Клеточные экстракты

Рис. 13-24. Фракционирование клеточного экстракта методом дифференциального центрифугирования. Клеточная мембрана разрушается силами трения в гомогенизаторе с вращаю-ищмся поршнем. После удаления остатков соединительной ткани и обрывков кровеносных сосудов при помоцщ сита нз нержавеющей стали клеточный экстракт центрифугируют несколько раз, постепенно увеличивая скорость вращения ротора.

У эукариот транскрипция изучена хуже, чем у бактерий. Это связано, в частности, с тем, что очищенные РНК-полимеразы эукариот не способны осуществить полный цикл транскрипции. Для этого всегда нужны дополнительные белковые факторы, лишь часть нз которых получена в очищенном виде. Пока эукариотический цикл транскрипции удается осуществить лишь в частично очищенных клеточных экстрактах, содержащих недостаточно охарактеризованные компоненты. Тем не менее можно считать, что в основных чертах цикл транскрипции эукариот и бактерий сходен. [c.137]

Для выделения этого белка из клеточного экстракта последний вносят в колонку, заполненную полимерными гранулами с присоединенным к ним лигандом, после чего колонку промывают несколько раз буферным раствором. При этом на колонке удерживаются лишь те белки, которые имеют высокое сродство к закрепленному на полимере лиганду остальные же белки просто вымываются буфером. Поскольку сродство и специфичность белка к лиганду очень высоки, таким путем зачастую можно в один прием выделить и очистить чрезвычайно малые количества белка из клеточного экстракта, содержащего сотни других белков. [c.163]

Элонгация цепей РНК с помощью РНК-полимеразы специфически ингибируется антибиотиком актиномицином D как у прокариот, так и у эукариот (рис. 28-18). Плоская часть молекулы этого антибиотика интеркалирует в двойную спираль ДНК между соседними парами G- , деформируя матрицу ДНК. Эта локальная деформация мешает движению полимеразы вдоль матрицы. Таким образом, актиномицин D вызывает как бы заедание молнии . Поскольку актиномицин D ингибирует процесс элонгации РНК как в интактных клетках, так и в клеточных экстрактах, его использование оказалось очень удобным диагностическим средством для идентификации клеточных процессов, которые зависят от синтеза РНК. Другим интеркалирующим ингибитором является акридин, молекулы которого также имеют плоскую структуру. [c.913]

Предварительная инкубация неочищенного клеточного экстракта с небольшим ко.личеством ДНК-азы полностью снимает его активность, но при добавлении ДНК активность экстракта восстанавливается [10]. Несколькими путями удалось показать, что состав образуемой РНК определяется природой ДНК, внесенной в качестве затравки. [c.231]

Пытаясь найти по возможности более простые системы для изучения синтеза ДНК, многие исследователи обратились к мелким ДНК-содержащим вирусам типа ФХ174 и М13. Они не обошли при этом вниманием бактериофаги, снабженные отростками фаги Я, Т7 и Т4, а также плазмиду колицина Е-1. Преимущество этих систем состоит в том, что для них легче смоделировать репликацию ДНК в клеточных экстрактах, а кроме того, ДНК вирусов и плазмид хорошо изучены с генетической точки зрения. Во многих случаях репликация зависит как от генов вируса, так и от генов клетки-хозяина. Так, например, мутации генов dnaB, D, Е, F и О приводят к потере способности поддерживать рост фага X точно так же, как и в случае, когда инактивированы /s-гены. Вместе с тем фаг X сохраняет способность к репликации в бактериях с мутантными генами А я С. Многие вирусы, в том числе Т-четные фаги, содержат гены, кодирующие синтез своих собственных специфических ДНК-полимераз и других белков, необходимых для репликации. [c.276]

Главным продуктом синтеза жирных кислот, катализируемого растворимыми клеточными экстрактами, является пальмитиновая кислота. Кроме того, в меньших количествах образуются и другие кислоты, содержащие от 10 до 14 атомов углерода. [c.401]

Это выдающееся открытие, важное для установления процессов биосинтеза терпенов, началось с наблюдения, что для превращения МВК в терпеноиды при помощи клеточных экстрактов необходимо наличие аденозинтрифосфата (АТФ), Мп2+ или Mg " , а также восстановленных пиридиннуклеотидов. Это привело к поискам фосфорилированных промежуточных продуктов, что имело далеко идущие последствия. Ниже будут рассмотрены доказательства, обосновывающие представленную схему (см. схему на стр. 464). [c.465]

Открытие бесклеточного брожения оказало глубокое воздействие на весь дальнейший ход биохимических исследований. Появилась возможность использовать для изучения биохимических реакций не живые -клетки, а пробирки с растворами. В результате от физиологии, которая до этого открытия была единственной областью науки, изучающей химические основы жизнедеятельности, начала отпочковываться как самостоятельная область науки биохимия. В последующие пятьдесят лет биохимики нашли ответ на два вопроса, касающиеся превращения глюкозы в этанол и СОа. Они установили природу химических промежуточных веществ, образующихся в ходе этой цепи реакций, и природу агентов, присутствующих в клеточном экстракте и заставляющих эти реакции протекать так быстро и так специфично. [c.59]

Клеточный экстракт наряду с интересующим ферментом содержит п другие вещества белковой и небелковой природы. От них избавляются с помощью различных методов фракционирования. Последовательность их применения может быть различной, но целесообразно, в частности, учитывать специфику фермента. Например, если фермент термостабилен, следует, очевидно, начать с термической обработки, что даст возможность сразу же избавиться от большинства термолабиль-пых белков. Обычно белки неустойчивы в кислых растворах, поэтому если фермент выдерживает подкисление, его очистку следует начинать именно с этой стадии и т. д. [c.199]

При получении ряда аминокислот химико-ферментативными способами используют энзимы, принадлежащие к разным классам. Эти процессы могут бьггь как одностадийными (конверсии), так и многостадийными. Источником ферментов для большинства процессов служат энзимы микроорганизмов — как индивидуальные, так и их природные смеси, содержащиеся в интактных (не растущих), высушенных и лизированных клетках, клеточных экстрактах и, наконец, в препаратах иммобилизованных клеток и ферментов. Использование иммобилизованных ферментов в биотехнологии будет рассмотрено в гл. 4. [c.51]

Для вьщеления специфических гетерологичных белков из клеточных экстрактов и из смесей секретируемых белков можно использовать разные подходы. Один из них основывается на присоединении к клонированному гену - без нарущения рамки считывания - сегмента ДНК, кодирующего короткую аминокислотную последовательность, которая специфически связывается с каким-либо химическим элементом, соединением или макромолекулой. Такую конструкцию встраивают в экспрессирующий вектор между промотором и сайтом терминации транскрипции. Короткая аминокислотная последовательность в составе рекомбинантного белка, синтезируемого в хозяйской клетке, играет роль аффинной метки. В одном случае перед клонированным геном был встроен - без нарущения рамки считывания - сегмент ДНК, кодирующий щесть остатков гистидина (Hisg), спейсерный участок, кодирующий семь аминокислот, и сайт [c.149]

Благодаря прекрасной биосовместимости хорошо сконструированных синтетических биомембран липосомы и везикулы из ПАВ были широко исследованы в качестве капсулирующих веществ для лекарств [21]. В искусственных клетках нашли применение как синтетические биомембраны, так и синтетические полимерные мембраны [22]. Искусственные клетки представляют собой капсулированные системы, которые могут быть введены в организм для эффективного воспроизведения естественных функций. Внутри искусственных клеток содержались ферментные системы, клеточные экстракты, биологические клетки, адсорбенты и др. Большое внимание уделяли созданию заменителей красных кровяных клеток (ККК). Было обнаружено, что микросферы с капсулированным кремнием быстро выводятся из системы кровообращения [23]. [c.335]

Биореактор, ферментер (Biorea tor) Устройство, в котором протекают биохимические реакции при участии живых микроорганизмов, клеточных экстрактов или ферментов. Часто этот термин относится к сосуду, в котором растут микроорганизмы. [c.545]

В настоящее время выяснены основные реакции образования тетрапир-ролов, являющихся непосредственными предшественниками гема и хлорофилла. С помощью меченых атомов было показано, что в синтезе гема в бес-клеточных экстрактах эритроцитов птиц принимают участие два исходных реагента аминокислота глицин и сукцинил-КоА (или активная форма янтарной кислоты) — промежуточный метаболит цикла трикарбоновых кислот Ис- [c.413]

Последующими экспериментами было доказано, что репликация ДНК осуществляется полуконсервативным способом. Дополнительные сведения, подтверждающие названный способ, были получены в экспериментах с использованием ДНК-полимеразы (этот фермент катализирует полимеризацию дезоксинуклеозидтрифосфатов). ДНК-полимераза в виде очищенного энзима, выделенного из клеточных экстрактов Es heri hia oli, катализирует синтез ДНК в присутствии ионов магния, всех четырех нуклеотидов и ДНК-затравки [22,64]. [c.93]

Опыты Уонга требовали времени и усилий надо было в зкДНК разрывать одну из нитей, создавать комплекс между белком и разорванной ДНК, затем залечивать разрыв лигазой, отделять ДНК от белка и, наконец, измерять величину сверхспирализации. Хорошо бы иметь один белок, который и рвет нить, и залечивает разрыв, думал Уонг. Насколько меньше было бы возни. И он принялся искать такой белок в клеточных экстрактах кишечной палочки. [c.93]

Однако последующие работы [49] привели к противоположному толкованию этих результатов. Когда были получены бесклеточные экстракты Azotoba ter, то оказалось, что в этом случае цитрат и а-кетоглутаровая кислота окислялись быстро, хотя в опытах с интактными клетками -окисления цитрата не происходило совсем, а а-кетоглутаровая кислота окислялась только после некоторого лаг-периода. Более того, сам ацетат окислялся клеточными экстрактами очень медленно, но при добавлении фумарата скорость окисления значительно возрастала. Этот эффект значительно превышал то возрастание скорости окисления, которое наблюдалось бы при суммировании скоростей окисления этих двух соединений. Таким образом, казалось, что ферменты цикла трикарбоновых кислот в клетке имеются, но они недоступны для некоторых метаболитов, находящихся вне ее. Однако было показано, что при введении а-кетоглутаровой кислоты в клетки, выращенные с сукцинатом, происходит образование новых ферментов, поскольку скорость окисления субстрата в ходе эксперимента возрастала. Теперь считается, что это ферменты, обеспечивающие перенос субстрата через клеточную мембрану. Ферменты эти получили название пермеаз. Однако следует отметить, что концепция о существовании специализированных ферментов, связанных с транспортом субстрата, была подвергнута критике [50]. [c.32]

Хотя окисление жирных кислот протекает главным образом, а быть может и исключительно, в митохондриях или в других клеточных частицах, синтез этих соединений может катализироваться растворимыми экстрактами печени голубя или экстрактами грудной н<елезы. Вакил и его сотрудники выяснили, какие именно коферменты необходимы для этого процесса. Оказалось, что для синтеза жирных кислот, катализируемого растворимыми клеточными экстрактами, абсолютно необходимы бикарбонат, АТФ, Мп и восстановленный НАДФ. Эти данные позволяют четко отличить синтетический путь от окислительного , так как известно, что на окисление жирных кислот [c.400]

Концентрация комплекса СОд)—величина того же порядка, что и концентрация хлорофилла. Хлорофилл составляет 5% от сухого веса hlorella (см. гл. XV), что соответствует средней концентрации около 0,01 моль1л. Однако акцептор — не хлорофилл, так как водный клеточный экстракт, который содержит весь поглощенный в темноте радиоактивный углерод, бесцветен. Кроме того, клетки с различным содержанием хлорофилла не обнаруживают различий в абсорбирующей способности С Оа и этиолированные растения также способны поглощадь двуокись углерода. [c.212]

Биосинтез гиалуроновой кислоты. Ферментативный синтез гиалуроновой кислоты in vitro был осуществлен в двух вариантах а) в бес-клеточных экстрактах кожи зародышей [200] б) в бесклеточных экстрактах человеческой синовиальной оболочки эмбриональными фибро-бластами [201]. В обоих случаях донорами моносахаридных остатков были уридиновые нуклеотиды — УДФ-глюкуроновая кислота и УДФ-N-ацетилглюкозамин. Из кожи зародышей крыс выделен фермент, осуществляющий этот синтез. [c.211]

На протяжении 10 лет Эвери, Мак-Карти и Мак-Леод занимались вьщелением и очисткой молекул, входящих в состав убитых нагреванием инкапсулированных клеток пневмококка и изучали их способность трансформировать бескапсульные клетки. Удаление полисахаридной капсулы и белковой фракции из клеточных экстрактов не оказывало влияния на трансформацию, но добавление фермента дезоксирибонуклеазы (ДНКазы), гидролизующей ДНК, препятствовало ей. Способность высокоочищенных экстрактов ДНК из инкапсулированных клеток вызывать трансформацию показала, что трансформирующим фактором Гриффита бьша ДНК. Несмотря на эти результаты многие ученые все еще отказывались признать, что генетическим материалом служит ДНК, а не белок. В начале пятидесятых годов множество дополнительных данных, полученных при изучении вирусов, наконец, продемонстрировали, что носителем генетической информации служит ДНК. [c.161]

Обнаружен фактор, активирующий карбамоилтрапсфоразу аспарагина в супернатанте клеточных экстрактов Sa haromy es erevisiae. Этот фактор, но всей вероятности, находится в микросомальной фракции. Удалось частично очистить и определить его молекулярный вес [648]. [c.47]

Ферменты способны ускорять соответствующие процессы в любых условиях, пока сохраняется нативность белковой глобулы, хотя Луи Пастер, когда он вводил термин фермент , полагал, что брожение (fermentation) с помощью микроорганизмов неотделимо от жизнедеятельности, а катализатором брожения является только живая клетка. Вскоре оказалось, что это совсем не так, а эволюция процесса очистки носителя каталитической активности привела от живых клеток или клеточных экстрактов к индивидуальным кристаллическим белкам. В конце прошлого века (1878 г.) в противовес живым клеткам — ферментам Пастера — энзимами были названы катализаторы биологического происхождения, проявляющие свои функции во внеклеточных системах. Сейчас фермент и энзим используются как синонимы, хотя в русской литературе предпочитают фермент , а в англо-американской — энзим . [c.54]

При гидролизе этого бесцветного соединения образуются галактоза и имеющий ярко-желтую окраску ортонитрофенол. Поэтому каталитическую активность присутствующей в клеточном экстракте Р-галактозидазы можно определять следующим путем. Определенный объем экстракта добавляют к раствору ОНФГ известной концентрации и затем через различные промежутки времени определяют интенсивность желтой окраски реакционной смеси. Так как интенсивность окраски пропорциональна числу гидролизованных молекул субстрата, то активность фермента можно выразить через скорость окрашивания реакционной смеси. Результаты такого опыта приведены на фиг. 38. В нейтральной водной среде происходит лишь очень незначительный спонтанный гидролиз ОНФГ, [c.81]

И поэтому, как видно на приведенном графике, пробирка, в которую не добавлено клеточного экстракта, не окрашивается. Наоборот, в той пробирке, в которую было добавлено 0,4 мл экстракта, раствор приобретает ярко-желтую окраску. Интенсивность окрашивания в этой пробирке достигает максимума через 20 мин инкубации, когда гидролиз ОНФГ завершается. Можно видеть, наконец, что начальная скорость окрашивания этой пробы соответственно в два и в четыре раза выше, чем скорость окрашивания проб, в которые добавлено только 0,2 или 0,1 мл экстракта. Таким образом, скорость гидролиза субстрата пропорциональна концентрации присутствующего в реакционной смеси фермента Р-галактозидазы. Следовательно, измеряя каталитическую активность, можно установить, какое количество фермента содержится в клеточном экстракте. Отношение активности к сухой массе присутствующего в экстракте органического вещества представляет собой удельную активность ферментного препарата. [c.82]

Смотреть страницы где упоминается термин Клеточные экстракты: [c.33] [c.416] [c.252] [c.447] [c.41] [c.652] [c.400] [c.167] [c.28] [c.99] [c.181] [c.904] [c.230] [c.19] [c.43] [c.48] [c.79] [c.67] [c.176] [c.205] [c.222] [c.280] [c.36] [c.70]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология