Холинэстеразы манометрический метод определения

При этом для холинэстеразы сыворотки была получена величина Ум 9,35-10 jKWH- (pH 7,2—7,4 температура 38°, манометрический метод определения активности). Значения Ум для холинэстераз сыворотки крови других животных приведена в табл. 16. [c.167]

Для определения активности холинэстеразы разработано много способов. Надежные результаты дают методы, основанные на определении количества образующегося продукта, в которых соблюдается линейная зависимость между активностью фермента и количеством образующегося продукта. Несмотря на то, что манометрический метод довольно сложен в выполнении, он в этом отношении (соблюдение линейной зависимости) еще не превзойден. Более простыми являются потенциометрические методы, которые дают весьма точные результаты, особенно при использовании автотитратора, автот матически поддерживающего постоянный pH, вследствие чего исключается влияние pH на активность фермента. Ниже приведен (см. также табл. 10) обзор различных способов определения активности фермента. Подробно описаны манометрический и потенциометрический способы как наиболее пригодные. [c.166]

Некоторые исследователи, например из группы Гилмана и Джерарда, нашли, что при воздействии ДФФ на нерв можно подобрать такие концентрации яда (например, lO- Ai), при которых холинэстераза оказывается почти полностью угнетенной, а проведение не нарушается [4, 15, 25]. В результате возник спор по поводу экспериментальной техники. Группа Нахманзона считает, что манометрический метод недостаточно точен для определения низких уровней холинэстеразы (хотя Боярский и др. [4] в дальнейшем не нашли остаточной холинэстеразы и при использовании высокочувствительной методики, основанной на исчезновении ацетилхолина). Далее, они полагают, что в обработанном ДФФ нерве часто имеется избыток яда, который не находится в контакте с холинэстеразой. При гомогенизаций такой контакт происходит и-наблюдается высокая степень угнетения фермента, которая, по существу, является артефактом. При исключении этих факторов группа Нахманзона нашла, что проведение осуществляется только в том случае, есл-и в наличии имеется холинэстераза [7,9, 35]. Однако Крисцичелли и др. [15], Боярский и др. [4] и Гилман [26] тоже приводят экспериментальные доказательства в пользу того, что избытка ДФФ обычно не бывает. [c.186]

Метод рН-стата был использован для определения холинэстеразы Гликом [39] в 1938 г. обзор возможности его применения дан в работе Якобсена и др. [48]. Достоинства этого метода — его точность и чувствительность. Особое преимущество данного метода состоит в том, что он позволяет вести реакцию при различном pH, включая и те области pH, которые лежат за пределами возможности бикарбонатного буфера (с помощью манометрического метода измерение можно производить только в области этого буфера). При этом методе исключается также нежелательное изменение pH, характерное для дельта-рН-метода. рН-Статный метод более пригоден, чем манометрический для измерения активности фермента при низких концентрациях субстрата, так как в этих условиях вследствие быстрого расщепления субстрата реакция заканчивается за 5 мин, а только с помощью рН-статного метода можно регистрировать процесс немедленно после добавления субстрата. Другое преимущество этого метода перед манометрическим или методом дельта-рН состоит в том, что здесь нет помех со стороны буферных веществ. Его недостатком является сравнительно медленное выполнение измерения, а также то, что он таит в себе все технические и аналитические трудности, связанные с техникой титрометрии. [c.435]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология