Метод анализа белков совершенный

В настоящее время все методы анализа белков являются эмпирическими по своей природе или же по технической необходимости. Выделение и прямое взвешивание белка представляло бы абсолютный метод, если бы можно было показать, что данный вес характеризует чистый, неизмененный и совершенно сухой белок. Все методы разделения и сушки белков являются более или менее эмпирическими, так что неточность в несколько процентов обычно является неизбежной. Другие методы, основанные на определении некоторых составных частей или некоторых свойств белка, которые находятся в связи с его концентрацией, также являются эмпирическими и нуждающимися в произвольной калибрации. Воспроизводимость результатов анализа белков может быть настолько высокой, в какой мере это позволяют технические приемы и степень стандартизации, но абсолютная точность всегда является недостоверной. Ниже будут рассмотрены наиболее важные методы анализа белков. [c.14]

В табл. 3 приведены результаты изучения ряда белков методом гинохромного эффекта. Для калибровки использован белок мышц моллюсков парамиозин, степень спиральности которого принята равной 100%. (По всем данным вторичная структура этого белка не менее совершенна, чем у простых полипептидов). Для сравнения в табл. 3 приведены цифры по проценту снирализации, найденные методом изотопного обмена и методом рентгеноструктурного анализа. Последние являются самыми надежньши и точными. [c.64]

За 15 лет, прошедших с тех пор, как впервые удалось выделить мутантные фаги ruh, было идентифицировано много других мутантов Т-четных фагов. С помощью этого набора мутантов оказалось возможным настолько повысить разрешающую способность генетического анализа, что в конце концов удалось заполнить разрыв между химией ДНК и структурой гена (гл. XIII). Тем не менее стало ясно, что все эти мутации затрагивают только относительно малую часть всего генома фага. Причина этого совершенно очевидна большинство генов фага, несомненно, кодируют белки, осуществляющие жизненно важные функции, так что мутации по этим генам неизбежно должны быть летальными. Несмотря на очевидность этого обстоятельства, долгое время никому не приходило в голову применить к Т-четным фагам остроумный метод, разработанный Горовицем и Лейпольдом для нолучения мутантов по жизненно важным генам Е. oli. Этот метод состоит в отборе чувствительных к температуре мутантов (см. гл. V). Наконец, в 1960 г. Эдгар и Эпштейн выделили /s-мутанты фага Т4, которые совершенно не образуют стерильных пятен при 42 °С, но образуют их при 25 °С. В то же время штамм дикого типа T4/s образует стерильные пятна при обеих температурах одинаково хорошо. Изучение физиологии размножения /х-мутантов при повышенной, запрещающей температуре показало, что у разных мутантов блокированы разные стадии развития фага. Так, у /s-мутантов одного класса при запрещающей температуре репликация фаговой ДНК не может начаться вследствие того, что при 42 °С у них не могут функционировать те или иные ранние ферменты, участвующие в метаболизме нуклеотидов — предшественников ДНК у /s-мутантов другого класса при запрещающей температуре синтез ДНК начинается, блокируются же более поздние стадии. Возникают, например, мутации в гене, кодирующем фаговый лизоцим. Бактерии, зараженные такими мутантами, не лизируют при 42 °С, хотя и содержат инфекционные частицы потомства фага. Были также найдены мутации во многих генах, кодирующих структурные компоненты фага в бактериях, зараженных любым из таких мутантов, при 42 °С не происходит сборки целых частиц зрелого фага. В этом случае лизаты содержат различные типы недостроенных компонентов фага. Если мутация затрагивает ген, кодирующий белок головки фага, лизат, полученный при высокой температуре, содержит целые фаговые отростки, но не содержит головок. Когда мутация затрагивает ген, кодирующий фибриллы отростка, у почти завершенных фаговых частиц имеется головка и присоединенный к ней отросток, но отсутствуют фибриллы, необходимые для присоединения к клетке-хозяину. [c.283]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология