловлена стерическими факторами или, в наиболее благоприятных ситуациях, нейтрализацией противоположными зарядами на аффинном лиганде. Если различия в доступности заряженных групп в ферменте и в комплексе фермент — аффинный лиганд значительны, то фермент [c.160]

Наряду с различиями в зарядах фермента и фермент-субстрат-ного комплекса на эффективность элюирования влияют также сила связи между ферментом и ионообменником и сродство фермента к аффинному лиганду. Имеют место взаихмозависимые равновесия фермента Е, связанного с ионообменником 1Е [уравнение (7.1)], н фермента, связанного с лигандом Е в растворе [уравнение (7.2)] [c.161]

Описанный метод получил дальнейшее развитие, и на его основе был разработан прием аффинной хроматографии [122], который сводится к тому, что в буферный раствор добавляют лиганд, изменяющий адсорбционные характеристики. Будь то гидрофобные адсорбенты или агароза, принципы аффинной хроматографии остаются теми же, что и в случае использования более специфических адсорбентов (разд. 4.5) или ионообменников (разд. 4.4). Сначала в отсутствие лиганда находят условия, которых еще не вполне достаточно, чтобы вызвать нужный эффект (в данном случае элюцию). Затем добавляют лиганд, что слегка нарушает установившееся равновесие и приводит к ожидаемому эффекту. Важно, чтобы при добавлении лиганда происходило заметное изменение существенного для очистки свойства, в данном случае — гидрофобного взаимодействия. Лиганд должен сохранять способность связываться с ферментом в условиях, существующих в колонке, т. е. при высокой концентрации соли. Примером аффинного осаждения может служить очистка некоторых тРНК-аминотрансфераз [122] связывание крупной молекулы тРНК приводит к заметному снижению адсорбционной способности колонки, что позволяет осуществлять элюирование. [c.187]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология