Векторы интегративные

В ряде слз аев молекулярные векторы могут обеспечивать интеграцию чужеродной ДНК в геном клетки или вируса. Такие молекулы ДНК называют интегративными векторами. [c.32]

Плазмидные интегративные векторы [c.257]

Изучение функции центромер в составе гибридных плазмид имеет определенные ограничения. Оно не позволяет выявить тонкие дефекты функций центромер, поскольку такие плазмиды гораздо менее стабильны в митозе по сравнению с природными хромосомами. Поэтому важен подход, основанный на введении в состав хромосом измененных центромерных участков, инактивации природной центромеры или замены ее на другую. Инактивации центромерного локуса в составе хромосомы можно добиться встройкой в этот локус интегративного вектора, несущего нефункциональный гомологичный центромерный локус. Хромосома с инактивированной центромерой становится крайне нестабильной. Стабилизировать такую хромосому можно, введя в ее состав через другой интегративный вектор новую центромеру. Центромера при этом может быть включена не в центромерный локус хромосомы, а в другой участок. Более того, интегрируемая центромера может быть гетерологичной, т. е. от другой хромосомы. Последнее, в частности, указывает на [c.304]

Интеграция — результат рекомбинации между гомологичными последовательностями плазмидной ДНК и хромосомы клетки-хозяина. Интегрированная копия плазмидного вектора оказывается фланкированной прямыми повторами дупликации подвергается участок взаимной гомологии плазмидной и хромосомной ДНК- Рис. 7.2 иллюстрирует рекомбинационные события в области гена leu ine 2. У многих трансформантов наблюдается множественная интеграция плазмид в виде тандемно повторяющихся копий (рис. 7.2). Часть интегративных рекомбинационных событий происходит как двойной кроссинговер. Эта схема может привести к замещению участка хромосомной ДНК на гомологичный участок плазмидной ДНК без интеграции векторной части рекомбинантной плазмиды. Интеграция может произойти Б любом месте генома при условии, что в этом месте находится последовательность, гомологичная участку плазмидной ДНК-Единственное исключение составляет геномный сайт плазмидного селективного маркера. [c.213]

Явление амплификации сегментов хромосомной ДНК у актиномицетов может быть использовано для конструирования интегративных амплифицирующихся векторов, в которых чужеродный ген включается внутрь АП. [c.169]

Векторы рассматриваемого типа обычно содержат репликон, функционирующий в клетках Е. соИ, а также детерминанты устойчивости к антибиотикам, хотя бы одна из которых экспрессируется в В. subtilis. Интегративные трансформанты В. subtilis выявляют по функциям этих плазмидных детерминант. Используя интегративные векторы, можно любые чужеродные гены ковалентно встраивать в геном бактериальной клетки. [c.257]

Размер гена dhfr составляет примерно 32 тпн, хотя для кодирования белка необходимо лишь 558 пн. Данный ген имеет раздробленную структуру и состоит из шести экзонов, разделенных протяженными интронами. Конструирование интегративного вектора на основе такого крупного фрагмента ДНК малоперспективно. Поэтому усилия исследователей были направлены на клонирование кДНК дигидрофолатредуктазы или кодирующей последовательности аналогичного бактериального гена. [c.344]

В другой работе промоторную область длинного концевого повтора ДНК вируса саркомы Харвея состыковали с последовательностью кДНК дигидрофолатредуктазы мыши. Сконструированный гибридный ген в составе pBR322 ввели в клетки мыши и продемонстрировали возможность трансформации клеток к фенотипу Mtx . Гибридный ген направлял эффективный синтез дигидрофолатредуктазы и амплифицировался при росте клеток на среде с повышенной концентрацией метотрексата. Созданные плазмиды удобно использовать как интегративные векторы, с помощью которых можно вводить в геном клеток млекопитающих [c.344]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология