Остерман

Лев Абрамович Остерман ХРОМАТОГРАФИЯ БЕЛКОВ И НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ [c.2]

Здесь т — масса молекулы в граммах (ее можно выразить через молекулярную массу и число Авогадро N m MIN), — плотность материала частицы, р — плотность среды, uj — угловая скорость вращения ротора иг — расстояние частицы от оси вращения [Остерман, 1981]. В пробирке центрифуги молекула движется со скоростью, отвечающей равенству сил ( ц = Р ). Приравняв выражения (32) п (33) и введя величину коэффициента седиментации [c.148]

Остерман Л. А. Исследование биологических макромолекул электрофокусированием, иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами. М. Наука, 1983. [c.218]

Свойства агарозы были рассмотрены в первой книге >той серии, посвященной электрофорезу [Остерман, 19811. Однако ввпду центральной роли, которую играют агарозные матрицы в иекотор .г хроматографических методах (гель-фнльтрация, аффинная хроматография), имеет смысл привести здесь некоторые данные еще раз. Как и [c.53]

Использование гель-фильтрации для освобождения от радиоактивных предшественников неоднократно цитировалось при описании методов введения радиоактивной метки в белки и нуклеиновые кислоты [Остерман, 1983]. Нередко обессоливание используют и на заключительном этапе очистки для освобождения не только от соли, но и от прочих низкомолекулярных примесей. Например, в одной из работ по выделению РНК-полимеразы очисткой белка на биогеле А-1,5т завершалась целая серия операций, включавшая различные варианты переосаждений белка и ионообмениой хроматографии [Vaisius, Horgen, 1979]. [c.138]

Скорость течения жидкости (скорость элюции) можно регулировать наклоном пластины (обычно в диапазоне 5—20°). Для проявления результатов фракционирования удобнее всего воспользоваться методом снятия реплики. На влажный гель на 1 мин кладут листок толстой фильтровальной бумаги ( Whatman 3 ММ ) и прижимают его стеклянной пластиной. За это время жидкость из пространства между гранулами переходит на бумагу, а вместе с ней — и макромолекулы, находившиеся в подвижной фазе каждой хроматографической зоны. Фильтровальную бумагу затем подсушивают и пятна на ней выявляют одним из многочисленных методов окраски белков или НК, путем регистрации ферментативной активности, радиоактивности, иммунными методами и т. д. Все эти методы выявления были подробно рассмотрены при описании электрофореза и иммуноэлектрофореза [Остерман, 1981, 1983]. [c.163]

Реакция присоединения данзилхлорида но первичным аминогруппам давно используется для флюоресцентной метки пептидов и аминокислот [Остерман, 1981]. Как и в случае ОФА, при этом одновременно существенно увеличивается степень гидрофобности аминокислот, что улучшает возможности их хроматографии и повышается чувствительность детектирования. Существенным недостатком ме- [c.195]

Обозначения миноров и сведения об их структуре и функциях можно найти в обзоре [Остерман, 1980]. Скорость элюции была уменьшена до 0,8 мл/мин, а градиент концентрации метанола был бопее пологим — 0,3% в минуту. [c.208]

Наличие некоторых примесей или специально добавленных реагентов может существенным образом изменять характер элюции НК с оксиапатита. Например, присутствие ионов ртути и особенно серебра в комплексе с ДНК существенно затрудняет элюцию однонитевой ДНК. Эти ионы нередко используют при фракционировании ДНК ультрацентрифугированием в градиенте концентрации sjSO [Остерман, 1981]. Если такая операция предшествовала очистке ДНК на оксиапатите, то следует принять специальные меры для удаления этих ионов [Markova et al., 1978]. [c.238]

Использование белков-антигенов в качестве лигандов для очистки специфических антител на иммуносорбентах было описано в предыдущей книге этой серии [Остерман, 1983]. Там же была рассмотрена возможность связывания любых антител на матрице, несущей белок А из Staphylo o us aureus. Обе эти системы с полным правол можно включить в перечень аффинных хроматографических систем. Естественно, что иммуносорбенты используются и в обратном варианте, когда с помощью лигандов-антител производится очистка антигенов белковой природы пли гаптенов. [c.362]

С помощью добавленного в следовых количествах радиоактивно меченного IgG эффективности посадки IgG оценили в 60%. Использование сорбента в опытах с применением конкурентного радиопм-мунного метода (КРИМ см. [Остерман, 1983]) показало, что при посадке на сефарозу сохраняется около 35/о активности такого же количества IgG в растворе. [c.379]

Многочисленные примеры из обширной области использования иммуносорбептов обоих типов (с иммобилизованными антптеладпт и антигенами) были приведены в предыдуш ей книге данной серии [Остерман, 1983], поэтому мы ограничимся лишь тремя примерами, относящимися к рассматриваемой проблеме аффинной очисткп нуклеиновых кислот, С помощью иммуносорбентов здесь удается решить довольно своеобразные задачи. [c.449]

После окончания разделения в первом направлении пластинку высушивали, вымачивали в метаноле, снова подсушивали и начинали элюцию во втором направлении (тоже с удлинительным фитилем). Элюцию начинали водой до старта, а затем 0,3 М водным раствором сульфата аммония вплоть до продвижения фронта элюента на 4—5 см по фитилю. Пятна локализовали авторадиографией, затем вырезали и просчитывали радиоактивность методом регистрации черепковского излучения [Остерман, 1983]. На рис. 166 представлено окончательное расположение хроматографических пятен. Несколько неожиданным является сильно сдвинутое вправо положение пятна рТр. По-видимому, 0,3 М сульфат аммония легко вытесняет все нуклеозиддифосфаты из ионной связи с PEI, и решающую роль в определении скорости миграции начинает играть сорбция оснований на целлюлозе. Метильная группа тимина препятствует сорбции. В пользу такой трактовки говорит и соотношение положений пятен рСр и рт Ср. рТр обгоняет рт Ср вероятно, по той причине, что рТр уже движется вслед за фронтом элюции во втором направлении, когда этот фронт еще только достигает пятна рт Ср и начинается растворение находящегося в нем материала. [c.492]

Далее проводили фосфорилирование всех олигонуклеотидов по 5 -концам радиоактивным фосфором за счет [7- PlATP с помощью Т4-полинуклеотидкпназы. Смесь меченых олигонуклеотидов разделяли электрофорезом в ПААГ, получая лестницу полос, как было описано при рассмотрении электрофореза [Остерман, 1981]. В отличие от методов секвенирования ДНК здесь каждой полоске ( перекладине лестницы ) соответствует фрагмент, укороченный точно на один нуклеотид по сравнению с фрагментом предыдущей полоски. Как и при секвенировании ДНК, меченые гидролизаты наносили в параллельные треки со сдвигом по времени в 4, 8 и И ч, а весь электрофорез проводили в течение 14 ч, с тем чтобы лучше разрешить разные по длине фрагментов участки лестницы . [c.508]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология