Фактор хелперные

Тимус-зависимые антигены требуют присутствия Т-хелперов. В результате взаимодействия В-клетки с антигеном образуется комплекс антиген—рецептор. Далее происходит интернализация этого комплекса в цитоплазму клетки, где антиген гидролизуется на отдельные фрагменты. Эти фрагменты взаимодействуют с белками МНС класса II, которые синтезирует В-клетка (рис. 30.6). Фрагмент антигена соединяется с МНС-П и перемещается на клеточную мембрану, где он узнается хелперными клетками, предварительно контактирующими с данным антигеном. Клетки синтезируют и переводят на цитоплазматическую мембрану рецептор, комплементарный структуре комплекса МНС-антиген. Происходит взаимодействие В- и Т-хелперной клеток, причем последняя начинает продуцировать интерлейкин-2, белковый фактор, стимулирующий размножение В-клеток. В результате образуются зрелые клоны плазматических клеток, способных синтезировать и секретировать антитела к данному антигену (рис. 30.7). [c.483]

Интересно заметить, что, по мнению некоторых авторов, не существует раздельно хелперов и супрессоров, а просто один и тот же Т-лимфоцит может выделять усиливающий или ингибирующий фактор [120]. В свете сделанного нами предположения можно допустить и существование одного фактора, конкурирующего за рецепторы В-клеток для F -фрагмента IgT. Это удовлетворительно объясняет естественное снижение иммунного ответа со временем накопление хелперного фактора приводит к захвату им рецепторов В-клеток и тем самым тормозит продукцию антител. [c.14]

АНТИГЕН-СПЕЦИФИЧЕСКОГО ХЕЛПЕРНОГО ФАКТОРА ПРИ КУЛЬТИВИРОВАНИИ ЛИМФОЦИТОВ ПО МАРБРУКУ [c.229]

А. Получение антиген-специфического хелперного фактора [c.229]

Индукция синтеза хелперного фактора осуществляется в два этапа. Сначала происходит индукция клеток-хелперов. Для этого требуются 4 дня инкубации при 37 °С во влажной атмосфере, содержащей 5% СО2. Собранные в конце 4-го дпя клеткн можно использовать как хелперы нли как продуценты хелперного фактора (табл. 2 и 3). Для получения хелперного фактора клеткн интенсивно отмывают бессывороточной средой и ресуспендируют в культуральной среде без СПК, вновь доводя концентрацию до 10 живых клеток в 1 мл и прибавляя столько [c.232]

АНТИГЕН-СПЕЦИФИЧЕСКОГО ХЕЛПЕРНОГО ФАКТОРА [c.236]

А. Добавление хелперных факторов [c.253]

ИЛ-4, или фактор 1, стимулирующий В-клетки. Он модулирует переключение синтеза классов Ig. ММ его 15 кДа в негликозили-рованной форме и 20 кДа — в гликозилированной индуцирует синтез IgE, выполняя при этом хелперную функцию, экспрессию F -рецепторов. [c.566]

Известно, что в процессе антителогенеза происходит смена антител, принадлежащих к различным классам иммуноглобулинов. Было показано, что факторы, выделяемые Т-лимфоцитами-хелперами и влияющие на синтез антител одной гаптенной специфичности, но принадлежащие к различным классам (IgG, IgE), различаются по своей относительной молекулярной массе. В переходе же синтеза первичных антител макроглобулинового класса (IgM) в синтез более поздних антител IgG против динитрофенильного конъюгата принимают участие не только хелперные, но супрессорные факторы [78]. Следовательно, все этапы продукции антител находятся под регулирующим влиянием Т-лимфоцитов. [c.15]

При отсутствии антигенной афессии специфические антитела не образуются. По этому признаку процесс антителогенеза классифицируется как ицдуцибельное явление. Фактором индукции служит антиген. Однако, как и в случае с Т-клетками, одного специфического сигнала от антигена недостаточно для начала синтеза антител В-клетками. Необходим второй сигнал для реализации информации от специфического индуктора. Роль второго сигнала исполняют цитокины, продуцируемые хелперными D4 Т-клетками. Получение второго сигнала для полноценного развития В-клеток в антителопродуцирующие плазмоциты возможно при непосредственном контактном Т-В-взаимодействиии. [c.239]

Поверхностный иммуноглобулин (sig) ифает двойную роль при трансформации В-клеток в антителопродуцируюшие плазмоциты. Во-первых, подобно антигенраспознающему рецептору Т-клеток он передает сигнал о встрече с антигеном непосредственно внутрь клетки. Во-вторых, служит молекулярным фактором захвата этого антигена для переноса его в цитоплазму клетки. Там антиген разрушается до отдельных пептидов, которые в комплексе с молекулами II класса МНС выносятся на поверхность клетки. Иммуногенный комплекс является объектом распознавания антигенспецифическими хелперными D4 Т-клетками (Тн2), которые обеспечивают второй сигнал для активации В-клеток (см. рис. 9.9 3). [c.241]

Поверхностный иммуноглобулин В-клеток несет двойную нафузку в процессе созревания плазмоцитов. Во-первых, он выполняет роль антигенраспознающей структуры, передавая сигнал о встрече с антигеном внутрь клетки. Во-вторых, служит фактором захвата антигена для его переноса внутрь клетки. После внутриклеточной переработки антигенные пептиды в комплексе с молекулами II класса МНС выносятся на клеточную поверхность. Иммуногенный комплекс распознается антигенспецифическими хелперными Т-клетками, которые и обеспечивают второй сигнал для В-клеточной пролиферации и дифференцировки. В процесс функционального созревания В-клеток включаются также цитокины и мембраносвязанные белки Т-лимфоцитов. Существенным моментом процесса распознавания антигена является феномен сцепленного распознавания. Суть его состоит в следующем. При инициации иммунного ответа на сложный антиген взаимодействующие В- и Т-клетки должны распознать этот антиген, но не обязательно те же самые антигенные эпитопы. Это яштение получило название сцепленного распознавания. [c.264]

Одним из основных факторов подавления клеточного и гуморального иммунного ответа в пожилом возрасте является нарушение функциональной активности хелперных Т-клеток, в результате необходимая помощь этих клеток при формировании как Т-, так и В-клеточного ответа оказывается недостаточной. Вторым существенным фактором возрастного нарушения иммунной реактивности является подавление активности Т-супрессоров. Сниженная активность этих двух субпопуляций Т-клеток вносит свой вклад в развитие так называемых болезней возраста — злокачественных опухолей и аутоиммунных повреждений. В таблице 19.2 суммированы некоторые показатели активности Т- и В-систем иммунитета у людей пожилолго возраста. [c.389]

Активированные Т-хелперы способны продуцировать антигенспецифический Т-хелперный фактор (ТРн), который способен заменить Т-хелперы в культуре клеток in vitro и обеспечить в присутствии антпгена активацию В-лимфоцитов. Указанный фактор не содержит структур, соответствующих константному участку тяжелой цепи иммуноглобулина, но он имеет идиотипические детерминанты, совпадающие по структуре с такими же детерминантами антител и иммуноглобулиновых рецепторов, и реагирует с антителами против 1а-белка. Поэтому можно предположить присутствие в его структуре вариабельного участка тяжелой цепн и 1а-белка. Видимо, описываемый фактор концентрируется на поверхности В-лимфоцита с помощью антигена. [c.217]

В смешанной культуре лейкоцитов стимуляции подвергается гетерогенная популяция клеток. Помимо ЦТЛ индуцируются Т-хелперные клетки и происходит образование факторов, которые могут активировать и (или) вызывать размножение так называемых В- и Т-клеток- свидетелей (von Boehmer, 1974). Несмотря на это, при стимуляции клеток иммунизированных или интактных животных облученными клетками селезенки, которые экспрессируют соответствующий антиген, удается получить существенное обогащение популяции антиген-специфическими Т-клетками. Мы обнаружили, что приблизительно 20—30% Т-клеточных клонов, выделенных через 10—12 сут после стимуляции in vitro (при эффективности клонирования 10—12%),обладают специфичностью в отношении антигенов клеток-стимуляторов. [c.293]

Тематика восемнадцати глав настоящего тома в известной мере отражает основные тенденции развития современной иммунологии. В семи главах в центре внимания находятся моноклональные антитела и антигены клеточной поверхности три главы посвящены использованию новейших достижений техники разделения биологических макромолекул и изучения поверхностных явлений в иммунологических взаимодействиях далее описаны новые, усовершенствованные варианты ряда известных экспериментальных подходов (методика гаптенизирова шых антител, выделение и клонирование Т-хелперов, определение хелперных факторов, обратный пассивный локальный гемолиз, метод лимитирующих разведений) в трех главах представлены новые методы клинической иммунологии (типирование HLA DR-антигенов, выявление антител к ДНК, оценка первичного иммунного ответа лимфоцитов человека in vitro). [c.5]

ПОЛУЧЕНИЕ in vitro и ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ АНТИГЕН-СПЕЦИФИЧЕСКИХ Т-ХЕЛПЕРНЫХ ФАКТОРОВ [c.227]

При культивировании мышиных лимфоцитов в среду выде ляются факторы, помогающие образованию антител и заменяющие Т-хелперы. Хелперная активность была обнаружена в среде при культивировании лимфоцитов, стимулироваииых 1) аллогенными клетками, 2) митогенами и 3) чужеродными антигенами. Некоторые характеристики этой активности сопоставлены в табл. 1. [c.227]

В этой главе описан метод индукции синтеза антиген-специфического Н-2-неограниченного хелперного фактора в культуре лимфоцитов от неиммунной непримироваиной) мыши. [c.227]

Известны два основных метода культивирования лимфоцитов in vitro метод Мишелла—Даттона и метод Марбрука. По неясным пока причинам в системе Мишелла — Даттона не удается индуцировать синтез антиген-специфического хелперного фактора поэтому приходится использовать только метод Марбрука. [c.229]

Условия получения антнген-специфнчсского хелперного фактора первоначально были определены в опытах со средним прибором для культивирования по Марбруку (рис. 2). Прибор состоит нз универсального пластикового или стеклянного стерильного флакона, специально изготовленной воронкообразной стеклянной вставки (ее можно заменить простой трубкой. нз стекла Ругех диаметром 1 см) и пробки из силиконовой резины, в которой высверлены два канала одии для стеклянной вставки, другой для газообмена с атмосферой термостата. Как известно, силиконовая резина не токсична для культивируемых клеток. Можно применять пробки и из другого доступного материала, предварительно определив его безвредность путем инкубации мелких кусочков с клетками и последующей оценки жизнеспособности культуры. После 4 дней культивирования число жнвых клеток должно составлять 20—40% исходного числа. [c.229]

Индукция синтеза антиген-специфического хелперного фактора. Из свежей мышииой селезенки приготовляют взвесь клетвк-продуцентов. Клетки отмывают центрифугированием при 1100 об/мин в течение 10 мии при комнатной температуре или прн 4Х. Осадок ресуспендируют в среде RPMI 1640 или МСИ, к которой добавлено 200 ед/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина, L-глутамин (20 мМ), 2-меркаптоэтанол (10 М) и СПК. Оптимальное количество прибавляемой СПК зависит от сернн препарата и обычно варьирует от 2 до 10%. Концентрацию клеточной взвеси определяют с помощью красителя, окрашивающего живые клеткн, и доводят ее до 10 клегок/мл (колебания концентрации от 5-10 до 1,5 10 клеток/мл существенно не влияют па условия культивирования). К клеточной взвеси добавляют антиген [KLH в концентрации 0,1 мкг/мл, а синтетические полимеры (Т,G)-A—L н GAT °—1 мкг/мл]. Взвесь вносят в прибор для культивирования, как описано выше. [c.232]

Из 1 Миллилитровых приборов Марбрука можно собрать лишь очень небольшое количество культуральной среды, содержащей хелперный фактор между тем для биохимического анализа и выделения активных молекул требуются довольно большие ее объемы. С этой целью используют камеры, в которых можно культивировать по 3-10 (вместо 10 ) клеток (рис. 3). В принципе размеры камер лимитируются только тем, что коммерческие диализные трубкн ие бывают шире 43 мм. Еслн такую трубку разрезать вдоль, то получится лента шириной около 85 мм, которой можно перекрыть внутреннюю камеру диаметром ие более 60 мм. Камеры сделаны из стекла Ругех в виде вставок в кристаллизационные чашки диаметром 10 см, изготовленные из того же стекла. Крышки этих камер по высоте должны быть меньше кристаллизационных чашек, чтобы предотвратить инфицирование культуры из воздуха, циркулирующего в термостате. В качестве крышки удобнее всего использовать ребристую чашку из стекла Ругех диаметром 15 см типа формочки для пудинга нлн желе. Внутрь вставки, затянутой диализной мембраной, помещают 30 мл клеточной взвесн, а в кристаллизационную чашку—150 мл культуральной среды, что позволяет получить значительные объемы среды, содержащей хелперный фактор. [c.234]

В лунки панели ostar вносят по 2,5 мл среды, а затем паиель накрывают стерильной пластинкой со вставками и в каждую вставку вносят по 200 мкл взвеси, содержащей 1,5 10 живых спленоцитов в 1 мл, нужное количество антигена и исследуемый хелперный фактор. Панель накрывают крышкой и культуры помешают на 4 дия в термостат при 37 X во влажную атмосферу с СОд. В конце культивирования содержимое вставок исследуют методом пассивного локального гемолиза по Канинигему и определяют число АОК. [c.237]

Прн образовании антител разной специфичности требуется различное количество антигена и хелперного фактора. Например, при оценке активности KLH-спецнфнчного хелперного фактора мы добавляли к взвесн индикаторных клеток [c.237]

Хелперную активность культуральной жидкости можно определить также в Ьмнллилитровых приборах Марбрука. В этом случае во внутреннюю камеру вносят 10 живых клеток селезенки и соответствующее количество аитнгеиа и хелперного фактора. Культуру инкубируют 4 дня и методом пассивного локального гемолиза определяют число АОК- Следует отметить, что число АОК иа культуру в малых (200 мкл) и средних (1 мл) приборах Марбрука получается примерно одинаковым, т. е. помимо явной экономности, малый прибор обеспечивает в 3—5 раз большую эффективность при индукции образования антител. Причины этого пока неясны. [c.237]

ЖИВЫХ снленоцитов в 1 мл, 0,3 мкг/мл ДНФ-KLH и соответствующие разведения хелперного фактора в среде RPMI 1640 с СПК. Панели герметически закрывают в пластиковых коробках, заполненных воздухом с 5% СОг, и помещают на 4 дия в термостат на качающуюся платформу при 37 С. После этого извлекают клетки и определяют число АОК методом пассивного локального гемолиза. [c.238]

Инкубируя клетки с неспецифическнми антигенами, можно получить данные об иммунологической специфичности хелперных факторов, образующихся при культивировании лимфоцитов по Марбруку. Следует отметить, что специфические факторы проявляют хелперную активность в культурах спленоцитов мышей nude при ответе на гомологичные антигены, но неэффективны при ответе иа эритроциты барана. [c.238]

Данные, представленные в табл. 2 и 3, получены в системе Мишелла — Даттона. Они позво тяют сопоставить эффективность индукции клеток-хелперов и активность хелперных факторов при культивировании клеток селезенки в трех разных приборах Марбрука. Как видно, результаты вполне сравнимы,, и выбор прибора определяется тем, с какими мышами работает исследователь и что он изучает — функциональные или биохимические свойства хелпериых факторов. [c.238]

Образование растворимых хелперных факторов, способных заменять Т-клетки при образовании антител in vitro, можно индуцировать, культивируя лимфоциты по Марбруку. Следует, однако, подчеркнуть, что техническая сложность методики требует большой тщательности при постановке эксперимента особое внимание нужно обращать на такие детали, как подготовка диализной мембраны (мембрана может быть плохо отмыта), выОор подходящей fipo6KH и обхватки для закрепления мембраны (резина может быть токсична для клеток) н т. п. [c.239]

В основе метода лежит серийное микрокультивирование различного количества отвечающих клеток в присутствии избытка стимулирующих клеток. Доза отвечающих клеток подбирается таким образом, чтобы в каждом случае часть культур вообще НС содержала ЦТЛ-П. При этом важно, чтобы единственным лнмнтирующнм компонентом в пробе былн ЦТЛ П, а другие клеткн и хелперные факторы Т-клеток должны быть в избытке. После 6—8 дней инкубации в содержимом лунок панелей для микротитровання определяют цитотоксиче-скую активность по освобождению Сг. Затем подсчитывают, сколько не ответивших (т. е. не содержавших ЦТЛ-П) культур приходится на каждую дозу отвечающих клеток. Это позволяет вычислить частоту ЦТЛ-П, используя член нулевого порядка в распределении Пуассона (разд. V). [c.249]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология