Буфер неоднородный прерывистый

Прибор для диск-электрофореза показан на рис. 4.7. Он состоит из двух сосудов с буфером — верхнего и нижнего, соединенных, между собой рядом вертикальных цилиндрических стеклянных, трубок (рабочие трубки), содержащих гель (рабочий гель и гель-прокладку). В нижнем сосуде находится анод, а в верхнем — катод. Образцы наносят на поверхность столбиков геля при заполненном буфером нижнем сосуде, затем буфером заполняют и верхний сосуд, ставят на место крышку и включают ток. Буферные растворы подбирают таким образом, чтобы разделяемые вещества были в них. заряжены отрицательно. По мере их движения через гель вниз, к. аноду, происходит разделение, обусловленное различиями отношений заряда к массе. Диск-электрофорез называют еще прерывистым электрофорезом (в отличие от непрерывного, проточного). Это название отражает особенность метода, заключающуюся в использовании неоднородной ( прерывистой ) среды (гелей) и буферов разного состава и с разными значениями pH. Верхняя треть-столбика геля состоит из крупнопористого геля-прокладки, или концентрирующего геля, а нижняя — из рабочего, или разделяю-щего, геля с более мелкими порами. [c.131]

Ниже будут описаны две буферные системы для обычного электрофореза— прерывистая (неоднородная, или дискретная) и непрерывная (однородная). Последняя весьма проста один и тот же буфер используется в процессе всего электрофореза, так что в электрофоретическом канале не происходит изменения состава буфера. Чтобы уменьшить потери напряжения на участках, соединяющих электроды с истинным электрофоретическим каналом, можно использовать буферные растворы большой концентрации (рис. 5.18, Л). Обычно применяют буферы с суммарной ионной силой порядка 0,05—0,15. Это — компромисс между низкой проводимостью, позволяющей применять высокое напряжение, но способствующий белок-белковым взаимодействиям, и системой с минимумом таких взаимодействий, но более высокой проводимостью, в результате чего возникает проблема нагрева. Нагрев можно уменьшить, снизив силу тока. [c.222]

Электрофоретическое разделение исследуемых веществ можно также осуществлять на пластинах полиакриламидного геля размерами ЮОХЮО мм при толщине слоя геля от 1 до 3,5 мм. Пластины с углублениями для внесения образцов приготавливают на особых подставках. Для проведения электрофореза требуется специальное оборудование. Конструкция прибора позволяет устанавливать пластины в вертикальное положение при этом канавки для образцов должны быть расположены у верхнего края пластины и контактировать с верхним буфером, тогда как противоположный край пластины должен находиться в контакте с нижним буфером. Необходимо обеспечить циркуляцию охлаждающей жидкости по поверхности пластины с обеих ее сторон. Основное достоинство этой системы заключается в том, что она позволяет проводить одновременное разделение нескольких образцов в одинаковых условиях, благодаря чему их легко можно сравнивать между собой. Считается, что пластины легче анализировать с помощью денситометра, однако для этого необходимо иметь специальный прибор. Кроме того, пластинки можно без особого труда разрезать на полоски и проанализировать их на наличие различных компонентов путем окрашивания или определения радиоактивности. Полоски можно также высушивать и хранить. Однако для приготовления пластин требуется больше акриламида, особенно если анализируется немного образцов. Как и в случае электрофореза в трубках, для данного метода разработан целый ряд однородных и неоднородных ( прерывистых ) буферных систем. Здесь применяются те же способы приготовления гелей, методики разделения и анализа, что и при электрофорезе в трубках. [c.265]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология