Радиоактивное мечение вирионной РНК

Радиоактивное мечение вирионной РНК [c.151]

Радиоактивно меченную РНК из очищенных вирионов или из цитоплазмы зараженных РСВ клеток можно проанализировать электрофорезом в 1,5%-ном геле агарозы, содержащем [c.153]

Лучший радиоактивный предшественник для введения метки в белки вируса гриппа — [ 5]-метионин. Если необходимо получить меченые вирионы, клетки перед заражением следует в течение ночи инкубировать в среде без метионина, чтобы обеспечить максимально эффективное включение метки. После заражения к клеткам добавляют среду, содержащую 200 мкКи/мл [ Sj-метионина, и через 24 ч после заражения собирают меченый вирус. [c.195]

По данным других работ в морфогенезе участвуют репликативные комплексы, которые связаны с гладким, а не с шероховатым ЭР. Наиболее веским аргументом является то, что вирусные частицы, связанные с репликативными комплексами иа клеток, импульсно меченных радиоактивным уридином, обладают в три—восемь раз большей удельной радиоактивностью, чем вирионы из других фракций [38]. Это означает, что данные вирионы образовались недавно, а следовательно, сформированы в репликативном комплексе. При обработке рибонуклеазой этих репликативных комплексов, связанных с мембранами, можна выделить стабильные пустые оболочки [321]. [c.238]

Рис. 2.4. Примеры фракционирования градиентов, содержащих радиоактивно меченный вирус, с помощью устройства, показанного на рис. 2.3. а — меченный f 5S]-метионином вирус, фракционирование градиента с помощью устройства типа (а) (фракции по 2 мл) б — меченный Р вирус, фракционирование градиента с помощью устройства типа (б) (фракции по 2 мл) в — меченный 35S]-метионином вирус, фракционирование с помощью устройства типа (е) фракции по 0,5 мл). По оси абсцисс отложены номера фракций, а по оси ординат —радиоактивность в 50 мкл, выраженная в имп./мин-10 . Направление центрифугирования во всех случаях справа налево данные для верхних фракций градиентов не приведены. А — пик инфекционных вирионов (160S) В — пик пустых капсидов (80S) С — пик неинфекционных РНК-со-держащих частиц (130S)

Обычно исследуют присоединение ненасыщающего количества радиоактивно меченного вируса в присутствии избытка немеченых вирионов. Например, избыток полиовируса типа 1 блокирует присоединение полиовирусов типов 1, 2 и 3, но не вирусов Коксаки А21 и В1—6 и риновирусов человека типов 2 и 14. [c.218]

Во второй системе у реассортантных вирусов, полученных после смешанной инфекции, вызванной родительскими вирусами с хорошо различимыми фенотипами, определяли происхождение каждого сегмента РНК с последующим изучением в соответствующей клеточной системе с целью определения сегмента (или сег-.ментов) РНК вирулентного родительского вируса, обусловливающего вирулентность. Методы, используемые для генотипирования реассортантных вирусов, более детально описаны в главе 4, вклЮ чая сравнение родительских и реассортантных вирусов в отношении нескольких параметров — характера миграции РНК в ПААГ [37] белкового спектра, выявляемого в ПААГ [38] олигонуклеотидного строения отдельных сегментов РНК [64] прямой молекулярной гибридизации кРНК с меченными радиоактивными веществами отдельными сегментами вирионной РНК [45] и конкурентной гибридизации, при которой сегменты РНК исследуемых вирусов использовали для конкуренции при связывании меченой вРНК и кРНК [6]. [c.298]

Выбор методики получения вирусного препарата определяется целью дальнейшего исследования. Для изучения круга хозяев, серологических свойств, а также в качестве инфекционного материала можно использовать и неочищенные препараты вируса [2]. В качестве антигена или иммуногена [3], для клонирования и секвенирования вирусной РНК [4] и получения матричной РНК (мРНК), транслируемой в бесклеточных системах, необходимо иметь высокоочищенный вирус, не содержащий контаминантов клеточного или другого происхождения. Для изучения цикла репродукции вируса в зараженной клетке, характеристики полиовируса методом олигонуклеотидного картирования РНК [6, 7], анализа вирионных белков [8] и в ряде иммунологических исследований [9] применяют вирус, меченный радиоактивным изотопом. [c.44]

Рис. 6.7. Электрофорез вирусных РНК и белков, меченных радиоактивной меткой, как описано в разд. 7. а — вирус метили >[ Р]-ортофосфатом в течение 24 ч и из очищенных вирионов экстрагировали РНК б — ФЭК метили [ 5]-метионином в течение 30 мин на разных сроках после заражения вирусом чумы птиц (штамм 34/Росток). Клетки разрушали кипячением в содержа щем ДД -Na буфере для нанесения проб и анализировали белки электрофо резом в 15%-ном полиакриламидном геле. К — белки из незараженных клеток Цифры под остальными дорожками обозначают время (в часах) после зара жения, когда вносили [ З]-метионин

Справочник химика 21

Химия и химическая технология