Холат, диализ

В виде искусственных мембран различной структуры (рис. 1.8). Обработка смеси комплексов с фосфолипидами ультразвуком приводит к образованию монослойных мицелл или липосом (рис. 1.8, Б). С помощью другого метода суспензию комплексов и липидов, содержащую также желчные соли (холат, дезокси-холат), диализуют против буфера, что приводит к медленному понижению концентрации детергента (холата) и образованию многослойных липосом (рис. 1.8, Л). Липосомы можно затем приклеивать к плоскому липидному бислою и проводить прямые измерения электрического потенциала (Dra hev et al-, 1974 рис. 1.8, Г). Такой плоский бислой можно создать также, пропитав липидами миллипоровый фильтр (Skula hev, 1976 Blok el al, 1977 рис. 1.8, В). [c.19]

II. Слабоионные детергенты. В присутствии дезоксихолата, по-видимому, происходит наиболее полная солюбилизация мембран, а относительно высокая критическая концентрация мицеллообразования у этого детергента позволяет удалять его с помощью диализа. Кроме того, благодаря малому размеру мицелл связанный детергент не влияет на поведение солюбилизированных белков во время гель-фильтрации. Мы обычно применяем гель-фильтрацию после очистки на колонке с МКА для того, чтобы освободиться от незначительных примесей. Недостаток дезоксихолата заключается в том, что при pH ниже 8, а также в присутствии солей он превращается в гель. Холат, в этом смысле, причиняет меньше хлопот, но он и менее эффективен для солюбилизации. Однако иногда удобно солюбилизировать препарат в дезоксихолате, а после связывания антигена на колонке заменить его холатом. При работе с лимфоидной тканью, если предусматривается солюбилизация солями желчных кислот, необходимо предварительно удалить клеточные ядра. В противном случае высвобожденная ДНК значительно увеличит вязкость раствора. Если же антигены выделяют из мозговой ткани, в которой количество клеточных ядер на единицу веса гораздо меньше, можно сразу проводить экстракцию дезоксихолатом, поскольку в этом случае вязкость экстракта, очевидно, не будет чрезмерной. [c.187]

Рис. 1.8. Некоторые системы для реконструкции протонпереносящих омплексов. А. Диализ. Суспензию смеси комплексов с природными или синтетическими фосфо- липидами в холате медленно диа-лизуют, чтобы убрать детергент. Б. Обработка ультразвуком. Смесь комплексов и фосфолипидов обрабатывают ультразвуком в отсутствие детергентов. Образуются однослойные липосомы. В. Бислой на миллипоре. Бислойные участки, содержащие комплексы, образуются в порах, мембранного фильтра, так что общая площадь плоской мембраны оказывается очень большой. Г. Липосомы сливаются с бислойной ( черной ) плоской мембраной, что позволяет проводить прямые измерения электрического потенциала.

Метод реконструкции был впервые разработан Рэкером и Ка-гавой. Уже после выделения чистого комплекса при реконструкциях возникает ряд технических проблем. Во-первых, после встраивания в бислой комплекс должен сохранять каталитическую активность. Во-вторых, следует учитывать, что после реконструкции протонные помпы могут быть ориентированы в мембране случайным образом, что затрудняет измерение их протон-переносящей активности. Для включения комплексов в везикулы их обычно суспендируют в смеси холата и фосфолипидов, а затем медленно удаляют детергент с помощью диализа. Везикулы с встроенными в мембрану комплексами образуются самопроизвольно. Другой метод состоит в том, что комплексы в смеси с фосфолипидами обрабатывают ультразвуком (разд. 1.4). [c.116]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология