Векторы прямой селекции

В последние годы получен ряд векторных плазмид, предназначенных для прямой селекции трансформантов, содержащих гибридные плазмиды (см. 2.2.8). Такие векторы обычно имеют гены, потенциально летальные для чувствительных клеток-реципиентов, и могут трансформировать эти клетки только после инактивации данных генов встраиванием в них фрагментов ДНК. [c.34]

При конструировании гибридов на основе векторных молекул ДНК фага А или фагов серии М1 Зтр удается осуществлять прямой отбор клонов гибридных фагов. В случае же использования плазмидных векторов прямой отбор клеток, содержащих гибридные плазмиды, часто невозможен. Поэтому возникла необходимость в разработке векторных плазмид с системой прямой селекции гибридных вариантов. Предпринятые исследования привели к созданию широкого спектра таких клонирующих векторов некоторые из них мы рассмотрим. [c.118]

Как видим, общие подходы к созданию векторных плазмид для прямой селекции их гибридных производных сформулированы и получены разнообразные варианты таких плазмидных векторов, позволяющих существенно облегчить выполнение экспериментов по клонированию фрагментов ДНК. [c.121]

Векторы прямой селекции. Такие векторы содержат ген (или сайт), продукт которого (или сама последовательность) в определенных условиях является ядом для клеток. Мищенью может быть ген-репрессор, контролирующий ген антибиотикоустойчивости или . итотоксические гены (например, kil, d), находящиеся под строгим контролем. Инактивация подобных генов внедрением в [c.200]

Возможность прямой селекции мутаций. Требуют сошания векторов [c.76]

Реальная емкость вектора определяется не только его размером, но и минимальной величиной ДНК, которая может упако- аться в фаговую головку (36 т.п п.). Поэтому вводятся понятия максимальной и минимальном емкости фаговых векторов. Под этими понятиями подразумевается максимальное и минимальное соличество ДНК, которое можно клонировать в векторе. Эти величины определяются как разность, соответственно, между максимальным или минимальным размером упаковываемой ДНК и суммарным размером плеч вектора. Например, если у вектора сумма плеч равна 34 т.п.н., то в нем можно клонировать фрагменты ДНК Псзмером от 2 (минимальная емкость) до 18 т.п.н. (максимальная емкость). Отметим, что если в последнем примере вектор является вектором внедрения, то он не образует жизнеспособных фагов, а, екДНК, сделанная на его основе, образует. Это обстоятельство, южно использовать как фактор прямой селекции рекомбинантных фагов, несущих вставки ч -жДНК [c.207]

Клонирование. Из данных табл. 9.1 видно, что для составления представительной геномной бибпиотеки необходимо собрать большое число клонов, достигающее для высших эукариот нескольких сотен тысяч и даже миллионов. Подчеркнем, что речь идет о клонах, содержащих рекДНК. Отсюда понятно, почему в системах клонирования, предназначенных для конструирования гаких библиотек, серьезное внимание уделяется проблеме прямой селекции подобных клонов. Ни один из методов не абсолютен. По этой причине стараются поставить, как минимум, два барьера против l Jтoнoв, не содержащих рекДНК. Одним из таких барьеров слу жит ограничение размера ДНК при ее упаковке в фаговые головки. Поэтому часто применяют векторы, сконструированные на базе ДНК фагов Л и Р1. [c.273]

Для клонирования пео-содержащих провирусов предложены две упрощенные методики каждая из них предполагает селекцию искомого клона в клетках . oli на устойчивость к канами-цину. Одна из методик представляет собой модифицированную процедуру спасения маркера и предусматривает прямое клонирование провируса в плазмидном векторе. Другая методика, гораздо более эффективная, требует применения специальных ретровирусных челночных векторов, описанных в разд. 9.3.2.4. [c.300]

Структура таких векторов стандартна. Они содержат все необходимые элементы для манипулирования ими в клетках Е. oli, маркер для селекции растительных трансформантов и полилинкер (рис. 12.5,а). Особенно важно отметить, что эти векторы можно использовать для трансформации протопластов как однодольных, так и двудольных растений. Их небольшой размер (несколько т.п.н ) позволяет достигать достаточно высокого уровня трансформации (10 —10 ) при введении рекДНК в протопласты с помощью полиэтиленгликоля, липосом и методом электропорации. Апробирован также метод прямой микроинъекции рекДНК в ядра протопластов. Частоты трансформации при этом [c.382]

В этой главе мы рассмотрим разнообразные типичные системы хозяин-вектор и первые три требования, которые имеют к этой теме прямое отношение, поскольку методы, используемые для скрининга и селекции, в основном зависят от определенных свойств используемой комбинации хо-зяин-вектор . Методы вьщеления желаемого рекомбинантного клона (требование 4) описаны в гл. 6. Отобранные нами примеры иллюстрируют основные принципы, которые применяются в настоящее время при конструировании систем, используемых в сложных экспериментальных ситуациях. [c.227]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология