Элюирование с ионообменников

Таким образом, к категории слабых могут быть отнесены ионообменники, значительно отличающиеся друг от друга. Для них характерно не толыко сужение рабочего диапазона pH, но и уменьшение прочности сорбции вещества внутри этого диапазона. Слабым ионообменникам, в частности анионитам с замещающими группами диэтиламиноэтила (ДЕАЕ), отдают предпочтение в тех случаях, когда необходимо элюирование в мягких условиях, например, при разделении белков и пептидов. [c.35]

Устройство приборов для хроматографии и осуществление самого эксперимента сравнительно просты. Выбрав подходящую систему ионного обмена и проведя рекомендованную обработку (регенерацию) ионообменника, при идентичных условиях элюирования (скорость потока, температура и т. д.) можно получать хорошо воспроизводимые хроматограммы. Благодаря этому фракционирование белков с помощью ионообменной хроматографии имеет широкое распространение. [c.23]

Подготовка системы для градиентного элюирования. В качестве смесителя используют колбу на 0,5 л со стартовым буферным раствором (0,02 М фосфатный буфер pH 8,0). Резервуар, образующий замкнутую систему со смесителем, представляет собой сосуд объемом 1 л, заполненный О,ЗМ буферным раствором. Непрерывную подачу буферного раствора на колонку осуществляют с помощью насоса. Открыв выходное отверстие, понижают уровень буферного раствора в колонке до уровня геля. Затем на ионообменник аккуратно, стараясь не взмутить верхний слой геля, наносят фракционируемую сыворотку, которую предварительно в течение суток диализуют против стартового буферного раствора. Нанесенный образец смывают тремя порциями стартового буферного раствора по 2 мл и приступают к хроматографии. Для фракционирования 3 мл сы- [c.216]

Для полного превращения ионообменников в Н-форму из форм тех ионов, которые располагаются в ряду селективности после ионов Н +, необходим небольшой (по сравнению со стехиометрией) избыток сильной минеральной кислоты. Для других ионных форм требуется значительно больший избыток кислоты. Второй путь превращения смолы в Н-форму — предварительное элюирование катионов подходящим комплексообразующим веществом. [c.34]

Эти ионообменники содержат цепи с кислотными и основными ионогенными группами, которые имеют противоположный заряд и нейтрализуют друг друга. При контакте смолы с раствором электролита происходит ионный обмен, в результате которого оба типа ионов, присутствующих в растворе, поглощаются смолой. Последующее промывание ионообменника водой приводит к элюированию сорбированных ионов. [c.38]

В процессе ионообменного хроматографического разделения часто происходит расширение зон, обусловленное медленной диффузией внутри частиц ионообменника. Это приводит к замедлению установления равновесия при распределении компонентов между стационарной ц подвижной фазами при элюировании. [c.59]

Существует много типов лабораторных колонок. Наиболее часто используемые типы показаны на рис. 4.1. Колонка а пригодна для обработки большого количества ионообменника или для простого разделения большого количества смеси нескольких ионов. Колонка б снабжена кожухом для термостатирования колонки при более высоких или низких температурах по сравнению с температурой окружающей среды. Кран заменяют выпускным капилляром, который помещают выше верхнего уровня обменной колонки. Это устройство предотвращает спонтанное вытекание жидкости из колонки (уровень жидкости автоматически поддерживается выше уровня смолы в колонке). Колонка д действует подобным образом. Устройство в обеспечивает возможность промывания колонки из бокового отверстия. Устройство типа г позволяет жидкости проходить в нижнюю часть колонки и затем подниматься вверх через обменник. Колонка е снабжена воронкой, которая служит резервуаром в тех случаях, когда требуются большие количества жидкости для сорбции или элюирования сорбированных ионов. Для аналитической работы наиболее часто используют колонки типа б ид. [c.122]

Применение ионообменников в аналитической химии. Константы элюирования различных элементов в солянокислых растворах [321]. [c.223]

Разработка автоматических анализаторов аминокислот с применением ионообменников и элюированием буферными растворами с возрастающими значениями pH позволяет в настоящее время работать с приборами, производящими за несколько часов полный количественный анализ любого белка (для навески в 5 мг) с точностью до 1%. [c.509]

Разделение редкоземельных элементов на жидких ионообменниках. IV. Разделение редкоземельных элементов методом бумажной хроматографии с обращенными фазами, основанное на комплексообразовании при элюировании. [c.525]

В случае колоночной хроматографии ионообменники работают в условиях, далеких от насыщения. Например, при сорбции белков емкость ионита составляет не более 5—10% от его полной емкости. Образец следует вносить в колонку в небольшом объеме только в том случае, если все операции (приведение в равновесие колонки и элюента, растворение образца и элюирование) проводят в одном, рабочем буферном растворе. Если элюирование будут вести в градиенте pH или ионной силы, образец можно вносить в большом объеме разбавленного раствора. [c.434]

Элюирование в градиенте является удобным методом поиска оптимальных условий разделения сложной смеси. В этих условиях белки либо сорбированы на ионите, либо вообще не удерживаются матрицей, т. е. Rf может принимать значения либо О, либо 1 [19]. Поиску оптимальных условий элюирования может способствовать тот факт, что белки, сорбированные на карбоксилсодержащих ионообменниках, элюируются при ионной силе примерно 0,1 буферным раствором, значение pH которого отличается от изоэлектрической точки белка на 0,4—0,6 [20]. [c.436]

Белок Источник Ионообменник Исходный буферный раствор Рабочие буферные растворы Элюирование Литера- тура [c.444]

Большим шагом вперед в развитии хроматографического метода было применение в качестве адсорбирующего материала катионных ионообменников, папример сульфированных полистирольных смол (дауэкс. 50). Элюирование производится буферными растворами с прогрессивно возрастающим pH. При этом получается непрерывная кривая, причем каждая аминокислота проявляется в виде пика (рис. 27). Для анализа необходимы 3—6 мг белка, при этом метод является практически количественным (Мор и Штейн, 1951 г.). Для выполнения этих анализов применяются автоматические приборы. [c.419]

В методе аффинного элюирования наиболее часто используемыми полимерами являются ионообменники. Если сорбируемая молекула связывается с помощью групп, расположенных в связывающем участке фермента, то любой ионообменник может рассматриваться в качестве аффинного полимера, содержащего Oi6-щие лиганды . Когда образуется комплекс белка со свободным аффинным лигандом, заряженные группы в его связывающих центрах становятся защищенными от взаимодействия с ионообменником. Это защита может быть обусловлена стерическими факторами или, в наиболее благоприятных ситуациях, нейтрализацией противоположными зарядами на аффинном лиганде. Если различия в доступности заряженных групп в ферменте и в комплексе фермент — аффинный лиганд значительны, то фермент [c.160]

Загрязнения образца, обусловленные неподвижными фазами, являются результатами химической нестабильности или разрушения насадки или одновременного элюирования загрязнений, содержащихся в матрице насадки. Первая ситуация, вероятно, наблюдается при использовании привитых силикагелей или ионообменников (на основе смол или силикагеля). Например, почти все доступные сейчас привитые фазы на основе силикагеля получают с силоксановой связью —Si—О—Si— между матрицей силикагеля и привитой группой на поверхности. Хотя эта связь является термически стабильной (допускает использование определенных связанных фаз в газовой хроматографии), реакции, используемые для ее получения, обратимы [116, 117]. Эта часто не принимаемая во внимание характеристика обусловливает гидролитическую нестабильность, которая становится значительной в кислотных или щелочных условиях. Часто случается, что условия, ускоряющие гидролиз привитой фазы (например, очистка пептидов на ig с использованием водной подвижной фазы, содержащей трифтороуксусную кислоту при pH 2- 3), способствуют также удерживанию продуктов гидролиза на насадке (например, октадецилдиметилсиланол удерживается на is в водном растворе). При этом образуется in situ поверхностная фаза с разделительными свойствами, [c.75]

У большей части белков в процессе хроматографии сразу происходит изменение величины К[От О до 1.Это вызвано тем, что белки либо прочно сорбируются на ионообменнике, либо выходят с элюирующим буферным раствором, поскольку происходит одновременная взаимная нейтрализация многочисленных реакций взаимодействия между белком и ионообменником при данных pH и ионной силе раствора. Поэтому важно тщательно подбирать буферный раствор для ионообменной хроматографии белка. Ионообменную колонку обычно загружают при низкой ионной силе раствора. Для катионообменника оптимальная величина pH равна 4—5, для анио-нообменника 7—8- Элюирование с колонки катионообменника происходит при увеличении pH буферного раствора, а с колонки анионо-обменника — при уменьшении pH. В том и другом случае с изменением pH можно увеличивать ионную силу. Изменение pH и ионной силы элюирующего буферного раствора можно производить поэтапно (ступенчатое элюирование) или непрерывно (градиентное элюирование). [c.22]

При работе с КМ-целлюлозой в NH -форме удобно реализовать возможность (в), поскольку связывание со смолой в NHf-форме довольно слабое, и это позволяет вести элюирование в мягких условиях, не повреждая полипептидные цепи. При хроматографии на КМ-целлюлозе обычно используются буферные растворы с pH 4—6,5 и молярностью 0,01—0,5 М. Если, например, в качестве стандартного раствора выбран 0,01 М аммонийацетатный буферный раствор pH 4, им же следует уравновесить КМ-целлюлозу. Однако иногда при переводе ионообменника из Н -формы в ЫН -форму возникают затруднения. Чтобы ускорить этот процесс, рекомендуется предварительно отмытую КМ-целлюлозу в течение по меньшей мере 10 мин перемешивать с 10 объемами стартового буферного раствора. Суспензию оставляют для отстаивания и надосадочную жидкость декантируют. Размешивание в стартовом буферном растворе повторяют до тех пор, пока pH и электропроводность надосадочной жидкости не станут стабильными. После этого заполняют колонку КМ-целлюлозой в стартовом буферном растворе и уплотняют смолу до ее конечного объема. [c.201]

Через колонку пропускают 1,5 объема (относительно объема ионообменника) 0,01 М аммонийацетатного буферного раствора и начинают градиентное элюирование при постоянном pH 6,7, увеличивая молярность от 0,01 до 0,5 М, а затем при необходимости от [c.213]

Поэтому до настоящего времени не нашли широкого распространения в области полисахаридов такие виды хроматографии, как распределительная и адсорбционная (отдельные примеры см." ). Более успешным оказалось применение ионообменной хроматографии для разделения кислых и даже нейтральных полисахаридов. Ионообменниками служат обы.ч,но аниониты, полученные модификацией целлюлозы, например ДЭАЭ-целлюлоза. Для элюирования полисахаридов с колонок используют растворы солей или буферные растворы разной концентрации прочно удерживаемые полисахариды элюируют разбавленными растворами щелочей. Таким споссбом легко удается отделить кислые полисахариды от нейтральных, например, пектиновую кислоту от сопутствующего ара-бинана или сульфированные полисахариды водорослей от крахмалоподобных примесей в ряде случаев при таком способе разделения удается освободиться от примесей белка. Нейтральные полисахариды можно разделить, применив ДЭ.ЛЭ-целлюлозу в боратной форме, при вымывании боратным буфером . Описано также успешное применение ЭКТЕОЛА- [c.486]

Приведенные уравнения действительны только в области небольших изменений pH. Для одновременного получения линейного градиента pH и градиента концентрации (практически во всем интервале pH)/ применяют так называемый последовательный градиентный метод элюирования (29, 30]. При использовании градиентного элюирования важно знать положение пика на хроматографической кривой. Шваб и др.[31] вывели уравнения, применимые к ионообменникам. Математические выра . ения, описывающие положение и ширину зон веществ, разделяемых хроматографическим методом, предложены Фрайлигом [32]. [c.66]

Поток жидкости обычно регулируют краном, помещенным в нижней части колонки. При использовании колонок небольщого поперечного сечения поток регулируют давлением, необходимым для преодоления гидродинамического сопротивления слоя ионообменника. В этом случае в кране нет необходимости. Если колонка снабжена краном, то необходимо обеспечить минимальный объем пространства между поддерживающим диском и отверстием колонки. Выще уровня смолы в колонке должно находиться определенное количество жидкой фазы. Рекомендуется, чтобы высота слоя жидкости составляла 10 — 25% высоты колонки. Однако в случае непрерывного градиента элюирования это пространство (представляющее часть мертвого объема) должно быть сведено к минимуму. [c.121]

Ионообменное концентрирование имеет ряд преимуществ по сравнению с другими методами концентрирования. Оно отличается простотой исполнения и возможностью полного, группового или индивидуального элюирования элементов, сорбированных ионообменником, с помощью соответствующих элюентов. Однако во многих случаях нет необходимости элюировать сорбированные элементы — смолу озоляют и определяют исследуемые элементы в золе. Можно также определять элементы непо-хрбдственно в смоле соответствующим инструментальным методом. [c.146]

Комплексные ферроцианиды цинка, кобальта, никеля, молибдена, ванадия и вольфрама также проявляют высокую селективность к ионам цезня [19-24]. По аналогии с другими неорганическими ионообменниками их селективность повышается в ряду Li < Na < К < Rb s. Так как сродство к ионам s у некоторых неорганических ионообменников чрезвычайно велико, s очень трудно элюировать из обменника. В этом случае в качестве элюентов используют концентрированные растворы нитратов аммония, серебра или ртути(П). Если количественное элюирование цезия этими растворами невозможно, рекомендуется проводить химическое или термическое разложение обменника. Цезий не поглощается Th[Fe( N)g] и Zr[Fe( N)g] и лишь слабо сорбируется на (ThO)2[Fe( N)e]. [c.158]

Методика. Разделение выполняют в колонке, заполненной ионообменником Dowex 1-Х4 (0,30—0,15 мм), предварительно приведенным в равновесие с раствором аскорбиновой кислоты в НС1 (1 г аскорбиновой кислоты рг творяют в 100 см 5 М НС1). Около 1 г образца растворяют в мерной колбе емкостью 25 см в 5 см смесн 5 М НС1 — аскорбиновая кислота указанного состава (раствор должен быть всегда свежеприготовленным). Смесь прибавляют порциями по 0,5 см . Растворение ведут при осторожном нагревании (смесь не должна кипеть). Раствор охлаждают и пропускают через колонку. Плутоний элюируют примерно 20 см смеси 5 М НС1 — аскорбиновая кислота со скоростью 4 см /мии. В процессе элюирования окраска элюата меняется. Галлий элюируют 50 см 0,5 М НС1. [c.217]

ТСХ-пластины для распределительной ТСХ с химически связанными фазами имеют преимущества перед импрегнирован-ными не требуется насыщения элюента неподвижной фазой, разделяемые вещества не загрязняются неподвижной фазой, характеризуются более воспроизводимыми величинами / /, меньше влияют на результаты остаточные силанольные группы. Пластины для тех с диольной химически связанной фазой по хроматографическим свойствам близки к пластинам с немодифицированным силикагелем. Однако адсорбционная активность гидроксилов, а следовательно, и удерживание на диольных пластинах слабее. Элюенты для ТСХ на диольных и обычных силикагелевых пластинах близки по составу. Это обычно органические растворители с добавками кислот или оснований. Пластины для ТСХ с нитриль-ными группами в зависимости от используемых элюентов могут быть применены как для прямофазной, так и для обращенно-фазовой с разным порядком элюирования разделяемых соединений. Эти сорбенты могут также применяться для ион-парной хроматографии. ТСХ-пластины с аминогруппами являются слабоосновным ионообменником. Эти пластины можно применять для разделения веществ с разными суммарными зарядами ионизированных групп и различающихся гидрофобностью заместителей [c.344]

Последовательность элюирования отдельных соединенрш должна определяться их зарядом, однако на практике она часто не соответствует теоретически ожидаемой. В качестве причины указывают на адсорбирующее действие ионообменника [18, 22]. Пурины вообще адсорбируются сильнее пиримидинов. Можно, например, наблюдать, что производные урацила элюируются раньше производных гуанина, хотя на основании общего заряда этих соединений можно было ожидать обратной последовательности. [c.446]

Размер органических ионов может различаться в 100 или даже 1000 раз поэтому очень важным фактором становится размер пор ионообменника. Эта характеристика зависит от степени поперечной сшивки и от набухаемости, которая при использовании юрганических растворителей (применяемых в том случае, когда разделяемые компоненты плохо растворимы в воде) может быть небольшой. Кроме того, органические вещества могут поглощаться за счет молекулярной адсорбции. По этим причинам не всегда можно предсказать порядок элюирования. [c.489]

Разделение многоатомных спиртав (ксилитов, глицерина и этиленгликоля) проводили методом колоночной хроматографии на катионообменной смоле (Ки-2) с применением воды для элюирования [22]. На колонке, наполненной дауэксом 50-Х 12 (200—400 меш) или КН-2 со степенью сшивки 12%, разделяли смесь многоатомных спиртов. В качестве подвижной фазы использовалась вода при температуре 60 °С. Компоненты элюировались в следующем порядке ксилит, эритрит, глицерин, этилен-гликоль и пропандиол-1,2. Разделение занимает 24—26 ч. Фракции анализировали на рефрактометре Аббе или колориметрически после окисления бихроматом. Наилучшие результаты разделения были получены в случае, если использовали ионооб-менники в Н+-форме. На ионообменниках в Са +-форме наблюдается изменение в последовательности элюирования. Так, ксилит сорбируется на таких обменниках селективно и, следовательно, элюируется последним. Было также предложено разделение малых количеств ксилита и этиленгликоля на катионооб-менниках со свободным Н+. Этот метод можно использовать для аналитического контроля при крупнотоннажном гидролизе сахаров и многоатомных спиртов. [c.31]

О первом успешном разделении уроновых кислот на ионообменниках сообщается в работе Кима и Догерти [152]. Они разделили галактуроновую и глюкуроновую кислоты на дауэксе-1 (СНзСОО -форма) с применением в качестве подвижной фазы 0,15 М уксусной кислоты. Свободные сахариды (арабиноза и галактоза), которые не адсорбировались на смоле, отбирали в виде первой фракции. В другой работе [153] описывается отделение глюкуроновой и маннуроновой кислот друг от друга и от не полностью разделенной смеси глюкуроновой и галакту-роновой кислот на колонке (45x2 см) с дауэксом 1-Х8 (СНзСОО -форма) методом линейного градиентного элюирования уксусной кислотой (0,5—2,0 М.) при скорости подвижной фазы 0,3—0,5 мл/мин. [c.115]

Для элюирования альдоновых и уроновых кислот первоначально использовали 0,05 М раствор уксуснокислой меди (II) (см. также гл. 22). Альдоновые кислоты образовывали прочные комплексы, которые не сорбировались и, следовательно, легко элюировались. Уроновые кислоты элюировались значительно позднее. Следовательно, условия для группового разделения альдоновых и уроновых кислот и последующего выделения некоторых уроновых кислот являются благоприятными. Однако удовлетворительного разделения достигнуто не было, так как уроновые кислоты окислялись с одновременным образованием закиси меди [42, 43]. По этой причине Ларссон и сотр. [44] в качестве комплексообразующего агента использовали 0,05 М раствор ацетата цинка. Было достигнуто разделение галактоно-вой, молочной, галактуроновой, глюкуроновой, муравьиной и пировиноградной кислот на дауэксе-1 с диаметром частиц 40— 60 мкм, а смесь галактоновой, арабоновой, гликолевой, леву-линовой, глюкуроновой, глиоксиловой и муравьиной кислот хорошо разделялась на анионообменнике даже с более мелкими частицами (13—18 мк). Так как большинство кислот образуют несорбируемые комплексы с ионами Zn , то коэффициенты распределения были значительно ниже, чем в растворах ацетата натрия. Порядок элюирования дан при постоянстве констант комплексных соединений и селективности коэффициентов анионов, не образующих комплексные соединения. Коэффициенты разделения некоторых кислот отличались до некоторой степени на обеих колонках с разными размерами частиц ионообменников [c.171]

В той же работе [3 описано разделение трехкомпонентной смеси нитроалканов на колонке со смолой марки дауэкс-50 при применении в качестве подвижной фазы раствора сульфата аммония. Порядок элюирования компонентов следующий нитрометан, 2-нитропропан, 1-нитробутан. Размеры колонки 11,5Х Х0,7 см, скорость подвижной фазы не превышает 9 мл/ч. На этом же ионообменнике можно проводить разделение с изменением температуры. При 25 °С с применением в качестве элюента 1 М раствора сульфата аммония сначала вымываются нитрометан, 2-нитропропан и 1,3-динитропропан. После повышения температуры в рубашке колонки до 71 °С 0,5 М раствором сульфата аммония вымываются 1-нитробутан и 1-нитропропан. [c.297]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология