Сахарозный градиент для фракционирования

ФРАКЦИОНИРОВАНИЕ РНК ПУТЕМ ЦЕНТРИФУГИРОВАНИЯ В САХАРОЗНОМ ГРАДИЕНТЕ [c.127]

Б. Фракционирование в сахарозном градиенте [c.19]

Одним из самых простых и широко распространенных методов фракционирования нуклеиновых кислот и других макромолекул является центрифугирование в сахарозном градиенте. Раствор с градиентом копцентрации сахарозы служит одновременно песуш,ей и стабилизуруюш ей средой, через которую движутся макромолекулы под действием центробежной силы. 1)лагодаря наличию непрерывного градиента концентрации сахарозы возможность перемешивания компонентов при встряхивании и других механических воздействиях сводится к минимуму. Этому способствует также и довольно высокая вязкость растворов сахарозы. Поэтому прп центрифугировании в сахарозном градиепте можно добиться значительно лучшего разделения смеси, чем при центрифугировании в обычном буфере. [c.127]

Сахарозные градиенты монаю фракционировать вручную или автоматически. Первый способ намного дешевле, однако все же автоматическое фракционирование в сочетании с ненрерывной записью поглощения в УФ-свете имеет ряд преимуществ. Прежде всего, при автоматическом фракционировании исключается довольно нудная операция по сбору отдельных фракций и, кроме того, улучшается разделение компонентов (в особых случаях) и сокращается время фракционирования. Тем не менее во многих случаях фракционирование вручную также дает виолие удовлетворительные результаты. [c.134]

Фракционирование вручную. Если сахарозный градиент фракционируют вручную, то центрифужную пробирку закрепляют в специальном устройстве. Мы используем для этой цели резиновую пробку, закрепленную зажимом на штативе. Центрифуншую пробирку осторожно надевают на резиновую пробку так, чтобы эта пробирка оказалась подвешениой. Отверстие в пробке соединяют резиновой трубкой с кусочком стеклянной трубочки, которую можно брать в рот и через нее поддувать воздух, оказывая тем самым давление на раствор градиента в пробирке. [c.134]

Автоматическое фракционирование. Существуют два метода автоматического фракционирования сахарозных градиентов. Согласно первому методу, сбор фракций со дна пробирки осуществляют так, как это было описано для фракционирования вручную. При фракционировании другим методом фракции отбирают сверху пробирки. Для этого на дно пробирки накачивают раствор сахарозы с большей плотностью, так что при этом весь градиепт вытесняется наверх и попадает в прибор, регистрирующий поглощение протекающего раствора в УФ-свете. [c.135]

На фиг. 2 приведен пример успешного разделения в сахарозном градиенте рибосомных РНК, выделенных из клеток млекопитаюнцих. Фракционирование градиента осугцествляли вручную. Если число фракций не слишком мало, то на графике их следует обозначать точками (а не столбиками), которые соеди-гяют между собой линиями, как это показано на фиг. 2. Для того чтобы две РНК хорошо отделить друг Ьт друга, необходимо разделить весь градиент по крайней мере на 25 фракций. На графике необходимо отметить ноложение дна и верха пробирки. Но-видимому, этим не следует пренебрегать, по- [c.136]

Естественно, что после открытия нуклеосом мы вновь вернулись к вопросу о месте гистона Н1 в структуре хроматина. В. В. Бакаев и А. Я. Варшавский проверили, су-ш,ествуют ли нуклеосомы в препаратах хроматина, лишенных гистона Н1, т. е. в ДНПо,б, и обнаружили их там. Далее они разработали новый подход к фракционированию нуклеосом — электрофорез в полиакриламидном или агарозном геие в неденатурирующих условиях при низкой ионной силе. При агарозном электрофорезе хорошо разделяются MOHO-, ди- и тринуклеосомы, гораздо лучше, чем при ультрацентрифугировании в сахарозном градиенте. Более того, каждый из компонентов, в свою очередь, дает по нескольку полос (рис. 13). [c.88]

К сожалению, до настоящего времени отсутствуют хорошие методы разделения транскрипционно активного и неактивного хроматина и поэтому трудно приписать измененные формы гистонов тому или иному состоянию хроматина. Наиболее интересные данные в этом направлении были получены тем же В. Олфри (США). При гидролизе активного хроматина он выделил необычные частицы, которые седиментировали в сахарозном градиенте медленнее, чем обычные нуклеосомы, и, по мнению автора, соответствовали развернутым нуклеосомам. В этих частицах, названных А-частицами, присутствовали все сердцевинные гистоны. В отличие от нормальных нуклеосом 8Н-группы гистона НЗ в А-частицах были доступны для ряда химических реагентов, и благодаря этому А-частицы можно отделить от нуклеосом с помощью фракционирования на колонках с хлормеркурибензоатом (реагент, связывающий 8Н-группы). В А-частицах повышено содержание ацетили-рованных форм гистонов. Автор предполагает, что аце-тилирование гистонов при активации хроматина ведет к развороту нуклеосомных частиц, а это, в свою очередь, повышает доступность 8Н-групп гистона НЗ. [c.155]

В последние годы один за другим были разработаны и успешно используются совершенно новые типы градиентов плотности взамен традиционных сахарозного и простых цезиевых. Это открыло такие возможности фракционирования, о которых еще три-четыре года назад не приходилось и мечтать (например, разделение совершенных и несовершенных гибридных молекул нуклеиновых кислот или нативных нуклеопротеидов по их плотности). Вместе с тем в силу такого расширения возможностей обоснованный выбор режима ультрацентрифугирования становится все более трудным делом по мнению некоторых авторитетов [Н1скшоо(1, 1978], его следует отнести к сфере искусства и интуиции. [c.174]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология