Фагмида

Бактериофаги. При конструировании клонотек нуклеотидных последовательностей для фагового дисплея чаще всего используют хромосомы нитевидных колифагов М13, fl и fd, а также фагмиды, полученные на их основе. Эти фаги заражают мужские клетки Е. oli через половые ворсинки (F-пили), которые содержат белковые рецепторы, обеспечивающие их сорбцию. Хромосома фагов представляет собой одноцепочечную, кольцевую, ковалентно замкнутую ДНК, которая заключена внутри цилиндрической белковой оболочки, обеспечивающей выживание вирусов в экстремальных условиях при значениях pH 2,5-11 и темпе- [c.334]

Для клонирования генов в клетках Е. oh применяют векторы, сконструированные на базе ДНК плазмид и фагов, а также векторы, сочетающие в себе их свойства (фазмиды, фагмиды и космиды). В силу различных биологических и физических характеристик различные векторы используют для разных целей (табл. 7.2) [c.238]

Когда полная замена исходного белка оболочки на гибридный летальна для бактериофага, гибридный белок нарабатывают в бактериальных клетках под контролем фагмиды, а белок дикого типа обеспечивают заражением бактериальных клеток, содержащих фагмиду, фагом-помощником. В такой системе со- [c.335]

Б присутствии фага-помощника fl (или М13) фагмиды, используя сайт оп ), начинают реплицироваться как фаговые ДНК, образуя однонитевые копии плазмид, причем выбор нити для копирования зависит от ориентации оп-сайта. Образовавщиеся однонитевые ДНК могут упаковываться in vivo в капсулу и одновременно с фагом-помощником покидать естественным путем клетку. В препаратах однонитевых ДНК, выделенных из фагов, присутствует смесь ДНК фага-помощника и фагмид. Для больщинства задач (секвенирование приготовление зондов, мутагенез и т. п.) [c.216]

Таким образом, с помощью фагмид клонируемый фрагмент может быть получен и использован в одно- или двунитевой форме. Их преимущество перед векторами Ml Зтр — возможность клонирования в них относительно больщих фрагментов ДНК (до 10 т.п.н.), не подвергающихся внутренним перестройкам. [c.217]

К продуктам геномной инженерии можно отнести также космиды, фагмиды, дрожжевые и другие челночные векторы. Но наиболее последовательное использование принципов геномного конструирования можно проследить на С к- ериофагах. [c.434]

Последующие усовершенствования векторов для молекулярного клонирования, подробно рассмотренные в седьмой главе данной книги, привели к тому, чтобы были созданы фагмиды, представляющие собой химерные конструкции, являющиеся по сути плазмидами, но несущими [c.52]

При автоматическом секвенировании ДНК в качестве матриц наиболее часто применяются одно- или двуцепочечные молекулы фагов, плазмид или фагмид (кроме ПЦР-продуктов, которые представляют собой отдельный тип матриц для секвенирования). Выделение требуемого большого количества подобных образцов представляет собой некоторую проблему. Так, в работе Эперона сообщалось об изготовлении специальной установки, рассчитанной на одновременное выделение 96 таких образцов с помощью фильтрации [Ерегоп, 1986]. Выделенные таким образом одноцепочечные препараты ДНК на основе фага М13 показали высокое качество секвенирования, сравнимое с матрицами, получаемыми обычным путем с использованием того же полиэтиленгликоля в качестве осадителя фаговых частиц. Впоследствии этот метод был слегка модифицирован [Ерегоп et al., 1988]. Предложенные в этих [c.309]

Оказалось, что с помощью технологии фагового дисплея можно на поверхности вирионов нитевидных фагов представлять РаЬ-фраг-менты иммуноглобулинов. Для этих целей обычно используют систему клонирования типа 3 + 3 (см. 7.5.3). В фагмиде конструируют ген, в котором последовательность, кодирующую легкую или тяжелую цепь РаЬ-фрагмента IgG, объединяют в правильной рамке трансляции с геном III. Вторая, дополняющая полипеп-тидная цепь РаЬ-фрагмента экспрессируется в свободном виде. При этом обе целевые кодирующие последовательности состыковывают с ген-эквивалентом сигнальных пептидов (рис. 7.10, а). После секреции в периплазматическое пространство клетки Е. oli обе цепи ассоциируют и образуют активный РаЬ-фраг-мент (см. рис. 7.10, б). [c.200]

Рис. 7.10. Гибридная фагмида, экспрессирующая слитый белок УнСн-рП1 и автономный полипептид УьСь (а), и частица слитого фага (б)

Справочник химика 21

Химия и химическая технология