Зональное элюирование примеры

Ниже рассмотрены основные экспериментальные особенности и подходы аналитической аффинной хроматографии с зональным элюированием. Обсуждаются свойства аффинной матрицы и растворенного реагирующего вещества в отношении их применимости для аналитических (в отличие от препаративных) экспериментов. В заключение представлены примеры, показывающие возможности рассматриваемого метода для изучения нескольких систем, относящихся к взаимодействию белок — лиганд и белок — белок. [c.218]

ПРИМЕРЫ РЕЗУЛЬТАТОВ АНАЛИТИЧЕСКОЙ АФФИННОЙ ХРОМАТОГРАФИИ С ЗОНАЛЬНЫМ ЭЛЮИРОВАНИЕМ [c.233]

Рис. 2. Схематическая диаграмма аффинной хроматографии с конкурентным зональным элюированием, изображающая взаимодействия подвижных и иммобилизованных компонентов, В приведенном примере элюирующий буфер содержит растворимый лиганд, конкурирующий с иммобилизованным лигандом за связывание с тем же активным положением подвижного компонента (в данном случае белка) [3].

Рис. 3. Примеры кривых конкурентного зонального элюирования в ряде экспериментов с системой нейрофизин — пептид, показывающих хроматографическое поведение зон белка, элюированных с иммобилизованного лиганда увеличивающимися количествами конкурентного лиганда в элюирующем буфере. Зоны (каждая по 100 мкл на 2 мл адсорбента) [ 251]-меченного бычьего нейрофизина II элюировали с Ме1-Туг-РЬе-аминобутил-агарозы 0,4 М ацетатом аммония (pH 5,7), содержащим конкурентный лиганд лизинвазо-прессин при различных концентрациях. Увеличение концентрации растворенного конкурирующего лиганда приводит к пропорциональному уменьшению объемов элюирования меченого белка [4].

С использованием количественной аффинной хроматографии с зональным элюированием был изучен ряд взаимодействующих систем белок — лиганд и белок — белок. Ниже приведены несколько типичных примеров, показывающих обычные хроматографические результаты, получаемые при изучении моновалентных (например, нуклеаза стафилококков — нуклеотид), бивалентных (например, ТЕРС 15 IgA бивалентный мономер — фосфорилхолин) и кооперативных (например, БФН-П — пептидный гормон) взаимодействующих систем. [c.233]

В одном из них [14] для интерпретации фосфорилхолинзависи-мого элюирования иммуноглобулина А с сефарозы, содержащей ковалентно связанный фосфорилхолин (иммобилизованный реагент X), был использован приближенный анализ [17] результатов зональной хроматографии. Другие исследования были посвящены фосфатзависимому элюированию альдолазы с фосфо-целлюлозы [18] и с миофибрилл мышц кролика [28] и ЫАОН-зависимому элюированию лактатдегидрогеназы с 10-карбокси-дециламино-сефарозы [32]. Все четыре системы относятся к примеру 3, включающему конкуренцию между 5 и X за положения связывания растворенного вещества. [c.207]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология