Кумасси-красители

Белки могут связываться с некоторыми красителями, в результате чего происходит сдвиг полос поглощения последних. В описываемой ниже методике в качестве красителя используют кумаси яркий синий. Этот краситель существует в двух видах его красная анионная форма переходит в синюю, когда краситель присоединяется к аминогруппам белков. Протекающие при этом реакции в большинстве случаев более чувствительны и менее подвержены вредному воздействию многих соединений, ограничивающих применение других способов определения белка [78]. Эксперимент с применением красителя занимает гораздо меньше времени, чем процедуры в описанных выше методиках. Чувствительность реакции с красителем сравнима с чувствительностью метода Лоури. Она меньше зависит от вида белка по сравнению с цветными реакциями в описанных выше методиках. [c.360]

Для окраски электрофореграмм наиболее часто применяют следующие красители для белков — амидошварц 10 В, кумаси, бромфеноловый синий, азокармин В для липидов и липопротеидов — жировой краситель О, судан черный для моносахаридов — водородно-анилино-фталатный реактив для высших жирных кислот — краситель, состоящий из метилового красного и бромтимолового синего. [c.149]

Окрашивание растворами солей серебра. Наиболее чувствительный метод обнаружения белковых зон заключается в пропитывании геля раствором нитрата серебра затем гель обрабатывают восстановителем и раствором соды. При этом комплексы полипептид — серебро обнаруживаются в виде черных полос. Проявления солями серебра можно проводить после окрашивания красителем кумасси, который предварительно отмывают смесью метанол — уксусная кислота [138]. Наборы реактивов для окрашивания гелей солями серебра выпускаются компаниями Upjohn (гелькод) и Bio-Rad. Оба набора повышают чувствительность обнаружения с помощью кумаси в 250 и 50 раз соответственно. Гелькод позволяет обнаруживать белки при содержании 5—10 нг [154]. Как оттенок, так и интенсивность окрашивания солями серебра зависят от свойства анализируемого белка. Это свойство можно использовать для контроля за выделением исследуемого белка из сложной смеси. (Относительно методов обнаружения в геле см. разд. 8.19.) Поскольку метод обладает высокой чувствительностью, необходимо очень [c.19]

Перед окрашиванием белки фиксируют, как обычно, осаждением кислотой, одновременно стараясь удалить из геля амфолиты. Необходимость этого обусловлена тем, что со многими белковыми красителями амфолиты образуют нерастворимые окрашенные комплексы. Обычно гель после ИЭФ вымачивают в течение 30—60 мнн в водном растворе, содержащем 3,5% суль-фосалициловой кислоты и 10,5% ТХУ (масса/объем). Затем гель в течение 15 мин промывают в водном растворе уксусной кислоты (8%) и этанола (25%). Окрашивают гель0,1%-ным раствором обычного для электрофореза белков красителя Кумас- [c.34]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология