Векторные системы на основе Ti-плазмид

Векторные системы на основе Ti-плазмид [c.377]

На основе плазмид агробактерий созданы векторные системы для переноса генов в хромосомный геном растения. [c.352]

Ti-плазмида, включившись в хромосомную ДНК обычным способом, перенесет и свою Т-ДНК, которая теперь не несет генов корончатого галла. Следующим логическим шагом в развитии этой системы стало клонирование чужеродного маркерного гена и гена, интересующего исследователя, в Т-ДНК, чтобы их можно было транспортировать в хромосомную ДНК растения-хозяина. Векторная система на основе Ti-плазмид нашла широкое применение во всем мире. Ее используют для создания трансгенных растений в тысячах лабораторий. [c.383]

При конструировании гибридов на основе векторных молекул ДНК фага А или фагов серии М1 Зтр удается осуществлять прямой отбор клонов гибридных фагов. В случае же использования плазмидных векторов прямой отбор клеток, содержащих гибридные плазмиды, часто невозможен. Поэтому возникла необходимость в разработке векторных плазмид с системой прямой селекции гибридных вариантов. Предпринятые исследования привели к созданию широкого спектра таких клонирующих векторов некоторые из них мы рассмотрим. [c.118]

Векторные системы, способные интегрировать крупные вставки (>100 т. п. н.), имеют большую ценность при анализе сложных эукариотических геномов. Без таких векторов не обойтись, например, при картировании генома человека или при идентификации отдельных генов. В отличие от библиотек с небольшими вставками, в геномной библиотеке с крупными вставками скорее всего будет представлен весь генетический материал организма. Кроме того, в этом случае уменьшается число клонов, которые нужно поддерживать, и увеличивается вероятность того, что каждый из генов будет присутствовать в своем клоне. Для клонирования фрагментов ДНК размером от 100 до 300 т. п. н. был сконструирован низкокопийный плазмидный вектор на основе бактериофага Р1 — химерная конструкция, называемая искусственной хромосомой на основе фага Р1. Был создан также очень стабильный вектор, способный интегрировать вставки длиной от 150 до 300 т. п. н., на основе Р-плазмиды (F-фактора, или фактора фертильности) Е. соИ, которая представлена в клетке одной или двумя копиями, с селекционной системой la Z векторов pU . Эта конструк- [c.76]

Селекцию растительных клеток, трансформированных неонкогенными векторами, на фоне нетрансформированных клеток можно осуществить по их способности расти на питательной среде, содержащей антибиотики, в норме токсичные для таких клеток. Из подобных резистентных к антибиотикам тканей можно регенерировать нормальные побеги с помощью стандартных методов культуры тканей. Однако при попытках трансформировать растительные клетки неонкогенными векторными системами на основе Ti- или Ri-плазмид перед исследователем встает следующая проблема. В отличие от индукции корончатого галла или косматого корня неонкогенные трансформированные растительные клетки необходимо снабдить ростовой средой строго определенного состава, содержащей правильное соотношение фитогормонов. Такие среды специально подбирают для конкретных видов (или даже сортов) растений, чтобы поддержать образование каллуса после непродолжительного деления клеток в ответ на поранение. Обычно пораженную ткань культивируют in vitro — с этим подходом связаны различные проблемы, имеющие отношение к селекции трансформированных клеток [c.101]

Параллельно с развитием векторной системы Ba illus на основе стафилококковых и стрептококковых плазмид велась разработка клонирующих векторов и на основе плазмид, выделенных из разных видов бацилл (табл. 10.4). [c.246]

Молекулярные клонирующие векторы играют ключевую роль в постановке генно-инженерных экспериментов на выбранной системе клеток. В системе клеток прокариот и низших эукариот в качестве векторных молекул используют плазмиды или ДНК вирусов. В культивируемых клетках млекопитающих эндогенные плазмиды не найдены, поэтому внимание исследователей сконцентрировалось на ДНК-со-держащих вирусах. К моменту появления генно-инженерной методологии наиболее хорошо изученным в генетическом и биохимическом плане был вирус SV40. Имелись методы наработки и очистки данного вируса, выделения его ДНК и трансфекщ1и ею чувствительных культур клеток. Поэтому именно на основе ДНК вируса SV40 бьши созданы первые клонирующие векторы культивируемых клеток млекопитающих. [c.354]

Растительные клетки не содержат собственных плазмид. В этом случае в качестве основы для конструирования трансформирующих векторных систем в принципе могут использоваться независимо реплицирующиеся геномы различных растительных вирусов. Такие системы были созданы на основе генома вируса мозаики цветной капусты. Однако все наиболее соверщенные системы векторов растений получены на основе плазмид из семейства необычных бактериальных плазмид, носящих название pTi. Эти плазмиды образуют природную систему трансформации, с помощью которой осуществляется перенос сегаентов плазмидной ДНК в геномы разнообразных двудольных растений. [c.273]

Многие клетки растений тотипотентны (т.е. способны размножаться, дифференцироваться и образовывать целые плодоносящие растения). Векторные системы, сконструированные на основе плазмид pTi, в принципе можно использовать для получения генотипически измененных растений из трансформированных клеток, и такие опыгы уже поставлены. Кроме того, выполненные исследования уже позволили получить данные об экспрессии генов и процессах дифференцировки в нескольких видах растений. [c.276]

Разработанный на модельной системе фага 0X174 метод олигонуклеотид-направленного мутагенеза получил дальнейшее развитие на других типах молекул ДНК, прежде всего на ДНК нитевидных фагов и плазмидах. У плазмид приходится получать одноцепочечные кольцевые формы при определенных ферментных обработках двухцепочечной ДНК in vitro, что обычно осуществить не очень просто. Поэтому наиболее широко используют нитевидные фаги, и в первую очередь фаг М13. На кольцевой одноцепочечной ДНК фага М13 удобно достраивать вторую цепь. Кроме того, создана серия векторных молекул на основе ДНК фага М13, и данный фаг с успехом используется при секвенировании клонированных последовательностей ДНК методом Сэнгера. [c.183]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология