Марбрука прибор

Рис, I. Малый, средний н большой приборы для культивирования лимфоцитов по Марбруку. [c.230]

Рис. 2, Средний прибор для культивирования по Марбруку. Л. Схема устройства, а—стеклянная вставка для взвеси клеток 6 — кольцо нз силиконовой резины в — диализная мембрана г — универсальный пластиковый флакон, содержащий среду с —канал для газообмена е —пробка из силиконовой ре.шиы. Б и В. Фотографии действующего прибора (подробности в тексте).

Хелперная активность культуральной жидкости после эксплантации клеток селезенки в большом, среднем и малом приборах Марбрука Таблица 3 [c.233]

Большой прибор для культивирования лимфоцитов по Марбруку кристаллизационные чашки из стекла Pyrex диаметром 10 см ребристые чашки из стекла Ругех диаметром 15 см специально изготовленные стеклянные воронкообразные вставки. [c.227]

Марбрук (Marbrook) впервые описал свой метод в 1967 г Прибор состоит в основном из двух камер — внутренней и на ружной — разделенных полупроницаемой мембраной (рис. 1) Обычно применяют диализную мембрану, ио можно использо вать и мембраны фирмы Nu leopore. Клетки растут в неболь U1UM объеме культуральной среды во внутренней камере, кото рая погружена в большой объем среды, заполняющей наруж ную камеру. Объем среды в каждой из этих камер зависит, разумеется, от размеров выбранного прибора, но для получения оптимальных результатов нужно, чтобы в наружной камере содержалось по крайней мере в 5 раз больше среды, чем во внутренней чаще всего используют соотношение 10 1. [c.229]

Условия получения антнген-специфнчсского хелперного фактора первоначально были определены в опытах со средним прибором для культивирования по Марбруку (рис. 2). Прибор состоит нз универсального пластикового или стеклянного стерильного флакона, специально изготовленной воронкообразной стеклянной вставки (ее можно заменить простой трубкой. нз стекла Ругех диаметром 1 см) и пробки из силиконовой резины, в которой высверлены два канала одии для стеклянной вставки, другой для газообмена с атмосферой термостата. Как известно, силиконовая резина не токсична для культивируемых клеток. Можно применять пробки и из другого доступного материала, предварительно определив его безвредность путем инкубации мелких кусочков с клетками и последующей оценки жизнеспособности культуры. После 4 дней культивирования число жнвых клеток должно составлять 20—40% исходного числа. [c.229]

Подготовка прибора к использованию. В стерильный уни-версальный пластиковый флакон вносят пипеткой 10 мл культуральной среды. Колпачок флакона заменяют стерильной вставкой таким образом, чтобы диализная мембрана оказалась ниже уровня среды в наружной камере. При погружении вставки проверяют, цела ли мембрана и нет ли утечки в местах ее прикрепления. Если все в порядке, внутрь камеры не должно проникнуть ни одной капли среды. После этого стерильной пастеровской пипеткой во внутреннюю камеру вносят 1 — 1,5 мл суспензии клеток. Чтобы точнее отмерить объем вносимой суспензии, рекомендуется вместо резиновой груши присоединить к пастеровской пнпетке через трубку 2-миллилитровый шприц. Затем верхнее отверстие вставки набивают стерильной ватой. После этого культура готова для инкубации. Средние приборы Марбрука имеют довольно тяжелую верхнюю часть, поэтому на всех этапах культивирования их следует держать в штативе для пробирок. [c.232]

Из 1 Миллилитровых приборов Марбрука можно собрать лишь очень небольшое количество культуральной среды, содержащей хелперный фактор между тем для биохимического анализа и выделения активных молекул требуются довольно большие ее объемы. С этой целью используют камеры, в которых можно культивировать по 3-10 (вместо 10 ) клеток (рис. 3). В принципе размеры камер лимитируются только тем, что коммерческие диализные трубкн ие бывают шире 43 мм. Еслн такую трубку разрезать вдоль, то получится лента шириной около 85 мм, которой можно перекрыть внутреннюю камеру диаметром ие более 60 мм. Камеры сделаны из стекла Ругех в виде вставок в кристаллизационные чашки диаметром 10 см, изготовленные из того же стекла. Крышки этих камер по высоте должны быть меньше кристаллизационных чашек, чтобы предотвратить инфицирование культуры из воздуха, циркулирующего в термостате. В качестве крышки удобнее всего использовать ребристую чашку из стекла Ругех диаметром 15 см типа формочки для пудинга нлн желе. Внутрь вставки, затянутой диализной мембраной, помещают 30 мл клеточной взвесн, а в кристаллизационную чашку—150 мл культуральной среды, что позволяет получить значительные объемы среды, содержащей хелперный фактор. [c.234]

Еслн выбрано культивирование по Марбруку, то наиболее удобен малый прибор (рнс. 4). Он состоит из выдерживающей автоклавирование пластмассовой пластннкн, которая по размерам повторяет 24-луночную панель ostar . В этой пластинке высверлены 24 отверстия, в которые вставлены обрезанные наконечники от пипетки Sele tapette . Эти наконечники имеют ободок по верхнему краю, и позтому нз них удобно делать [c.236]

Хелперную активность культуральной жидкости можно определить также в Ьмнллилитровых приборах Марбрука. В этом случае во внутреннюю камеру вносят 10 живых клеток селезенки и соответствующее количество аитнгеиа и хелперного фактора. Культуру инкубируют 4 дня и методом пассивного локального гемолиза определяют число АОК- Следует отметить, что число АОК иа культуру в малых (200 мкл) и средних (1 мл) приборах Марбрука получается примерно одинаковым, т. е. помимо явной экономности, малый прибор обеспечивает в 3—5 раз большую эффективность при индукции образования антител. Причины этого пока неясны. [c.237]

Данные, представленные в табл. 2 и 3, получены в системе Мишелла — Даттона. Они позво тяют сопоставить эффективность индукции клеток-хелперов и активность хелперных факторов при культивировании клеток селезенки в трех разных приборах Марбрука. Как видно, результаты вполне сравнимы,, и выбор прибора определяется тем, с какими мышами работает исследователь и что он изучает — функциональные или биохимические свойства хелпериых факторов. [c.238]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология