Справочник химика 21

Химия и химическая технология

Статьи Рисунки Таблицы О сайте English

Введение метки

    Важным параметром является продолжительность жизни радиоактивной метки. Долгоживущие радиоизотопы, период полураспада которых значительно превышает длительность коррозионного эксперимента (обычно от нескольких часов до нескольких недель), как правило, удобнее. Отпадает необходимость вносить поправки на снижение во времени удельной активности определяемого элемента вследствие распада метки, сохраняется постоянной в ходе испытаний зависящая от удельной активности чувствительность анализа, проще решаются вопросы поставки и введения метки в исследуемый образец. Иногда в качестве метки применяются и более короткоживущие радиоизотопы с периодом полураспада не менее 2-3 ч (в пределе -несколько десятков минут). При активационном анализе непосредственно продуктов коррозии определение может быть основано на регистрации еще более короткоживущих радиоизотопов с минимальным временем полураспада порядка нескольких минут. [c.204]


    Готовые изотопы удобны при приготовлении меченых амальгам и нанесении меченых гальванических покрытий, их используют также и в тех случаях, когда введение метки способом облучения требует слишком длительных экспозиций образца в ядерном реакторе при ускорителе, когда меткой служит радиоизотоп, выделяемый из продуктов деления урана, когда в качестве метки целесообразно применить радиоизотоп, поставляемый без носителя (в последнем случае принципиально возможно создавать в образце очень высокие удельные активности элемента). [c.206]

    Один из первых экспериментов с введением метки. т. 2, стр. 311 [c.381]

    Другое важное применение связано с введением метки С. Установление механизмов реакций в органической химии или биохимии, которое ранее основывалось исключительно на использовании радиоактивного изотопа С, можно теперь выполнить с помощью спектроскопии ЯМР С. Как и прежде, проведение синтеза меченого соединения неизбежно, но удается избавиться от часто трудной и не всегда однозначной деградации выделенных продуктов реакции для определения положения метки, поскольку, используя резонанс С, легко определить положение изучаемого атома углерода. В большинстве [c.389]

    Введение метки в аминокислоту прямой обменной реакцией в последнее время применяют редко, так как это приводит к хао- [c.247]

    Введение метки в у и более отдаленные положения бокового радикала необходимо производить на ранней стадии зачастую довольно длинного синтеза. Исключение составляют случаи, когда можно использовать предщественник функциональной группы боковой цепи, либо когда возможен остроумный короткий путь синтеза. В качестве последнего приведем двухстадийный синтез 2, 3, 4, 5 - С4] фенилаланина из [ 1,2- С2] ацетилена схема (38) 68]. [c.251]

    Позднее были разработаны не требующие химической деградации методы локализации меченых атомов [6], основанные на идентификации изотопов с помощью спектроскопии ЯМР. Сначала этот прямой метод с большим успехом применяли для обнаружения ЗС, затем и N и даже (в последнем случае требуются модифицированные приборы 7]). С помощью метода ЯМР можно даже доказать стереоспецифический характер введения метки в данный прохиральный центр, где оба химически идентичных заместителя магнитно не эквивалентны. [c.347]

    Результаты измерений могут выражаться несколькими способами. В большинстве методик определяется общее число распадов (в единицу времени) в образце, которое умножается на коэффициент, характеризующий эффективность счетчика таким путем получают общую радиоактивность, выраженную в числе распадов в минуту. Деление последней величины на массу образца дает удельную радиоактивность] в некоторых случаях, например, при изучении процессов расщепления, мольная удельная активность может быть разделена на число меченых положений в молекуле. Результаты эксперимента по введению метки выражаются далее либо как включение (общая активность в продукте реакции как часть общей введенной активности), либо как разбавление (отношение удельной активности предшественника к удельной активности продукта реакции), либо как удельное включение (величина, обратная разбавлению). Когда по условиям эксперимента реальный выход продукта превращения низок, предпочтительнее определение удельной активности. Любому из способов выражения результатов свойственен — часто в скрытом виде — ряд трудностей, связанных с количествами эндогенных предшественников и промежуточных соединений ( метаболического пула ), а также с соотношением между скоростью изучаемого процесса и скоростями общих процессов метаболизма [96—98]. Включение меченого ацетата в типичный поликетид в микроорганизмах обычно составляет 1 —10% в растениях эта величина на один — два по- [c.470]


    Дейтерирование олефинов [15]. При использовании Т. в качестве гомогенного катализатора дейтерий специфично присоединяется к двойной связи -моноолефинов. Применение гетерогенных катализаторов, таких, как платиновая чернь, приводит к неспецифическому введению метки. [c.290]

    Исходя из изложенного, представляется желательным использовать для введения метки следующие центры стероидного скелета 5а — для андрогенов, 5 — для карденолидов, 9а и 17а — для кортикоидов. Иминоксильные радикалы, присоединенные в этих положениях, не должны сильно снижать биологическую активность Стероидов и в то же время расположены достаточно близко к предполагаемым активным центрам С (3), С (11), С (20), чтобы реагировать на изменение геометрии последних. [c.109]

    Скорости гидролиза этих веществ (в пределах 10% ошибки) равны, т. е. модификация большой молекулы нитроксилом в данном случае мало сказывается на активности. В этом примере видно, как наличие неизменной части молекулы достаточно больших размеров влияет на значение коэффициента сходства. Введение метки в свободную жирную кислоту (см. выше) дает модель, сходную с оригиналом лишь с / =0,435. Однако если эта же спин-меченая кислота — часть молекулы фосфатидилхолина, то сходство модели с оригиналом возрастает до 0,687. [c.131]

    Приведенные выше примеры показали, что вычисление коэффициента сходства парамагнитных моделей с оригиналом позволяет приближенно оценить степень изменения структуры при введении метки в молекулу. Однако судить об изменении биологической активности модели по сравнению с оригиналом по величине коэффициента сходства можно лишь ориентировочно, учитывая ограничения метода. [c.134]

    Введение метки во всех трех положениях и окисление на катализаторах Bi—Мз—О приводят к тем же выводам [92]. В обоих случаях и СО и СО2 содержат концентрацию Зо% меченого вещества, что указывает на неселективный характер полного окисления. Сдвиг двойной связи не может объяснить эту симметрию, так как только небольшая часть непрореагировавшего пропилена есть СН2=СН—СНд [60]. Если работать с дейтерированными пропенами и принять разумное значение изотопного эффекта ко / н = 0,55 при 450° С), то приведенныз выше выводы подтверждаются [93] распределением дейтерия в акролеине. На обоих концах аллильной частицы должно происходить ступенчатое отщепление водорода  [c.162]

    Для определения концентрации веществ в большинстве иммунохимических методов к анализируемому раствору, содержащему определяемое соединение и его меченый аналог, добавляют реагент в количестве, намного меньшем необходимого по уравнению (7.12). Как немеченые, так и меченые соединения взаимодействуют с реагентом практически одана-ково, поэтому отношение их концентраций будет одним и тем же в растворе и в связанном состоянии. При этом возможность применения метода во многом определяется доступностью меченого антигена и соответствующих антител. Для введения метки используют различные реагенты радионуклиды, ферменты, красящие вещества, флуоресцентные и хеми-люминесцентные зонды, ионы металлов. До последнего времени в качестве маркеров антител применяли радиоактивные изотопы этот метод назьшается радиоиммунохимическим анализом (РИА). При этом степень [c.298]

    Для большинства опытов по картированию активных центров карбогидраз олигосахаридные субстраты должны быть меченными С по одной из концевых групп. Например, в случае мальтоолигосахаридов введение метки в восстанавливающую концевую группу проводят с помощью циклодекстрин-глюканотрансферазы (КФ 2.4.1.9), действуя на циклогексаамилозу и меченую глюкозу [c.39]

    При любом способе введения метки должны выполняться следующие трёбования  [c.205]

    Как показали эксперименты с введением метки, в пластохинонах. хлоропластов, равно как и в токоферолах, одна метильная группа (отмеченная звездочкой на рис. 14-19) происходит от хоризмата. Полагают, что в качестве промежуточного продукта при этом образуется ди оксисоединение гомогентизат [116]. В организме животных он является обычным катаболитом тирозина (рис. 14-20). В синтезе и пластохино- [c.143]

    Предположим, что мы определили скорость рацемизации как скорость взаимного превращения энантиомеров, т. е. (+) - (—), вместо того чтобы определить ее как скорость превращения энантиомера в рацемическую модификацию. Как это изменит сравнительные скорости введения метки и рацемизации в реакции радиоактивного подпд-иона и 2-иодбутана (разд. 5.2) Объясните ваш ответ. [c.212]

    В свободно кипящем слое Тс Тм, Тс Тт и импульсно введенная метка успевает перемешаться с остальными частицами до того, как сколько-нибудь существенное ее количество будет потеряно. Поэтому кривые отклика на подачу навески нагретых частиц можно интерпретировать как кривые отклика на концентрационное возмущение. Аналогом безразмерной концентрации является величина С = Т — То)/ Т — То), где То — начальная температура слоя Т — средняя температура слоя после ввода метки. [c.54]

    H/D-обмен в кислой среде ( H3 OOD и H OOD) можно использовать для введения метки к а-С-атомам алкильных групп, находящихся в положениях 2 и 4 пиридина. При контакте с разбавленными дейтерированными кислотами происходит H/D-обмен в кольце некоторых гетероциклических соединений ароматического характера. В присутствии D2SO4 на дейтерий обмениваются третичные Н-атомы углеводородов. [c.79]

    Известную проблему, особенно в биоаналитической химии, составляет определение выхода, т. е. определение процентного количества соединения после его выделения из, скажем, биологической матрицы. Выход часто определяется с помошью метода внутреннего стандарта, основное требование к которому состоит в том, чтобы он по своим свойствам был максимально близок к определяемому соединению. Очень часто эту проблему решить довольно трудно, что, естественно, влияет на достоверность результатов. Почти идеальными внутренними стандартами являются изотопно-меченные аналоги соединения, использование которых привело к исключительно важной роли масс-спектрометрического обнаружения в количественном газохроматографическом анализе. В этом случае для введения метки применяются стабильные изотопы (чаще всего дейтерированные аналоги), и вследствие высокой разрешающей способности такой системы обнаружения отношение меченого внутреннего стандарта и немеченого анализируемого образца можно определить точно. Химическое различие, обусловленное изотопным замещением, обычно пренебрежимо мало и не влияет на результаты выделения и обработки пробы. Хотя в капиллярной ГХ может наблюдаться небольшое различие во временах удерживания изомеров, меченных Н и н, влияние изотопного замещения на удерживание обычно не проявляется ввиду очень незначительного различия в способности к образованию водородных связей с неподвижной фазой. Как и при применении стандартов, меченных радиоактивными изотопами, определение меченого и немеченого соединений основывается целиком на специфическом методе одновременного обнаружения обеих форм. [c.174]


    Трудности третьего типа возникают тогда, когда меченое соединение биологически не идентично немеченому, т. е. когда имеет 1есто так называемый изотопный эффект . К счастью, биологический изотопный эффект имеет ту же самую основу и подчинЯ ется тем же правилам, что и эффекты химических систем поэтому его учет не представляет больших сложностей для химика. В частности, изотопные эффекты обычно проявляются только у изотопов водорода. Следует иметь в виду, что радиоактивные изотопы обычно занимают только небольшую часть меченых полох<ений . Так, в образце [ 1- С,2-ЗН] ацетата большая часть молекул не содержит ни одного изотопа, практически нет молекул, имеющих оба изотопа, и совершенно отсутствуют соединения, содержащие более одного атома трития. Так, если образец превращается химическим или биологическим путем в СНС СОК, не следует ожидать, что 2/3 всего количества трития будет потеряно наиболее вероятный результат будет зависеть от тонких деталей механизмов превращений. Ситуация складывается совершенно иначе, если все возможные положения действительно заняты атомами изотопа, как это обычно бывает в случае тяжелых изотопов, например [2-2Нз] ацетата. Так, для определения числа атомов водорода, переносимых вместе с атомом углерода в процессе С-метилирования, обычно используют [Ме-2Нз] метионин (при этом основным методом анализа служит масс-спектрометрия). Стереоспецифическое введение метки, например частичное включение в прохираль-ную СНг-группу, широко применяется для изучения стереохимии процессов биосинтеза. В любом случае, однако, следует помнить, что скорость реакций меченых соединений может отличаться от скорости реакций немеченых аналогов, и интерпретировать результаты с необходимой осторох<ностью в общем случае предпочтительным является эксперимент, дающий ответ типа да — нет, а не тот, который можно интерпретировать только на основе неопределенных в количественном отношении изотопных эффектов. [c.469]

    Незначительные ограничения этого метода компенсируются информацией, которая может быть получена из независимых анализов комплиментарных цепей. Применение ферментов в этом методе ограничивается введением метки в концевой фосфат и рестрикционным расщеплением цепей на блоки подходящей длины, примерно в 100—150 остатков, с частичным их перекрыванием. Метод нашел наибольшее применение в определении последовательности оснований контролирующих областей генов, например для исследования дуплекса в 223 пары оснований, представляющего собой ген 5S РНК пекарских дрожжей и имеющего промоторный и тер-минаторньй участки транскрипции [24]. Другой прекрасный пример использования этого метода — установление полной первичной структуры -глобиновой мРНК кролика, структура которой была закреплена получением с помощью транскриптазы соответствующей ей циклической ДНК [25]. В ходе амплификации этой циклической ДНК клонированием бактериальных плазмид (см. разд. 22.3.4) были потеряны 13 остатков с 5 -конца. К счастью, их последовательность удалось установить в результате исследований с использованием метода плюс и минус [26]. Совместное применение этих методов позволило установить последовательность гена длиной в 589 пар нуклеотидов. [c.192]

    Разработано стереоселективное введение метки в р-метилено-вые группы ароматических аминокислот в связи с изучением механизма биохимических реакций, затрагивающих р-положение. Азлактонный синтез см. схему (9) приводит к (2)-оксазолинону из [а- Н] ароматического альдегида, и после гидролиза в соответствующую (2)-а-бензоиламинокоричную кислоту эти соединения при каталитическом гидрировании претерпевают г ис-присоедине-ние, что приводит к смеси R)-L- и (р5)-0-[р- Н]аминокислот схема (33) . Их можно рацемизовать по а-ноложению обработкой 10 М хлороводородной кислотой при 180°С без потери трития. Разделение Л/-хлорацетильньтх производных с помощью карбокси-пептидазы [атакуется только а-(5)-изомер] дает возможность вы- [c.249]

    Углерод-13 нерадиоактивен, но в отличие от С и С свойства его ядер таковы, что их можно обнаружить с помощью спектроскопии ЯМР. С помощью новейщей техники Фурье-преобразования можно получить химические сдвиги С образцов без их изотопного обогащения природное содержание изотопа с (1,1 7о) оказывается вполне достаточным для современных чувствительных приборов [69]. Однако введение метки становится эффективным [c.251]

    Хотя метод ЯМР сравнительно нов, в качестве иллюстрации применения ЯМР на рис. 28.1 приведены спектры ЯМР Н пени-цилловой кислоты и ЯМР [ Н] пеницилловой кислоты (2), [8, 9], которая образуется из меченой уксусной кислоты с промежуточным образованием орселлиновой кислоты (1) (схема ). Сравнение этих спектров позволяет однозначно определить положение атомов в молекуле. Очевидны некоторые из преимуществ этого изотопа легко и с достаточной точностью предсказуемые значения химических сдвигов и констант взаимодействия, а также пропорциональность площади сигнала концентрации соответствующего изотопа. Спектр также свидетельствует о стереоспецифичном характере введения метки в метиленовую группу С-5, причем пониженная по сравнению с другими интенсивность этого сигнала говорит о частичной потере трития это позволило высказать интересные соображения о механизме биосинтеза пеницилловой кислоты (2) [8]. [c.347]

    Несколько по-иному складывается положение при работе с Н. Как уже отмечалось выше, в этом случае изотопные эффекты могут быть очень значительными. Кроме того, многие атомы водорода в органических молекулах с большей или меньшей скоростью обмениваются с атомами водорода воды. Вероятность химического обмена как способа введения метки или ее потери обычно очевидна. Если введенный (иногда в довольно жестких условиях) меченый атом стабилен в последующих превращениях, эта реакция, очевидно, может использоваться как важный способ получения соединений, меченных Н. Кроме того, существует несколько Довольно обычных катализируемых ферментами процессов, осуществления которых трудно ожидать в мягких условиях химических реакций, но которые in vivo приводят к обмену атомов водорода. Выбор меченных Н соединений гораздо более узок, чем в случае С, но некоторые из них, в том числе НгО и Нг, до- [c.471]

    В простейших экспериментах с применением С, при которых получаемые результаты эквивалентны результатам работ с радиоактивным С, важнейшим фактором является заметное природное содержание С. Именно этот фактор стимулировал развитие инструментальной техники ЯМР С и сделал реальной интерпретацию спектров. С другой стороны, этот фактор ограничивает чувствительность ЯМР как метода детектирования включенной метки. Если предшественник в каком-то определенном положении мечен на 100%, то, конечно, соответствующие сигналы в его спектре будут интенсивнее сигналов при природной концентрации, составляющей около 1 % Для надежного обнаружения введенной метки ее максимально допустимое разбавление должно быть не выше 100-кратного, а для сколько-нибудь точного количественного определения оно должно быть значительно ниже. Более того, в идеальном варианте необходимо количественное сравнение включенной в несколько различных положений метки здесь уже появляются проблемы, связанные с использованием преобразования Фурье в методе ЯМР. Так, на интенсивность сигналов в спектре ЯМР С заметно влияют релаксационные эффекты, различные для разных атомов углерода эти эффекты трудно воспроизводимы даже в различных спектрах одного и того же соединения. Эта трудность может быть преодолена [70] путем применения парамагнитных релаксационных реагентов , например трис(ацетил-ацетоната)хрома (III) [116, 117], специальных приемов подавле- [c.476]

    Ход анализа. Раствор, содержащий i мкг Hg, готовят смешением 5 мл 10 М Hg U пли Hg(A ) в дистиллированной воде и 15 0,333 М Na l или КС1 и доведением водой до 30 мл. Для введения метки -esug приводят в контакт 1 мл этого раствора с 3—4 мг ртути, имеющей активность 3—4 мкюри. Удельная активность раствора 20—150 имп/сек-Л мкг. Полнота обмена составляет 97,7%. [c.169]

    При изучении субъединичных белков и нуклеопротеидов аффинная модификация дает возможность понять, какие субъединицы участвуют в узнавании специфических лигандов. Эта проблема существенно проще, чем точная локализация точек модификации. Субъединицы как белков, так и нуклеиновых кислот обычно идентифицируются в соответствии с их положе1шем на хроматограмме, электрофореграмме, при изоэлектрическом фокусировании в зависимости от выбранной системы деления. Присоединение метки обычно не изменяет существ венно положение макромолекулы в таких системах. Следовательно, проблема заключается в том, чтобы обнаружить среди разделенных субъединиц ту, которая содержит введенную метку. Трудности возникают в тех случаях, когда в качестве лиганда, несущего реакционноспособную группу, берется полимер. Например, при изучении локализации транспортных РНК на рибосомах или на субъединицах аминоацил-тРНК-синтетаз возможно использование реакционноспособных производных тРНК. Присоединение молекул, несущих большой отрицательный заряд, может привести к сильному изменению положения модифицированного белка в используемой системе разделения. Следовательно, прежде чем проводить разделение, необходимо удалить специфическую макромолекулярную часть из модифицированного материала без разрушения связи метки с соответствующей субъединицей. [c.333]

    Проблемой, которую каждый раз приходится решать при использовании метода Максама — Гилберта, является получение полинуклеотидов, меченных только по одному из концов. Обычно для анализа используются двухцепочечные фрагменты ДНК (например, образовавшиеся после расщепления рестриктазами), а все методы введения концевых меток приводят к образованию фрагментоа, меченных по двум 5 - нлн двум 3 -концам. Поэтому приходится прибегать к дополнительным операциям, таким, как разделение комплементарных цепей ДНК после введения метки. [c.325]

    ДНК-полимераза Т4 может быть использована в основном так же, как ДНК-полимераза I, Сильная 3 -> 5 -экзонуклеазная активность позволяет применять фермент для введения метки в ДНК без выступающих концов и с З -аыступающими концами. [c.351]


Смотреть страницы где упоминается термин Введение метки: [c.334]    [c.503]    [c.59]    [c.231]    [c.102]    [c.390]    [c.194]    [c.46]    [c.567]    [c.416]    [c.417]    [c.508]    [c.258]    [c.318]   
Молекулярная биология. Структура и биосинтез нуклеиновых кислот (1990) -- [ c.19 ]

Молекулярная биология (1990) -- [ c.19 ]




ПОИСК







© 2025 chem21.info Реклама на сайте