Белки ферментативное модификации

Итак, область эукариотического промотора рассматривается как специфический ДНК-остов, на котором собираются белки транскрипции, узнающие свои сайты связывания и взаимодействующие как друг с другом, так и с РНК-полимеразой. Нельзя исключить, что факторы транскрипции являются ферментами и в процессе этих взаимодействий осуществляются ферментативные модификации как белковых факторов, так и ДНК. Появление нового фактора транскрипции в дифференцированных клетках можно рассматривать как способ включения гена на нужной стадии развития. [c.201]

Поставленные задачи решаются на основе современных методов исследования ферментов. Практическая направленность занятий связана с освоением различных методов регистрации скоростей ферментативных реакций, включающих использование сопряженных ферментных систем и метода радиоактивного анализа. С целью определения активности мембранных ферментов осваиваются техника получения различных субклеточных структур и приемы работы с различными типами детергентов. Проблемы структурного анализа ферментов решаются с привлечением методов избирательной химической модификации белков, флуоресцентных методов, а также методов ковалентной и адсорбционной иммобилизации на различных носителях, включая искусственные фосфолипидные мембраны (липосомы). Кроме того, осуществляется практическое знакомство с различными аспектами кинетического исследования ферментов осваиваются различные способы оценки кинетических параметров, ингибиторный анализ, проводится исслс- [c.329]

После трансляции многие полипептиды подвергаются различным модификациям. У большинства из них отщепляется N-концевой метионин, так что N-концевым остатком становится вторая аминокислота. У эукариот происходит так называемый процессинг некоторых белков, когда полипептидная цепь расщепляется в определенных сайтах с образованием более коротких белковых молекул со специфическими функциями. В некоторых случаях, особенно в эукариотических клетках, к определенным аминокислотам ферментативным путем присоединяются фосфатные группы, липиды, углеводы или другие низкомолекулярные соединения. В результате этих химических модификаций образуются белки, выполняющие в клетке специфические функции. [c.40]

После связывания ферментов с нерастворимыми носителями их свойства могут меняться либо под влиянием микроокружения, либо в результате изменений, вызванных химической модификацией благодаря образованию новых ковалентных связей. Следовательно, очень полезно охарактеризовать фермент не только определением общей ферментативной активности и количества связанного белка, но и путем титрования активных центров. [c.250]

Эксперименты показали, что после восстановления нативной рибонуклеазы, взятой в концентрации менее 0,1%, и последую щего ее окисления около 70% окисленного материала оказы-вается растворимым и активность этой растворимой фракции составляет от 80 до 100% активности нативного фермента. Осадок состоит, вероятно, из молекул, соединенных межмолекулярными связями. Окисление в присутствии мочевины не приводит к появлению активного продукта. Эти факты свидетельствуют о том, что характер свертывания молекулы белка предопределен ее аминокислотной последовательностью. Действительно, из 105 вариантов образования дисульфидных связей осуществляется только тот, при котором молекула обладает ферментативной активностью (не исключено все же, что имеется несколько активных модификаций рибонуклеазы). [c.279]

Денатурация белка в классическом смысле определялась как любая непротеолитическая модификация уникальной структуры нативного белка, приводящая к определенным изменениям химических, физических и биологических свойств [388]. Из этого определения исключаются изменения состояния ионизации, если только они не сопровождаются конформационными переходами. Денатурация может происходить в результате нагревания, изменения pH и добавления неполярных растворителей или некоторых специфических денатурирующих реагентов, например мочевины или солей гуанидина. Она также может быть вызвана восстановительным или окислительным разрывом дисульфидных связей, которые стабилизуют нативные конформации некоторых белков. Денатурация, как правило, сопровождается уменьшением растворимости белка. Это можно легко понять, так как гидрофобное взаимодействие, стабилизующее нативную конформацию, приводит к межмолекулярной агрегации, если полипептидные цепи принимают вытянутые конформации. Другим характерным последствием денатурации является раскрытие реакционноспособных групп, которые расположены внутри третичной структуры и становятся доступны воздействию реагентов при разрушении этой структуры. К числу наиболее пригодных методов наблюдения за процессами денатурации принадлежат спектроскопические измерения, измерения оптической активности и определение каталитической активности ферментов или биологической активности гормонов. Конформационные переходы при денатурации включают ряд процессов, которые в различной степени могут сказываться на каждом из наблюдаемых изменений, и поэтому понятие степени денатурации бессмысленно, если не будет установлен критерий, с помощью которого денатурация измеряется. Эта точка зрения иллюстрируется рис. 44, на котором изображено изменение оптической активности, поглощения света и ферментативной активности рибонуклеазы [389]. [c.136]

Влияние структурных модификаций на биологическую активность трансферрина было изучено Корнфельдом [100]. По-видимому, эти исследования можно разделить на исследование влияния модификации на связывание белка с поверхностью клетки ретикулоцита и на исследование последующего специфического поглощения железа клеткой. Ферментативное удаление большинства углеводных связей в трансферрине не вызывает никаких значительных изменений ни в связывании белка, ни в переносе железа. [c.356]

Вполне возможно, что регуляция ферментативной активности белка путем его модификации, катализируемой другими ферментами, широко распространена в живых организмах [815]. Все известные модификации ферментов являются результатом присоединения или потери фосфатных или нуклеотид- [c.124]

Рассматриваются также вопросы практического применения ферментативных методов гидролиза с учетом последних публикаций приводятся методы предварительной обработки белков и методы химической модификации с целью ограничения или расширения специфичности фермента. [c.135]

Вайтейкер [117] и Ричардсон [89] в книге Пищевые белки улучшение химической и ферментативной модификаций уже дали обзор работ, изучавших действие ферментов на функциональные свойства белков. Позднее Филлипс и Беша [86] в работе Функциональность белков в пищевых продуктах представили обзор по действию протеаз различного происхождения на функциональные свойства белков сои, арахиса, рапса, хлопка, сезама, гороха, конских бобов и люцерны. Функциональные свойства этих белков, такие, как растворимость, способность к образованию пены и эмульсий, устойчивость пены и эмульсий и водоудерживающая способность, в большинстве случаев удавалось улучшать с помощью протеаз. [c.597]

Мембраны ЗЦС и НЦС близки по строению л химическому составу. Некоторые функции являются общими для обоих типов мембран известно, что ряд ферментов имеется как в ЗЦС, так и в НЦС. Через полости ЦС транспортируются секретируемые клеткой белки. Каждый тип-мембран имеет и свои индивидуальные функции синтез и ферментативная модификация синтезируемых белков происходит на ЗЦС, синтез фосфолипидов и наличие детоксифицирующих ферментов характерны для НЦС. [c.329]

Конъюгат (5.7) сохраняет полную ферментативную активность по отношению к казеину, несмотря на практически полную модификацию введенного в реакцию белка. Химическая модификация этого конъюгата по непрореагировавшим альдегидным группам полимера-носителя и альдиминовым связям позволила получить четыре новых конъюгата (5.8) — (5.П), отличающихся от исходного (5.7) по стабильности связи полимер — фермент и [c.173]

Успехи в изучении етруктуры белков, н в частности лизоцима, в кристаллическом состоянии методами рентгеноструктурного анализа неизбежно повлекли за собой вопрос о том, насколько третичная структура фермента, и в особенности его активно1 о це1гтра, в кристалле близка к таковой в растворе. С одной стороны, можно было бы ожидать близкое сходство, если не идентичность, между структурами фермента в данных двух физических состояниях, поскольку по меньшей мере одна треть объема для большинства кристаллических белков занята водой [35], причем по данным ЯМР эта вода имеет жидкую структуру [36]. С другой стороны, определенные ограничения в подвижности фермента в кристалле, а также взаимные стерические влияния молекулы в кристаллической решетке (возможно, различные для разных полиморфных модификаций кристаллического фермента) могут, вообще говоря, сказываться на топографии активного центра, доступности его по отношению к молекулам субстрата и эффекторов и в целом на механизме ферментативного катализа. [c.155]

Как известно, участок ДНК, несущий информацию о синтезе индивидуального белка, называется геном, а участок, контролирующий синтез единственной полипептидной цепи и ответственный за него,— цистроном. Следовательно, если белок состоит из нескольких (более одного) полипептидов, то естественно предположить, что в синтезе такого белка должны участвовать несколько (более одного) цистронов. Это не всегда соответствует действительности, особенно если полипептидные цепи идентичны (например, а,- и р -цепи гемоглобина). Если, например, пептидные цепи какой-либо одной белковой молекулы являются неидентичными, то это не всегда означает, что они синтезируются как результат действия разных цистронов. Подобный белок может синтезироваться в виде единственной полипептидной цепи с последующими протеолитическими разрывами в одном или нескольких местах и отщеплением неактивных участков. Типичным примером подобной модификации является гормон инсулин, синтезирующийся в виде единого полипептида препроинсулина, который после ферментативного гидролиза превращается сначала в неактивный предшественник проинсулин, а затем в активный гормон инсулин, содержащий две разных размеров и последовательности полипептидные цепи (см. рис. 1.14). [c.532]

Анализ пептидов, содержащих лизин, из ферментативного (но не триптического ) или частичного химического гидролизата является важным этапом расшифровки аминокислотной последовательности белков. Выделение пептидов, содержащих лизин, следует начать с обратимого блокирования е-аминогрупп остатков лизина в исследуемом белке. Такую обратимую модификацию можно получить при трифторацетилировании [5], малеинировании [2] или цитраконилировании [4]. [c.111]

Другие виды применения перекиси водорода в обработке пищевых продуктов, не связанные с ее консервирующим действием, следующие пекарная добавка для поднятия теста (см. стр. 510) улучшение вин и коньяка [223] (ускоряет созревание, вероятно путем превращения сивушного масла в альдегиды в результате реакции с перекисью водорода перекись способствует также уст) анению побурения белых вин) обесцвечивание красного свекловичного сока [224] регенерация культуральных сред [225] очистка дрожжей от горьких начал [226] стабилизация лецитина [227] улучшение органолептических свойств пищевых масел [228] модификация пищевых крахмалов и камедей [229] улучшение вкуса кофейных экстрактов [230[ отбелка яиц в скорлупе [231] устранение изменения цвета пищевых крабов [232[ бланшировка овощей [233] отбелка мононатрийглутамата отбелка требухи, желатина и яичного желтка и отбелка орехов и сушеных фруктов для улучшения их внешнего вида. Новым достижением [234] является процесс, устраняющий один из источников неприятного развития запаха и вкуса в сушеных пиш,евых продуктах. Это—ферментативный процесс, в котором глюкозооксидаза потребляет сбраживаемые вещества, нанример из яичного белка перекись водорода является наиболее удобным источником кислорода для этой аэробной реакции. Большие количества перекиси водорода находят косвенное применение в пищевой промышленности в виде перекиси бензоила, пироко примеияел40й для отбелки муки. Такая отбелка, обусловленная окислением ксантофилла, происходит быстро и равномерно, однако она не сопровождается одновременным созреванием, т. е. улучшением пекарных свойств муки. [c.517]

После получения из целой молекулы ринобуклеазы 23 пептидов относительно небольшого размера Мур, Хирс и Стейн приступили к решению, как они выразились, более легкой задачи , выяснению последовательности аминокислотных остатков в этих относительно небольших пептидах. Они пользовались уже достаточно хорошо разработанными химическими и ферментативными методами а) динитрофенилированием, по Ф. Сенгеру, для определения М-концевых аминокислотных остатков, б) гидрази-нолизом, по И. Акабори, в модификации Г. Браунитцера и Г. Шрамма [111] и в) фенилизотиоцианатным методом П. Эд-мана [149]. Внедрение последнего метода сыграло весьма важную роль в переходе аналитической химии белков на новый очень высокий методический уровень. [c.137]

Эти интересные результаты приводят к выводу о том, что белки можно изменять ферментативным путем с образованием новых модификаций, которые значительно различаются по растворимости и кристаллической форме, а также по электро-форетической подвижности, но мало отличаются по молекулярному весу. Полученные результаты имеют важное значение [c.335]

Другой областью применения гель-хроматографии в биохимии является отделение белков от низкомолекулярных мешающих анализу примесей, например аминокислот, сахаров, стероидов или реагентов, используемых для химической модификации белка. Методом гель-хроматографии чаще всего удаляют реагенты, предназначенные для введения в белок радиоактивной и флуоресцентной меток. Гель-хроматография позволяет также быстрее и эффективнее, чем диализ, осуществить обессолива-ние или смену буфера, требуемые в определенных схемах фракционирования, а также удаление кофакторов и ингибиторов, используемых при изучении кинетики ферментативных реакций. Кроме того, с помощью этого метода можно изучать связывание белков с низкомолекулярными соединениями, например лекарственными веществами, ионами металлов и красителями [10]. Коэффициент распределения Ка некоего стандартного белка с из- [c.106]

Миозин является объектом всестороннего изучения практически на протяжении всего XX столетия. Еще в исследованиях А.Я. Данилевского в конце прошлого века отмечалось, что миозин обладает двойным лучепреломлением. Однако до самого последнего времени все знания о пространственной структуре ограничивались информацией о внешнем очертании молекулы и ее габаритных размерах, полученных с помощью электронной микроскопии. В частности, было известно, что миозиновая головка имеет грушевидную форму 190 A в длину и 50 A в ширину, а двойная спираль хвостового участка соответственно 1500 и 20 А [468-471]. Последние три десятилетия камнем преткновения в определении трехмерной структуры миозина, как и структуры актина, было получение качественных кристаллов белка для рентгеноструктурного анализа. И. Рейменту и соавт. удалось получить требуемые кристаллы, использовав не совсем обычный в белковой кристаллографии прием - N-метилирование боковых цепей всех остатков Lys миозинового фрагмента I в мягких условиях [472]. Для того чтобы убедиться в том, что метилирование не привело к радикальному изменению конформационных и ферментативных свойств белка, авторы подвергли подобной химической модификации лизоцим и не обнаружили после этой процедуры существенных нарушений в трехмерной структуре фермента. Кроме того, были проверены кинетические свойства метилированного миозина SI [473]. Он сохранял каталитическую активность, хотя и наблюдались отклоне- [c.125]

К активным формам кислорода, кроме 0 , Н О , ОН, относятся также синглетный молекулярный кислород Ю2, пергидроксильный радикал НО, гипогалоиды, пероксидный радикал R0 , алкоксильный радикал КО. Они могут генерироваться в разнообразных ферментативных и неферментативных реакциях во всех частях клетки. Наибольший вклад в их образование вносит дыхательная цепь митохондрий, а также система цитохрома локализованная в эндоплазматической сети. АФК возникают как спонтанно, так и ферментативно (например, с участием КАВРН-оксидазы дыхательного взрыва в плазматической мембране и ксантиноксидазы в гиалоплазме). Они вызывают образование органических гидропероксидов КООН при взаимодействии с биологическими молекулами (ДНК, белками, липидами). Совокупность реакций, индуцируемых АФК и приводящих к формированию гидропероксидов и затем вторичных окисленных продуктов (спиртов, альдегидов, эпоксидов), называют оксидативной модификацией молекул. [c.107]

Воздействие длинноволнового УФ-света в интервале длин волн 320—390 нм = 365 нм) в течение 30 мин приводит к полному ингибированию ферментативной активности На" , К+-АТФазы. Хромофорами УФ-света в этом диапазоне длин волн являются различные (восстановленные) пиридиннуклеотиды, флавины, железопорфирины. Таким образом, инактивация мембраносвязанного фермента в данном случае может быть обусловлена фотохимическими превращениями вышеназванных хромофоров. Не исключена вероятность локализации этих акцепторов УФ-излучения на мембране в непосредственной близости к исследуемому белку. Вместе с тем, учитывая то обстоятельство, что хромофорные группы мембран (порфирины, флавины, нуклеотиды) выступают в качестве сенсибилизаторов пероксидного окисления липидов, можно предположить, что в процесс модификации На , К -АТФазы вносят вклад преимущественно вышеуказанные компоненты эритроцитарных мембран, а также фотосенсибилизированное ими пероксидное окисление липидов. При УФ-облучении выделенных микросом мозга крыс обнаруживается корреляция между снижением активности На , К+-АТФазы и пероксидным окислением липидов, оцениваемым по содержанию полиненасыщенных жирных кислот и накоплению малонового диаяьдегида (J. Jamme et а1., 1995). Подавление активности Ка , К+-АТФазы при облучении микросом УФ-светом снижалось тушителем свободных радикалов — тиомочевиной и не изменялось в присутствии защитника тиолов — дитиотреитола. Авторы считают, что эффект ПОЛ опосредуется нарушением целостности мембран, а не структурными изменениями самого фермента. [c.170]

Меченые белки можно получать не только при фосфорилировании, но и в результате иодирования изотопом двумя путями. В первом случае в результате ферментативного иодирования пероксидазой в мягких условиях модифицируются аминокислотные остатки тирозина и протекает лишь одна побочная реакция — окисление аминокислотных остатков триптофана. Во втором случае модификация протекает в две стадии сначала под действием индолил-З-алкангидроксилазы происходит дегидрирование с образованием двойной связи в аминокислотных остатках триптофана, а затем проводится либо галогенирование I2 или 1С1, либо каталитическое гидрирование изот опами водорода. [c.63]

До проведения ферментативного гидролиза образец белка должен быть денатурирован и остатки цистеина в нем превращены в гидрофильные производные. С этой целью дисульфидные связи в белке предварительно восстанавливают дитиотреитом [37] и цнстеины модифицируют иодоуксусной кислотой (для введения радиоактивной метки используют [ С] иодоуксусную кислоту), иодоацетамидом [31], этиленимином [66] или окисляют надмуравьиной кислотой [30]. Выбор реагента определяется общей стратегией исследования. Более подробно реакции модификации рассмотрены в гл. 2. [c.349]

Существующие способы ковалентной иммобилизации белков и ферментов на полистироле и его производных в основном разработаны для макропористых носителей и полистирольных гелей, используемых в ионообменной хроматографии. Сложность ковалентной Пришивки для целей ИФА состоит в том, что модификации должно подвергаться готовое штампованное изделие из оптически прозрачного непористого полистирола (или другого полимера). При этом оптические свойства носителя в процессе активации не должны ухудшаться, так как. На конечной стадии анализа Лунки планшета или пробйрка служат кюветой Для фотометриро-вания продукта ферментативной реакции. С другой стороны, условия модификации должны исключать изменение однородности поверхности носителя (Частичное растворение набухание полимера [c.206]

Смотреть страницы где упоминается термин Белки ферментативное модификации: [c.27] [c.72] [c.29] [c.28] [c.229] [c.91] [c.148] [c.97] [c.151] [c.116] [c.396] [c.198] [c.321] [c.151] [c.355] [c.321] [c.136] [c.275] [c.13] [c.23] [c.219] [c.44] [c.139] [c.177]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология