Реплика на диазобумаге

Для приготовления иммуносорбента необходимо иметь очищенный антиген. Если речь идет о препаративном получении специфических антител, то без этого, очевидно, не обойтись. Однако при очистке относительно небольшого количества антител можно ограничиться разделением исходного клеточного экстракта, например методом электрофореза, и отделять специфические антитела из антисыворотки по их связыванию с зоной (полосой или пятном) антигена в геле. Удобнее для этой цели использовать не сам гель, а его реплику на диазобумаге [Остерман, 1981], где антигены фиксируются ковалентно. [c.112]

Существенный недостаток нитроцеллюлозных фильтров при получении иммунных реплик — избирательный характер сорбции белков на этих фильтрах. Основные белки, как правило, сорбируются ими хорошо, а кислые иногда практически не сорбируются. Ввиду этого важного обстоятельства предпочтение следует отдать использованию диазобумаги. Кстати, отмеченная в последней работе возможность снятия нескольких реплик с одного геля, по-видимому, сохраняется и для этого варианта. [c.133]

Собственно иммунотестирование начинается тогда, когда полученную таким образом реплику белков геля на диазобумаге помещают в раствор специфической антисыворотки (например, в раствор с pH 7,4, содержащий 0,2 мг/мл IgG, 0,05 М Трис-НС1, 0,15 М Na l, 5 мМ ЭДТА, 0,25% желатины и 0,05% NP-40) и осторожно покачивают в течение 12 ч при 37°. За это время завершается реакция связывания антител с фиксированными на бумаге антигенами (очевидно, что по крайней мере часть молекул антигенов не утратила своей иммунореактивности в результате фиксации на диазобумаге). Несвязавшийся IgG отмывают еще 12 ч при 37° тем же буфером. Здесь нет необходимости в эквивалентном соотношении концентраций, так как белки уже фиксированы на бумаге, так что антитела могут находиться в избытке. [c.130]

Рис. 31. Четырехслойная сийтема обнаружения полос антигена с помощью реплики на диазобумаге

Справочник химика 21

Химия и химическая технология