Нуклеиновые кислоты ферментативная модификация

Ферментативная модификация нуклеиновых кислот, синтез олиго- и полинуклеотидов [c.61]

Ферменты играют огромную роль в развитии технологии рекомбинантной ДНК. Химическая трансформация ДНК, необходимая для целей генетической инженерии, не может быть обеспечена традиционными методами химии-нуклеиновых кислот, и поэтому масштабное внедрение методов генетической инженерии в значительной степени зависит от использования ферментов. Особую роль здесь играют ДНК-лигаза и эндонуклеазы рестрикции. Интерес представляет не только ферментативная модификация макромолекул, но также и ферментативный синтез олигонуклеотидов. [c.61]

Сенжер и Коулсон создали метод анализа последовательности ДНК, который основан на ферментативном копировании однонитевых частиц ДНК [18]. Максам и Гилберт создали метод, в основу которого положена химическая модификация четырех оснований, входящих в состав ДНК, и который с одинаковым успехом применим как к однонитевым, так и к двунитевым молекулам ДНК [19]. Оба метода используют авторадиографическое определение згр-меченных олигонуклеотидов, которые разделяют в зависимости от их длины электрофорезом денатурированных фрагментов в полиакриламидном геле. На практике, успех этих методов во многом определяется недавними достижениями в энзимологии нуклеиновых кислот, особенно использованием ферментов рестрикции, расщепляющих молекулы ДНК, и обратной транскриптазы, с помощью которой получают циклические ДНК, комплиментарные РНК-матрице. Нижеследующее описание методики анализа будет, однако, предполагать наличие гомогенных образцов ДНК подходящей длины. [c.188]

Из мононуклеотидов построены нуклеиновые кислоты (РНК, ДНК) клеток. Кроме того, мононуклеотиды входят в состав многих коферментов и участвуют, таким образом, в осуществлении различных каталитических функций. Центральное место в биосинтезе мононуклеотидов занимает синтез пуриновых и пиримидиновых азотистых оснований. Больщинство прокариот способно к синтезу этих соединений de novo из низкомолекулярных пред-щественников. Синтез пуриновых и пиримидиновых мононуклеотидов осуществляется независимыми путями. В результате последовательных ферментативных реакций при синтезе пуриновых нуклеотидов образуется инозиновая кислота, из которой путем химических модификаций пуринового кольца синтезируются аде-ниловая (АМФ) и гуаниловая (ГМФ) кислоты. [c.90]

Кроме четырех обычных оснований в ДНК (главным образом в ДНК бактериофагов) найдено шесть так называемых минорных оснований. Еще больше — до 35 минорных оснований (табл. 37.3)—встречается в РНК, главным образом в тРНК. Минорные компоненты можно получить лишь расщеплением природных полимеров, так как они образуются в результате ферментативной модификации уже готовых полинуклеотидов, т. е. в результате модификации на макромолекулярном уровне. Кроме того, в работах по изучению структуры и функций нуклеиновых кислот имеют дело с производными компонентов нуклеиновых кислот, т. е. с нуклеозидами, несущими защитные группы, или с аналогами оснований и нуклеозидов, например с азапиримидинами [14]. Разделение таких соединений также было предметом исследования в работе [15]. [c.37]

Первые работы в СССР в области химии РНК и ДНК выполнены в Московском университете А. П. Белозерским, определившим нуклеотидный состав ДПК различных организмов. В лаборатории А. А. Баева в Институте молекулярной биологии АН СССР разработаны методы выделения индивидуальных т-РНК, расщепления их молекул и разделения полученных олигонуклеотидов установлено их строение. Дальнейшие ра боты но химии РНК, главным образом по онределеиию структуры РНК, модификации нуклеиновых кислот и выяснению зависимости функций РНК от структуры, проводились наряду с этим институтом также в Институте органической химии АН СССР в Новосибирске (Д. Г. Кнорре). В Институте биоорганических соединений АН СССР М. Н. Колосов с сотр. ведет исследования но изучению структуры и функций ДНК, синтезу функционально активных участков ДНК и химико-ферментативному синтезу нуклеотидов [90, с. 43]. [c.107]

В заключение следует отметить, что все способы введения метки в нуклеиновые кислоты, кроме медленного водородного обмена, связаны с определенными химическими модификациями этих биополимеров. Учитывая строго детерминированную химическим составом матричную функцию большинства НК, такие модификации,должны, как правило, приводить к нарушениям этой функции (в отличие от белков, где даже у ферментов есть балластные участки полипептидной цепи). В связи с этим для введения метки в НК in vitro в последние годы повсеместное распространение приобрели ферментативные методы, позволяю-ш,ие включать из нуклеозидтрифосфатов и нуклеозиддифос-фатов с очень высокой УА. [c.254]

Рестриктазы узнают определенные последовательности нуклеотидов и разрезают двуните-вую ДНК на фрагменты. Модификация заключается в метилировании определенных оснований в последовательности, узнаваемой сопряженной рестриктазой тем самым обеспечивается защита данного участка ДНК от воздействия рестриктазы. Одновременное наличие в клетке этих д ферментативных активностей (так называемая R- система) препятствует гидролизу собственной нуклеиновой кислоты. Чужеродная же ДНК при проникновении в бактериальную клетку служит субстратом для обоих ф )-ментов. [c.14]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология