Лиганд конкурентный

Процессы связывания, протекающие по схеме (10.1) — (10.2), часто используются в двух аспектах а) для определения равновесных констант комплексообразования с помощью конкурентного вытеснения меченого лиганда изучаемым б) для аналитического определения концентраций лигандов конкурентным методом. Рассмотрим эти аспекты применения систем конкурентного связывания подробнее. [c.247]

Таким образом, за исключением случая, когда концентрация мест связывания превышает концентрацию обоих лигандов, конкурентное [c.420]

Расширить возможности потенциометрии можно с использованием, конкурентных методик. Фактически уже метод Бьеррума является конкурентным ионы водорода вытесняются в результате конкуренции за лиганд между ионами водорода и металла. Аналогично может происходить конкуренция за лиганд между ионами металла и ртути с вытеснением последних. [c.162]

Хотя синтез аффинного сорбента с индивидуальной специфичностью при наличии одной из продажных активированных матриц и не представляет особого труда, он все же требует наличия достаточного количества очищенного аффинного лиганда, не инактивирующегося в условиях его посадки на матрицу. Заметим, что после посадки лиганда на матрицу прочность связывания с ним биоспецифического партнера может сильно уменьшиться по сравнению с тем уровнем, который наблюдался при образовании их свободного комплекса в растворе (иной раз константа диссоциации комплекса на сорбенте может оказаться на три порядка выше, чем в растворе). Это обстоятельство играет важную роль при осуществлении конкурентной аффинной элюции вещества с сорбента с использованием свободного лиганда (см. ниже). Тем не менее прочность аффинного связывания в большинстве случаев оказывается достаточной для удержания нужного вещества на матрице в условиях отмывки с нее всех сопутствующих ему примесей. Нередко прочность комплекса вещества с аффинным лигандом увеличивается, если последний имеет некоторую свободу ориентирования в пространстве, т. е. закреплен на матрице с помощью спейсера. [c.362]

За промывкой следует элюция очищенного вещества с сорбента. Как уже упоминалось, здесь можно использовать два подхода специфическую (конкурентную) элюцию и неспецифическую. Первый подход базируется на конкурентном освобождении вещества из комплекса с лигандом сорбента либо за счет элюции раствором свободного лиганда (лучше иного, чем на сорбенте), который связывает вещество в виде растворимого комплекса, удаляемого с элюентом, либо за счет внесения в элюент аналога вещества, способного образовывать биоспецифический комплекс с лигандом сорбента, вытесняя очищаемое вещество. [c.406]

Конкурентная элюция вносит дополнительный этап селективного отбора искомого вещества, что может существенно повысить степень его очистки, особенно в том случае, когда оно было фиксировано на сорбенте, обладающем групповой специфичностью. Однако этот метод имеет и свои недостатки. Для успешного освобождения вещества иэ связи с сорбентом конкурирующий лиганд или [c.406]

Подбор можно вести в пробирках, тем или иным способом оценивая эффект освобождения вещества из комплекса с сорбентом.. Для статической хроматографии такое освобождение должно быть полным уже при одном суспендировании сорбента с веществом в растворе конкурентного элюента. Для осуществления динамической хроматографии на колонке достаточно, чтобы равновесие сорбции искомого вещества заметно сдвинулось в пользу жидкой фазы. Этого обычно удается добиться, используя относительно небольшую концентрацию конкурирующего агента — того же порядка, что и концентрация лиганда на сорбенте, т. е. нередко менее 10 мМ. [c.407]

Благодаря сходству структуры своего лиганда со структурой РНК (гепарин является конкурентным ингибитором для РНКазы) гепарин-сефароза широко используется для очистки РНК-полиме-раз, обратной транскриптазы, факторов трансляции и др. [c.422]

Кроме активной извести существенное значение имеет и другой показатель состояния карбонатов в почве, характеризующий степень конкурентной способности кальция и железа в отношении органических лигандов Ионы кальция обладают значительно более слабой координационной способностью по сравнению с железом и, казалось бы, не могут конкурировать с переходными металлами в процессе комплексообразования с органическими лигандами. Однако значительно большие концентрации кальция, чем железа в карбонатных почвах, могут приводить к значительному взаимодействию лигандов с кальцием [c.478]

Метод связанных функций устанавливает общий термодинамический смысл кооперативности поведения НЬ, конкурентных взаимодействий лигандов и эффекта Бора. [c.437]

Значительно большие возможности для повышена К. в системе ионит - раствор дает использование реакций комплексообразования в жидкой фазе. В этом случае элюирование из ионита достигается не за счет конкурентной сорбции другого иона, а в результате смещения равновесия в растворе в сторону образования (нейтральных или одноименно заряженных с функциональными группами ионита) комплексных соединений. При использовании растворов комплексообразователей в качестве элюентов значения близки к отношению констант устойчивости комплексов разделяемых элементов. Поэтому при отсутствии справочных данных по коэффициентам распределения в растворах того или иного комплексообразователя для ориентировочной оценки значений можно воспользоваться данными по константам устойчивости комплексов разделяемых ионов металлов с лигандами, присутствующими в элюенте. [c.202]

В качестве лиганда обычно используют конкурентный обратимый ингибитор (см ), его ковалентно сшивают с соответствующей нерастворимой матрицей так, чтобы он не терял своей способности связываться с ферментом Матрицей с лигандом в соответствующем буферном растворе заполняют колонку, а затем через нее пропускают раствор фермента, подлежащий очистке В колонке задерживается лишь специфический фермент, а все другие примеси уходят После этого проводят элюцию специфического фермента, используя раствор субстрата в среде с другим pH и (или) ионной силой При разделении ферментов методом афинной хроматографии необходимо знать все кинетические параметры целевого фермента, располагать хорошей матрицей и удачно подобранным лигандом В качестве примера приводим схему путей сшивания лиганда с одной из возможных гидроксильных групп полиса- [c.51]

Кислотные свойства соединеннй любого элемента возрастают при увеличении степени окисления, а кислотные свойства соединений элементов каждого периода при постоянной степени окисления усиливаются при увеличении 2. Эта тенденция наиболее заметно проявляется в кислотно-основном поведении соединений, связанном с равновесиями между Н+, 0Н и НгО. При введении в раствор других лигандов сохраняются те же закономерности, но в этом случае в системе присутствуют по крайней мере три основания (ОН , НгО и введенный лиганд), и конкурентные взаимоотношения между ними становятся намного сложнее. [c.340]

Как указывалось в гл. 2 (рис. 2.1), специфически сорбированный выделяемый фермент может быть освобожден из комплекса с пришитым аффинным лигандом либо при помощи раствора конкурентного ингибитора (биоспецифическое элюирование), либо при изменении среды. Последний метод является более общим как правило, меняют pH или ионную силу раствора. Хотя влияния таких изменений могут иметь сложный характер, Грейвс и Ву [3], выводя закономерности для освобождения фермента с аффинного [c.26]

Другим наиболее часто применяемым методом освобождения фермента из его комплекса со связанным лигандом является элюирование фермента раствором конкурентного ингибитора. При этом основное требование состоит в сохранении значения Кь в ходе процесса элюирования. Уравнения (3.1) и (3.2), описывающие равновесие между ферментом и связанным аффинным лигандом, необходимо дополнить [c.30]

ЭЛЮИРОВАНИЕ КОНКУРЕНТНЫМИ АФФИННЫМИ ЛИГАНДАМИ [c.92]

В литературе можно найти много примеров элюирования конкурентными лигандами. В гл. 10 (рис. 10.5) описано выделение [c.92]

Аффинными лигандами для выделения ферментов могут быть конкурентные ингибиторы, субстраты и их аналоги, продукты, кофакторы и аллостерические эффекторы, а также антитела или соединения, которые содержат ионы металлов или SH-группы, (см. табл. 11.1). [c.108]

Для расширения возможностей потенциометрии используют конкурентные методики. Фактически уже метод Бьеррума является конкурептны.м ионы водорода вытесняются в результате конкуренции за лнганд между ионами водорода п металла. Аналогично можно использовать конкуренцию за лиганд между нонами металла и ртути с вытеснением последних. [c.359]

Аффинный сорбент с групповой специфичностью пмеет явное преимущество в том случае, когда ставится задача не только очистки, но и разделения нескольких веществ, наделенных сродством к одному и тому же лиганду. Если степень этого сродства не одинакова для разных веществ группы или если удается подобрать для них различные (специфические) конкурентные элюенты, то разделение веществ люжет быть осуществлено хроматографически, в ходе пх поочередной элюции с сорбента, что не удалось бы сделать в случае лиганда, обладающего сугубо индивидуальной специфичностью. С позиций очистки одного вещества это же положение дел можно сформулировать следующим образом снижение избирательности сорбции ири использовании сорбентов с групповой специфичностью часто удается компенсировать за счет избирательности аффинной конкурентной элюции. [c.363]

Вообще тщательную промывку аффинного сорбента перед его использованием, а особенно после длительного хранения следует предусмотреть в любом варианте аффинной хроматографии. Дело в том, что при хранении идет медленный гидролиз связей лигандов с матрицей, приводящий к освобождению, или подтеканию , лигандов ( leakage , bleeding ). Это явление опасно не уменьшением емкости сорбента (на доли процента), а тем, что перешедшие в раствор молекулы лиганда могут оказаться на два-три порядка более активными в отношении связывания вещества, чем иммобилизованные молекулы. Это создает ситуацию конкурентной элюции в тот момент, когда должна происходить посадка вещества на сорбент. Результатом такой ситуации может оказаться заметное уменьшение и даже полное отсутствие задержания вещества на сорбенте. Подтекание лигандов может происходить не только за счет отрыва их ковалентно связанных молекул от матрицы, но и в результате постепенной десорбции тех молекул лиганда, которые не были отмыты после посадки его на матрицу. [c.410]

Рис. 137. Аффинная хроматография карбоксипептидазы А на связанной с сефарозой бензилянтарной кислоте с конкурентной элюцией различными концентрациями свободного лиганда [ ueni et al, 1980]

Способность к специфическим взаимодействиям определяется наличием в молекулах порфиринов и металлопорфиринов разнообразных центров специфической сольватации, к которым, в первую очередь, следует отнести сопряженную л-систему макрокольца, реакционный центр лиганда порфирина, центральный атом металла в составе металлопорфиринов, гетероатомы, входящие в состав периферийных заместителей. В биологических структурах молекулы металлопорфиринов, как правило, принимают участие в нескольких типах последовательных или параллельных специфических взаимодействий, которые могут иметь конкурентный характер. Например, я-система и периферийные заместители железо(П)протопорфирина - простетического фрагмента гемоглобина и цитохромов вступают в специфические взаимодействия с алифитическими и ароматическими радикалами аминокислотных остатков протеина или других органических молекул (лекарственных препаратов, токсинов и т.д.), которые оказывают влияние на координационные свойства центрального атома железа и биологическую активность хромопротеина в целом [1, 2]. При этом существенное влияние имеют pH и электролитный состав среды, температура [3]. Очевидно, что изучение природных макрообъектов и анализ результатов, полученных для таких сложных многокомпонентных систем, в большинстве случаев представляет трудноразрешимую задачу и не позволяет выявить роль каждого компонента. Поэтому исследования, позволяющие вскрыть факторы, влияющие на активность металлопорфиринов и механизмы их биохимического поведения, проводятся на упрощенных модельных системах. Эти системы содержат металлопорфирин и активный молекулярный лиганд, помещенные [c.298]

Таким образом, здесь имеет место конкурентное взаимодействие хлороформа и имидазола за молекулу порфирина-лиганда. Концентрация имидазола в растворе очень мала по сравнению с концентрацией хлороформа, тем не менее "имидазольный эффект" имеет место. Изменение энтальпий переноса и экстракоординации комплексов порфиринов в системе хлороформ-имидазол принципиально не отличается от рассмотренных выше систем. [c.323]

Стереоспецифичность связывания бенздиазепинов с ЧСА характерна для гемисукцината оксазепама (СХ). Интересно отметить, что стереоспецифичностью связывания обычно обладают лиганды, имеющие несколько участков связывания на макромолекуле, например варфарин, барбитураты, азокрасители и др. Для них сродство к альбумину незначительно. Гемисукцинат оксазепама — первое соединение, обладающее большой стереоспецифичностью и сродством к молекуле ЧСА [336]. Методами гельфильтрации и кругового дихроизма установлено, что соединение СХ, имеющее 8-конфигурацию, в 40 раз превышает сродство К-энантиомера к альбумину. Такая высокая стереоспецифичность характерна только для Ь-триптофана. На основе эквимолярных концентраций триптофана и 1,4-бенздиазепинов найдено, что последние вытесняют триптофан из участков связывания на ЧСА. Характер замещения для них конкурентный [c.238]

Угли высоких стадий зрелости и графиты активно поглощают металл и образуют комплексы, в которых лигандами могут выступать молекулы растворителя. Об зтом свидетельствует расширение полосы 002 на рентгенограммах при РСА этих продуктов, что интерпретируется как расширение межплоскостного расстояния. Графитоподобные полиядерные структуры способны образовывать металле комплексы, названные сэндвичевыми. Была определена молекулярная масса ди-метилацетамидного экстракта угля, переходящая в раствор различных растворителей, она оказалась порядка 468-950 а,е,м. Аналогичные данные получены также Олиертом (481) и Ангеловой (500), На основании этого можно утверждать, что растворение угля связано не с разрывом ковалентных связей в ароматических и других структурах, а с распадом мультимерных ассоциатов за счет конкурентной сольватации с молекулами растворителя. [c.99]

Связывание Н-диазепама с мембранами мозга конкурентно ингибируется в присутствии немеченого диазепама или другого, 4-бенэо-диазепина в зависимости от концентрации Из кривых, представленных на рис. 6 1, легко определить pl fo = Ig I o и соответствующие значения концентраций немеченых лигандов, снижающих специфическое связывание меченого на 50 (/ jo). Активность немеченых лигандов можно выразить через константу ингибирования [c.89]

Принцип РИА основан на конкурентном связывании идентичных лигандов и антитела. В случае РИА оценивается конкуренция с радиоактивномеченым лигандом (обозначим его как 1 ). Меченый и немеченый лиганды конкурируют друг с другом за связывающий центр на лигандспецифичном антителе АВ свободные компоненты связанные компоненты [c.316]

Частным, но весьма распространенным случаем ингибир0ва1и1я является конкурентное ингибирование, при котором биополимер Р может связать либо Лиганд Ьь либо Ьг. В простейшем случае это имеет место, если оба лиганда связываются с одним и тем же активным центром биополимера, т.ё. конкурируют между собой за связывание с этим центром. В с.чеме (3.15) этому соответствует равепстио / = 0. Выражение (3.18) при этом преобразуется к виду [c.121]

Вычисление констант устойчивости в системах, в которых происходит конкурентное комплексообразование, сильно упрощается, если имеются только комплексы состава 1 1, например при аминополикарбоксилат-ных или полиаминовых лигандах. Кроме того, эти комплексы настолько стабильны, что можно пренебречь свободными концентрациями тех из веществ М, 1У1, Ь или Ь, избытка которых не имеется. Так, например, доминирующее равновесие в системе М, М, Ь может быть представлено как [c.24]

Взаимодействие гидроперекиси с катализатором (Мо ) происходит при непосредственном участии неиоделенньгх пар элёктроиов кислорода гидроперекиси и вакантных й-орбит металла, с образованием промежуточного комплекса с переносом заряда, реакция (а). Под действием сильного электроположительного поля молибдена смещается электронная плотность внутри молекулы гидроперекиси по направлению к молибдену, и тем самым ослабляется связь О — О, соседняя с координационной Мо — О [13]. Вследствие этого один из атомов кислорода гидроперекиси приобретает частичный положительный заряд ( б) и координированная молекула гидроперекиси становится более электрофильной по сравнению со свободной молекулой. Активированная молекула гидроперекиси образует с олефином промежуточный я-комплекс, в котором происходит разрыв ослабленной связи 0 — 0 (б) под действием нуклеофильного реагента — олефина. Эта стадия является наиболее медленной, о чем свидетельствует увеличение скорости реакции при возрастании электронной плотности около двойной связи (см. табл. 1). Затем происходит обмен лигандами (в). На глубоких стадиях реакция осложняется явлением конкурентного ингибирования. [c.272]

Вероятно, такое взаимодействие имеет место во многих случаях. Так, например, ионы меди (II) легко образуют тройные комплексы в растворах, содеожащих амины в качестве пеового лиганда и различные электроотрицательные лиганды, как роданид, салицилат и другие, в качестве второго лиганда. Другой результат получается в том случае, если лигандом является аминоуксусная кислота, образующая с медью хелатное соединение, содержащее. как координационную (донорио-акцепторную), так и обычную связь (замещение иона водорода карбоксильной группы). В этом случае взаимодействие с различными лигандами не приводит к образованию тройных соединений. Соответствующие растворы имеют аддитивные свойства, т. е. реакция идет по конкурентному типу (3) или (9). Вероятно, что диспропорционирование тройного (смешанного) комплекса по схеме (9) правильнее отражает физическое содержание процесса, чем уравнение (3), которое само но себе не может объяснить конкуренции лигандов, если в коооди-национной сфере центрального атома имеются свободные (или занятые только водой) места. [c.336]

Извлечение металлов нейтральными фосфорорганичеокими экстрагентами сопровождается вытеснением воды и сольватацией нейтральных соединений, первоначально присутствующих в водной фазе. При определенных условиях М01гут экстрагироваться также ионные аосоциаты. Экстракция катионов металлов обычно является результатом конкурентною взаимодействия эюстрагента, воды и анионов или других присутствующих в водном растворе лигандов с катионом. В органическую фазу извлекается нейтральное соединение катиона металла с анионом или анионным лигандом, и его состав отнюдь не обязательно должен совпадать с составом основного соединения в водной фазе. [c.134]

Рис. 2.1. Схема биоспецифической адсорбции (Л), элюирования деформирующим буферным раствором (5) и биоэлюнрования растворимым конкурентным лигандом (В) [17].

Для упорядоченного механизма иммобилизация лиганда А подвержена обычным ограничениям аффинной хроматографии. Б этом случае иммобилизация лиганда В не приводит к конкурентному сорбенту для комплементарной молекулы исключение составляют случаи, когда лиганд А присутствует в рабочем буферном растворе, в котором наносят фермент на колонку. Таким образом, присутствие лиганда А является необходимым для связывания сорбентом ферментов, поскольку лиганд В связывает двойной комплекс лиганд А — фермент. Это позволяет ввести в хроматографию предварительный отбор — из бирательное связывание, последующее элюирование достигается удалением лиганда А из рабочего буферного раствора. [c.110]

Очень выгодное с теоретической точки зрения элюпрование конкурентным аффинным лигандом имеет, однако, много практпчес- [c.268]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология