Аденовирусные векторы

Рис. 21.7. Аденовирусный вектор. В клетку-хозяина, несущую интегрированный в геномную ДНК функциональный ген Е1 аденовируса, вводят встроенную в сегмент аденовирусного генома (0-17 единицы карты) плазмиду с терапевтическим геном (ТГ) и участок геномной ДНК аденовируса (9-100 единицы карты). Длина генома аденовируса равна 100 единицам. В результате рекомбинации (штриховая линия) между перекрывающимися участками плазмиды и ДНК аденовируса образуется молекула ДНК, эквивалентная полноразмерному вирусному геному. Рекомбинантная ДНК, содержащая терапевтический ген, упаковывается и высвобождается из клетки после лизиса. Образующиеся вирусные частицы дефектны по репликации. Плазмидная ДНК, входящая в состав конечной генетической конструкции, не влияет на упаковку рекомбинантной ДНК (не показано).

Векторы на основе вируса простого герпеса Для того чтобы ретро- и аденовирусные векторы инфицировали специфические типы клеток, нужно модифицировать их с помощью генной инженерии, однако в природе существуют вирусы, уже обладающие сродством к определенному [c.496]

Исследования последних 15 лет показали, что главными недостатками аденовирусов при трансдукции генов являются иммунный ответ против белков вируса и токсичность для печени при системном введении А(1 в высокой концентрации. С первым можно бороться, используя выпотрошенные аденовирусные векторы, со вторым — вводя аденовирус непосредственно в орган-мишень. [c.382]

Таким образом, можно надеяться на то, что по мере разработки нацеленных аденовирусных векторов на их основе будут созданы эффективные противораковые генно-терапевтические препараты. [c.384]

Для получения аденовирусного вектора провели котрансфекцию клеточной линии, синтезирующей продукты аденовирусного гена El, двумя участками генома аденовируса (рис. 21.7). Один из них может существовать в виде плазмиды в Е. соИ и содержит вместо El-области терапевтический ген, фланкируемый нуклеотидными последовательностями аденовируса, а второй представляет собой молекулу ДНК аденовируса, которая лишена 5 -концевого участка, включающего Е1-область, и имеет перекрывающийся участок с несущей терапевтический ген плазмидой. Рекомбинация между двумя трансфицирующими фрагментами ДНК в области их перекрывания приводит к восстановлению полноразмерного аденовирусного гена, в котором вместо El-области находится терапевтический ген. Продукты гена El, поставляемые клеткой-хозяином, инициируют образование вирусных частиц, высвобождающихся из клетки в результате лизиса. Клонирующая емкость аденовирусного вектора [c.494]

После того как рекомбинантный аденовирус инфицирует клетку-мищень, его ДНК проникает в ядро, где и происходит экспрессия терапевтического гена. Рекомбинантная ДНК не интегрирует в хромосому и сохраняется непродолжительное время, поэтому при проведении генотерапии с использованием аденовирусных векторов необходимо вводить их с определенной периодичностью. [c.494]

Вирусный способ. Вирусный способ дсстав. и генов эффек-тивег, R силу своей биологичности, поэтому около 80 % испытываемых клинических протоколов основаны на использовании ретровирусных или аденовирусных векторов (см с. 40Я 404). Эти векторы сконструированы на общем подходе вся или большая часть кодирующей последовательности в вирусном геноме заменена экспрессионной кассетой. Манипуляции же с векторами производятся с привлечением специально сконструированных клеток, в хромосомах которых содержится информация, обеспечивающая репликацию векторных геномов и сборку вирионов. [c.422]

Аденовирусные векторы первого поколения (с делецией локуса El, см. с. 404) сохранили поздние гены, кодирующие структурные белки. Это является еще одной причиной их нестабильности. Введенные в организм клетки с вирусными белками воспринимаются как чужеродные и постепенно элиминируются иммунной системой. Эти факты говорят о том, что аденовирусные векгоры больше подходят для терапии рака, где достаточно временной экспрессии терапевтических генов, чем для исправления наследственных дефектов. [c.424]

Другой подход состоит в селективном уничтожении раковых клеток. Для этого в аденовирусный вектор встраивают так называемый суицидный ген. В этих целях активно используют ген тимидинкиназы вируса герпеса. Тимидин-киназа вируса герпеса способна фосфорилиро-вать ганцикловир. При введении этого препарата в зараженных гибридным Ад клетках будет происходить терминация синтеза ДНК, что в итоге приведет к их гибели. Другой суицидный ген кодирует цитозин-дезаминазу, которая модифицирует введенный 5-флуороцитозин, что также является губительным для клетки. Терапия опухолей с помощью суицидных гибридов аденовирусов, совмещенная с радиотерапией, может приводить к значительному уменьшению опухоли. Во всех случаях наилучший результат удается пол5 ить при направленном инфицировании опухоли аденовирусом и использовании для экспрессии целевого гена тканеспецифичных промоторов. [c.382]

Нацеливать аденовирус на определенные клетки, имеющие специфичные поверхностные антигены, наиболее просто удается с помощью конъюгатов (рис. 14.23). Данный подход реализован на различных раковых опухолях, для которых показана селективная трансдукция аденовирусными векторами встроенных в них трансгенов. Несмотря на очевидные достоинства, стратегия использования адаптерно-лиганд-ньк юмплексов имеет серьезный недостаток — многоступенчатость процедуры приготовления in vitro нацеленного гибридного аденовируса. [c.383]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология