Реакция связывания антиген-антитело

Реакцию взаимодействия антиген — антитело можно рассматривать как частный случай связывания лигандов с макромолеку-лярными рецепторами. В основе- первичного взаимодействия лежат общие принципы любой бимолекулярной реакции. Однако, так как в данном случае продуктом бимолекулярной реакции является комплекс антиген— антитело, иммунная реакция является обратимой и описывается теми же кинетическими и термодинамическими параметрами, что и любой процесс комплексообразования. В данной главе будут рассмотрены теоретические вопросы связывания антигенов с антителами и некоторые экспериментальные подходы, позволяющие следить за ходом взаимодействия и рассчитывать его количественные характеристики. [c.33]

Процесс соответствующих взаимодействий, имитирующих те, которые доминируют в биохимических процессах и относящихся к нековалентным, получил название "молекулярное узнавание". Молекулярное узнавание можно определить как процесс, включающий в себя как связывание, так и выбор молекулы - "гостя" данной молекулой -"хозяином". Просто связывание молекул не является молекулярным узнаванием. Согласно Лену [4], "узнавание - это связывание с целью". Данное поведение характерно для многих биохимических процессов, таких как ферментативные реакции, связывание "рецептор-субстрат", сборка белковых молекул, иммунное взаимодействие антиген-антитело, транспорт через мембрану и т.д. Одним из критериев молекулярного узнавания является то, что константа ассоциации между "хозяином" и "гостем" является значительно более высокой по сравнению с константами образования комплексов между другими молекулами, присутствующими в системе. В связи с этим особое значение приобретает исследование энергетики межмолекулярных взаимодействий биомолекул. Энергетические параметры позволяют судить о силе взаимодействия, наличии или отсутствии ассоциации между молекулами, а также выявить и описать влияние растворителя на процесс молекулярного узнавания. [c.185]

Одно из уже упомянутых свойств, присущих большинству антител нескольких классов иммуноглобулинов (см. рис. 4.М),— связывание и активация компонентов сыворотки, называемых факторами комплемента. Когда антиген представляет собой красный кровяной щарик (эритроцит), связывание комплемента, которое следует за реакцией антиген — антитело, завершается гемолизом эритроцита. Это свойство использовано для разработки методов, называемых реакцией связывания комплемента [68, 88]. [c.103]

На первом этапе реакции преципитации происходит связывание молекул антигена с антителами, но видимых преципитатов не образуется. На втором этапе реакции происходит агрегация возникших ранее комплексов антиген — антитело с образованием больших нерастворимых частиц, видимых невооруженным глазом. Первый этап реакции протекает быстрее, более обратим и специфичен, чем второй. [c.16]

Высокая специфичность антител по отношению к антигену делает их гибким и действенным инструментом, который можно использовать для выявления, количественного определения и локализации множества разнообразных веществ, представляющих интерес для биолога. Но как можно обнаружить или измерить взаимодействие антитела с антигеном Начальная реакция связывания антигена с антителом-так называемая первичная реакция-может быть измерена многими различными способами. При радиоиммунном анализе, позволяющем определять даже ничтожные количества материала, известное количество радиоактивного антигена вместе со стандартным количеством антител добавляют к образцу, содержащему неизвестное количество того же антигена в нерадиоактивной форме. Немеченый антиген конкурирует с меченым за связывающие участки антител, и чем больше данного антигена в образце, тем меньше радиоактивного антигена будет связано с антителом. Свободный радиоактивный антиген можно отделить от связанного, а затем измерить количество того и другого с помощью ряда методов, использующих различия в свойствах свободных и связанных молекул один нз общих подходов состоит в осаждении (преципитации) комплексов антиген-антитело антителами к иммуноглобулинам (рнс. 17-28). [c.27]

Рис. 6-15. Иммунный ответ и действие антител. Когда чужеродная для данного организма макромолекула (например, молекула белка из какого-то другого вида) попадает в кровь или ткань, она вызывает защитную реакцию, которая называется иммунным ответом. Чужеродная макромолекула, называемая антигеном, связывается с поверхностью лейкоцита особого типа - В-лимфоцитом. Эта клетка под воздействием антигена постепенно изменяется и превращается в плазматическую клетку, вырабатывающую большое количество антител против данного антигена. Образованию специфических антител способствуют также другие клетки, называемые Т-лимфоцитами. Антитела, или иммуноглобулины, представляют собой сложные высокомолекулярные белки, молекулы которых состоят из четырех полипептидных цепей и содержат несколько углеводных групп. Они могут специфически связываться с антигеном, вызвавшим образование антител, но не связываются ни с какими другими белками. Иммуноглобулины имеют У-образную ф( му и содержат два участка для связывания антигена. Антитела вызывают преципитацию (выпадение в осадок) антигена благодаря образованию нерастворимого агрегата со структурой наподобие решетки. Каждый антиген стимулирует образование антител лишь одного определенного тша. Эти антитела распознают и связывают только данный антиген или близкородственные молекулы.

Однако для того, чтобы не только обезвредить, но и действительно ликвидировать подобные клетки, одних антител, по-видимому, недостаточно. В дело вступает еще один фактор, так называемый комплемент. Теперь мы можем дополнить наш список взаимодействий между антителами и антигенами еще одной реакцией (табл. 6)— реакцией связывания комплемента. [c.365]

Простейшие молекулы антител имеют форму буквы V с двумя идентичными антиген-связывающими участками - по одному на конце каждой из двух ветвей (рис. 18-12). Поскольку таких участков два, эти антитела называют бивалентными. Такие антитела могут сшивать молекулы антигена в обширную сеть, если каждая молекула антигена имеет три или большее число антигенных детерминант (рис. 18-13). Достигнув определенных размеров, такая сеть выпадает из раствора. Тенденция больших иммунных комплексов к осаждению (преципитации) удобна для выявления антител и антигенов. Эффективность реакций связывания и сшивания антигена значительно возрастает благодаря гибкому шар- [c.229]

Принцип использования флуоресцирующих антител был приспособлен и для электронной микроскопии антитела или гаптены соединяются с электроноплотными веществами (например, с железосодержащим белком ферритином) или такими, которые могут быть сделаны электроноплотными уже после реакции антиген — антитело (например, с антителом связывается пероксидаза из хрена, которой после связывания дают возможность реагировать с диаминобензидином). На практике используется множество комбинаций, включающих антисыворотки с различными специфичностями, фрагменты антител, гаптены, а также такие маркеры для визуализации, как небольшие вирусы и т. п. Эти методы, применимые к целым бактериям, позволяют локализовать поверхностные антигены точнее, чем это делают с помощью оптического микроскопа. Преимущества электронной микроскопии становятся еще более очевидными, когда меченые антитела применяют еще до фиксации, заливки и приготовления срезов, так что метка видна в тонких срезах. В некоторых случаях аналогичным образом метят не антитела, а другие вещества с известной специфичностью чаще всего применяются лектины растений, такие, как конканавалин А, которые специфично связываются с сахарными остатками [88]. [c.125]

Меньший вклад в связывание антигена с активным центром антитела вносят водородные и ионные взаимодействия. Водородные связи образуются при взаимодействии атома водорода, ковалентно связанного с каким-либо отрицательно заряженным атомом, с неподеленной парой электронов другого отрицательно заряженного атома. В реакции антиген — антитело в качестве таких групп обычно выступают аминогруппы и гидроксильные группы/ Электростатические силы возникают при взаимодействии сильно заряженных ионизированных групп, таких, как ионизированная аминогруппа (—NH3+) и ионизированная карбоксильная группа (С00-). [c.34]

Установлено, что ковалентное связывание АТР с инсулином не изменяет его антигенных свойств, что, по-видимому, объясняется как небольшими размерами самого маркера, так и его удаленностью от молекулы антигена. Это обстоятельство обеспечило возможность использования ЛИКА для решения ряда проблем сравнительного изучения физико-химических свойств растворимых и иммобилизованных антител, исследования физико-химических характеристик антител на разных стадиях иммунного ответа, изучения структуры иммунных комплексов при разных соотношениях концентраций компонентов реакции антиген — антитело. Большой интерес к использованию этого подхода объясняется возможностью проведения реакций в растворе без введения твердой фазы, высокой чувствительностью метода, позволяюш,его работать в области физиологических концентраций инсулина. [c.127]

Рнс. 33. Теоретические калибровочные графики прн разных значениях константы связывания реакции антиген — антитело [c.232]

В основе схемы лежат две последовательные реакции антиген-антитело. При этом теоретически предел обнаружения антигена в сэндвич -методе в меньшей степени зависит от константы связывания антител, чем в ранее рассмотренных схемах. Это объясняется тем, что сдвиг равновесия в сторону образования специфического комплекса даже при крайне низких концентрациях антигена может достигаться за счет избытка антител на каждой стадии анализа. Поэтому формально предел обнаружения антигена данным методом лимитируется только пределом детекции метки. Но реально значительное увеличение концентрации антител приводит к возрастанию вклада неспецифических взаимодействий, которые и ограничивают нижнюю границу определения содержания антигена. [c.246]

Второй тип методов известен как сандвич -анализ. Методы этого типа применяются сравнительно недавно для определения веществ с молекулярной массой более 1000, имеющих как минимум две антигенные детерминанты (эпитопы). В этих методах избыток связывающих антител прямо или опосредованно связывают с твердой фазой. Вторые меченые антитела против другого эпитопа добавляют или одновременно при связывании с антителами первого типа (одностадийный метод), или после завершения стадий связывания и отмывки (двухстадийный метод). После завершения иммунологической реакции количество связавшегося с твердой фазой вещества непосредственно зависит от количества определяемого вещества в пробе. Уровень фона (неспецифического сигнала) наиболее сильно влияет при низких концентрациях определяемого вещества. В данном случае хорошо подобранная аналитическая система позволяет определять соединения в диапазоне концентраций, составляющем четыре-пять порядков с коэффициентом вариации менее 5%. Чувствительность методики зависит от ошибок при отборе проб, уровня фона и констант связывания антигена с антителами. [c.9]

Помимо реакции преципитации может быть использована любая другая реакция антиген-антитело пассивная гемагглютинация, связывание комплемента и др. (см. гл. 12). [c.23]

Для определения концентрации гормона смешивают меченный, например ИОДОМ-125, гормон с антителами к данному гормону. Образуется комплекс — гормон—антитело. При добавлении исследуемого экстракта немеченный гормон, находящийся в исследуемом растворе, конкурирует с меченым в реакции связывания с антителом, вытесняя последний из комплекса. Далее освобождеиный гормон отделяют от связанного электрофорезом, хроматографией или осаждением и количественно определяют его, измеряя радиоактивность. Из полученных данных можно рассчитать количество исследуемого немеченого гормона, так как радиоактивность свободного гормона зависит от того, насколько много меченого гормона было вытеснено из комплекса антиген — антитело. Более подробно с этим вопросом можно ознакомиться по литературе [582, 591]. [c.240]

Синтез антител начинается в ответ на попадание во внутреннюю среду организма чужеродных макромолекул, например белков бактериальной клетки. Антитела способны связывать антиген, вызвавший их образование, и тем самым защищать организм от возможного вредного действия чужеродных макромолекул, бактерий или других частиц. Реакция связывания антигена антителом отличается высокой специфичностью. Так, антитела, индуцированные белками возбудителя дифтерии (С. сИрЫепае), связывают эти белки, но не реагируют с белками дизентерийной палочки или других бактерий. Еще более наглядно специфичность антител обнаруживается в опытах с синтетическими антигенами. Низкомолекулярные вещества сами по себе не индуцируют синтез антител, но после их присоединения к молекуле белка стимулируется образование антител как к белку, так и к присоединенному низкомолекулярному веществу — гаптекгу. Даже если в роли гаптена выступают очень сходные вещества, например изомеры аминобензойной кислоты (рис. 20.2), к каждому из них синтезируются специфические антитела, не реагирующие с двумя другими гаптенами. [c.476]

Видно, что при фиксированной концентрации антитела равновесное отношение концентраций связанного и свободного антигена зависит от его общей концентрации. Этот вывод лежит в основе всех иммунохимических методов. По существу антитела выступают в роли реагентов биологического происхождения, которые с высокой специфичностью способны узнавать чужеродные вещества. Обычно они представляют собой иммуноглобулины - белки сыворотки крови, которые образуются в ответ на введение иммуногена. Однако многие ни комолекулярные соеданения, в том числе и пестициды, сами по себе не стимулируют обргиование антител, т е. не являются иммуногенами. Индуцировать их образование можно лишь после связывания этих веществ с белком-носителем, в качестве которого, как правило, применяют бычий альбумин. Следует заметить, что в реакции с белком-носителем не должны затрагиваться те группировки молекул антигена, которые участвуют в образовании комплексов антиген-антитело и которые, следовательно, необ.ходимы для индуцирования образования в организме животного специфических антител. [c.298]

Декстраны обладают антигенными свойствами их иммунохимические реа <ции подробно изучены . Количественное исследование ингибирования реакции антидекстрановой сыворотки с декстранами под действием олигосахаридов позволило установить предельные размеры детерминантной группы углеводного антигена. Оказалось, что максимальные размеры такой группы соответствуют гексасахариду, причем уже в случае трисахарида изменение свободной энергии при связывании с антителом составляет 90% от максимального. [c.548]

Связывание каждого антитела с его мишенью (антигеном) является высокоспецифичным. Один из способов, который был применен для изучения работы антител, заключается в том, чтобы вызвать иммунный ответ на структуру, специально синтезированную для имитации переходного состояния (transition state analog) некоторой модельной реакции между антителом и антигеном. При этом исследователи полагали, что если антитело производится организмом для предпочтительного связывания со стабильной молекулой, имеющей структуру, подобную переходному состоянию соответствующей реакции, то другие молекулы, способные реагировать через такое переходное состояние, должны реагировать быстрее в результате связывания с произведенным таким способом антителом. Облегчая связывание реагирующих субстратов и формирование соответствующего переходного состояния, антитело действует, таким образом, подобно ферменту. Поразительно, но изложенная схема генерации антител показала свою эффективность на многих примерах. [c.634]

Однако многие методы анализа основаны на торичнмх реакциях, т. е. ка-, ких-то последствиях первичного взаимодействия антитела с антигеном К этим вторичным реакциям относятся преципитация, агглютинация клеток и связывание комплемента. Последнюю реакцию можно использовать пото му, что компоненты системы комплемента связываются только с антителоц находящимся в комплексе с антигеном при этом исчезновение компоненто комплемента может служить мерой количества образующегося комплекса антиген-антитело. Однако чаще всего применяют реакцию преципитации антигена с антителом в жидкостях или гелях. Например, в методе Ухтермни антиген и антитело помещают в отдельные лункн, вырезанные в агаровом геле, Реагенты диффундируют из лунок до тех пор, пока не встречаются друг с другом в оптимальных соотношениях для образования преципитата, который становится видимым как непрозрачная полоса, рассеивающая свет (рис. 17-29). [c.28]

При переливании крови (гемотрансфузии) очень важно, чтобы кровь, получаемая пациентом (он в данном случае называется реципиентом), бьша совместима с его собственной. В случае несовместимости наблюдается особого рода иммунная реакция. Происходит это потому, что мембраны эритроцитов несут на поверхности гликопротеины, называемые агглютиногенами, которые действуют как антигены и реагируют с антителами (агглютининами), содержащимися в крови реципиента. В результате этого взаимодействия донорские эритроциты агглютинируют, т. е. слипаются друг с другом после связывания с антителами реципиента. Известно несколько таких эритроцитарных антигенов, которым соответствуют разные системы групп крови. Наиболее известная из них — система ABO. Ее агглютиногены обозначаются буквами А и В. Комплементарные им антитела — а и Ь — постоянно циркулируют в плазме крови, т. е. не образуются в ответ на появление агглютиногена, как в случае описанньгх выше иммунных реакций. Если эритроциты данного человека несут [c.183]

Реакцию связывания комплемента сыворотки с сульфатом никеля в качестве антигена предложили в 1954 г. Wendberger и Frohli h для диагностики экземы, вызванной контактом с никелем. Прп этом авторы исходили из предположения, что в эпидермисе таких больных происходит реакция антиген — антитело. У 97 работников гальванических цехов, систематически контактировавших с солями никеля, они поставили реакцию связывания комплемента с восемью различными разведениями сульфата никеля (от 1 4096 до 1 524 288) методика постановки реакции ничем не отличалась от классической реакции Вассермана, комплементом служила сыворотка морских свинок. У 8 человек из 97 эта реакция дала резко положительный результат, причем у шести из них оказалась положительной и компрессная проба с сульфатом никеля. Средняя интенсивность реакции была получена у И человек, слабо положительной она была у четырех. Авторы полагают, что общий процент полученных ими по- [c.58]

Сродство антитела отражает силу взаимодействия антигенной детерминанты с отдельным антиген-связывающим участком, каким бы ни было число таких участков. В отличие от этого общая авидность антитела по отношению к мультивалентному антигену (такому, как полимер с повторяющимися субъединицами) характеризует суммарную силу" взаимодействия всех связывающих участков антитела, вместе взятых. Когда мультивалентный антиген взаимодействует более чем с одним антиген-связываюшим участком антитела, сила связывания резко возрастает для того чтобы антиген и антитело могли диссоциировать, все их связи друг с другом должны быть разорваны одновременно. Поэтому типичная молекула IgG при вовлечении в реакцию обоих антиген-связывающих участков будет связываться с мультивалентным антигеном по меньшей мере в 1000 раз сильнее, чем в случае, когда вовлечен лишь один участок. [c.237]

Равновесный диализнаиболее распространенный метод изучения реакции антиген — антитело. Метод основан на различной способности антител и гаптена проходить через полупроницаемые мембраны. Раствор каждого реагента известной концентрации в одном и том же растворителе с одинаковой ионной силой и значением pH помещают по разные стороны мембраны. Молекулы гаптена диффундируют в раствор антител и связываются с ними. При достижении равновесия концентрация свободного гаптена выравнивается по обе стороны мембраны. Измерив равновесную концентрацию гаптена, можно рассчитать количество гаптена, связанного с антителами, и определить по уравнению (3.3) константу связывания. [c.42]

Методически такой анализ наиболее удобно проводить в проточных реакторах, время контакта компонентов в которых регулируется скоростью потока. Одним из вариантов такого анализа является следующий. Через колонку с иммуносорбентом в течение 1 мин прокачивают смесь меченного ферментом и анализируемого антигенов, которые конкурируют за центры связывания иммобилизованных антител. Затем колонку промывают, пропускают субстрат и изме-ряют на выходе оптическую плотность продукта ферментативной реакции, которая пропорциональна крнцентрации определяемого антигена [c.109]

Применение в ИФА антигенов и антител, иммобилизованных на нерастворимых носителях, дает возможность эффективно разделять компоненты аналитической системы перед стадией определения концентрации ферментной метки. Такой подход универсален и может применяться для широкого круга соединений — от гаптенов до микробных клеток. Однако нерастворимые иммуносорбенты имеют и некоторые отрицательные стороны, а именно 1) возможность неспецифического связывания компонентов с носителем 2) значительное время анализа (до нескольких часов) из-за длительности реакции антиген — антитело, определяемое низкой концентрацией иммобилизованного агента- (например, при использовании непористых сорбентов — полистирольных плат или пробирок) или диффузионными затруднениями при использовании пористых сорбентов (сефароза, пористое стекло, силохром и т. д.) 3) методические сложности, связаниью с трудностями точного дозирования и промывок иммуносорбентов па основе пористых носителей 4) существенное влияние неоднородности сорбциоииых свойств полимерных носителей (микроплаты и пробирки из полистирола, поливинилхлорида, полиметилметакрилата и т. д.) на точность и воспроизводимость результатов анализа. [c.111]

Отсюда определенный интерес представляет использование в анализе иммуносорбентов, полученных путем аффинного связывания специфических антител с иммобилизованным на носителе антигеном. Связь антиген — антитело обратима, поэтому для предотвращения смывания антител с сорбента разработаны пути последующего ковалентного закрепления молекул, образовавших специфический комплекс на носителе. Для стабилизации комплекса эффективно применяются обычные сшивающие агенты глутаровый альдегид, диазиды, изоцианаты. Процедура иммобилизации включает инкубацию связанного с носителем антигена с антисывороткой, отмывку носителя, проведение реакции с сшивающим антигеном и заключительную отмывку для удаления избытка (рис. 24). Процесс может проводиться как в реакторах перемешивания, так и в колоночном режиме. Данный подход детально изучен на примере иммобилизации антител против сывороточного альбумина человека на сефарозном сорбенте. В результате такого связывания по крайней мере половина активных центров иммобилизованных антител способна принимать- участие в последующих реакциях с антигеном, что является недостатком метода. Однако [c.210]

Длительность реакции с мечеными антителами. После удаления несвязавшегося антигена и добавления меченых антител равновесие, установившееся на первой стадии, смещается и происходит диссоциация комплекса антитело — антиген. Наибольшая степень диссоциации, очевидно, будет иметь место при значениях [Аг]о, приводящих к образованию специфического комплекса в концентрации, приближающейся к начальной концентрации антител, т. е. влияние диссоциации будет сильнее сказываться в правой части калибровочного графика. Кроме того, степень диссоциации зависит от соотношения концентрации и константы связывания антител. Например, при значении /С 1/[Ат]о и при [Аг]о [Ат о после диссоциации в связанном с антителами состоянии остается примерно половина первоначально образовавшегося комплекса антигена ([Аг]о/2). При /С 1ДАт]о влияние процесса диссоциации будет пренебрежимо мало. Но при работе в диапазоне 1ДАт]о>/С время инкубации может значительно влиять на концентрацию молекул меченых антител, связавшихся в комплекс АтАгЛт, т. е. в конечном итоге на регистрируемый в ИФА сигнал. Иллюстрирую- [c.248]

Больше всего анализов выполняется для обнаружения поверхностных антигенов гепатита В и антител к ВИЧ. Различные типы иммуноанализа, используемые в микробиологических и иммунологических лабораториях, представлены в табл. 1.4. Наибольшая доля анализов приходится на такие хорошо известные методы, как латексная агглютинация и реакция связывания комплемента. Маловероятно, что в ближайшее время их позиции будут сильно потеснены другими недавнр разработанными методами. [c.15]

Альтернативный путь для разработки гомогенных методов иммуноанализа был предложен нами и другими исследовательскими группами. Этот подход, который мы первоначально назвали иммуноанализом на непрерывной поверхности [7], основан на контроле протекания реакции антиген-антитело после и (или) во время связывания с непрерывной поверхностью, которая является частью системы обнаружения сигнала. Принцип действия этих иммуносенсоров включает иммобилизацию одного из иммунореагентов на поверхности сенсора, которая изготовлена таким образом, что она приобрела чувствительность к некоторым компонентам или продуктам реакции. Для обнаружения иммунологических реакций на непрерывной поверхности использовались как электрохимические, так и оптические методы. Электрохимические методы описаны в гл. 15. В нашем обзоре внимание сконцентрировано на оптических системах, и в частности на использовании явления < полного внутреннего отражения в гомогенных методах иммуноанализа. [c.238]

Линия опухолевых клеток легкого человека 2563 (полученная из опухоли МАС-21) была использована Акесоном [37] непосредственно в качестве антигена для кроликов. При анализе полученной антисыворотки с помощью реакции связывания комплемента, иммунофлуоресцентного теста и метода насыщающего связывания в ней обнаружили антитела, специфические для антигенов нормальной ткаии почек. Эти антитела могли быть избирательно адсорбированы препаратами легочной ткани следовательно, существует антиген, общий для этих двух нормальных органов. [c.152]

Реакция связывания компламента (РСК). Эта реакция относится к чувствительным непрямым методам регистрации реакции между антигеном и антителом. Она прп. 1енима лишь в случае антител, относящихся к классам IgG и IgM, которые активируют комплемент по классическому пути. [c.259]

Количественный вариант реакции связывания комплемента в одной из принятых модификаций (И. Тарханова, А. Коников, 1957) основан на связывании комплемента в зоне эквивалентности системы антиген-антитело. К равным количествам антител добавляют антиген в возрастающей концентрации и ко.мплемент. Пробы оставляют на 1 ч при 37°С или на 18 ч при О С. Затем в каждой пробе определяют количество свободного комплемента по способности последнего лизировать эритроциты барана, сенсибилизированные IgG-антителами кролика против эритроцитов барана. Количество связанного комплемента выражают в СН50, т. е. количестве комплемента, необходимом для 50%-ного гемолиза сенсибилизированных антителами эритроцитов. Если выразить графически зависимость между количеством антигена в пробе и количеством связанного комплемента, полученная экспериментальная кривая окажется подобной кривой, описывающей зависимость между количеством белка преципитата и количеством добавленного антигена (см. рис. 55 и 59). В одной и той же системе антиген-антитело соотношение реагентов, соответствующее образованию максимального количества преципитата, с одной стороны, и максимальному количеству связанного комплемента, с другой, обычно совпадают. Однако в отличие от реакции преципитации РСК чувствительнее по меньшей мере в 50—100 раз, т. е. во столько раз можно развести анти- [c.259]

Рис. 5.5. Титрование антител к антигену MR ОХ-45 в непрямой реакции связывания. Супернатант тканевой культуры, содержащий антитела, разводили буфером DAB с добавлением 0,02% NaNj и 0,5% БСА. Аликвоты объемом 30 мкл вносили в лунки панели для микротитрования, содержащие такой же объем взвесн клеток-мишеней (2-10 тимоцитов крысы-Ь5-10 эритроцитов барана). Инкубация с 1-Р(аЬ )2-фрагментами антител кролика к мышиным Ig и процедура отмывания описаны в разд. 5.1.2

Готовят ряд трехкратных разведений фракций гомогена-та, содержащих антиген в том же буфере. Если в образцах присутствуют детергенты, в буфер добавляют 2% БСА, а при их отсутствии — 0,5% БСА (при всех реакциях связывания, включая взаимодействие антител с клетками-мишенями, БСА нейтрализует действие на детергент). [c.183]

Существуют два метода иммунохимического окрашивания. В первом используют антитела, меченные радиоактивным иодом, а затем проводят авторадиографию. Второй метод основан на принципе ELISA и предусматривает использование антител к иммуноглобулинам, конъюгированных с ферментом, и реакцию локального окрашивания, когда субстрат. превращается в нерастворимый окрашенный продукт в участках расположения комплексов антиген — антитело [10]. При использовании любого метода возникают проблемы неспецифического связывания, которые в обоих случаях решаются одинаково. Благодаря простоте и возможности длительного хранения реагентов иммуноферментный метод применяют чаще, за исключением тех случаев, когда требуется высокая чувствительность. Ниже приведено описание иммуноферментного метода, а в технических замечаниях описана процедура авторадиографии. Методы приготовления антител к иммуноглобулинам описаны [c.232]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология