Цитраконилирование

Новейшим методом обратимого блокирования е-ЫНг-групп можно считать реакции малеинирования [47] и цитраконилирования [13]. Оба реагента, участвующие в этих реакциях, не только блокируют аминогруппы, но и увеличивают растворимость крупных фрагментов, полученных при триптическом гидролизе. Благодаря обратимости обеих реакций ацилирующие реагенты подобного типа могут с успехом применяться для расшифровки первичной последовательности. [c.36]

Анализ пептидов, содержащих лизин, из ферментативного (но не триптического ) или частичного химического гидролизата является важным этапом расшифровки аминокислотной последовательности белков. Выделение пептидов, содержащих лизин, следует начать с обратимого блокирования е-аминогрупп остатков лизина в исследуемом белке. Такую обратимую модификацию можно получить при трифторацетилировании [5], малеинировании [2] или цитраконилировании [4]. [c.111]

Обратимое блокирование в-аминогрупп можно также получить в результате реакций малеинирования или цитраконилирования. В этих реакциях происходит включение карбоксильной группы в е-аминогруппу с изменением ее заряда. [c.112]

Реакцию цитраконилирования проводят так же, как и реакцию малеинирования, в 8 М растворе мочевины, содержащем 10 мг/мл белка, в автотитраторе. Величина pH поддерживается на постоянном уровне с помощью непрерывной подачи 10%-ного раствора NaOH. К раствору белка в три приема при тщательном перемешивании прибавляют 30 молярных эквивалентов цитраконового ангидрида (в расчете на количество аминогрупп). В конце реакции смесь обессоливают диализом или гель-фильтрацией. [c.112]

Реакции, для протекания которых требуются высокие концентрации мочевины или гуанидина, являются дорогостоящими кроме того, в результате образуются большие количества отработанного денатурирующего агента, который необходимо удалять. Основная проблема, однако, заключается в том, что вследствие сложности многих реакций трудно осуществить их адекватное масштабирование. Это касается, например, реакции обратимого цитраконилирования остатков лизина и ренатурации таких мультимерных белков, как IgG. [c.134]

Для освобождения белков из мембран используют также химические реакции белков с дииодсалицилатом лития [813] или ангидридами янтарной [1114] малеиновой и цитраконовой кислот [189, 342]. Реакция цитраконилирования заслуживает особого внимания, поскольку она позволяет солюбилизировать [c.315]

Описано несколько методов модификации лизина, наибольший интерес из которых представляют цитраконилирование, малеи-лирование и трифтороацетилирование. Выбор метода зависит от относительной стабильности модифицированных групп при последующей обработке препаратов белка. Все три варианта модифицированного лизина устойчивы в диапазоне pH 8—9 [c.143]

Цитраконилирование. Для обратимой модификации остатков лизина в качестве реагента используют цитраконовый ангидрид [14]. Реакцию проводят при перемешивании и 2СС, pH реакционной среды контролируют с помощью рН-метра. Белок (15 мг/мл) растворяют или суспендируют в воде и доводят pH до 8,0. К раствору небольшими порциями (1 мкл/мг белка) добавляют цитраконовый ангидрид и поддерживают pH 8,0 подтитровывая реакционную смесь 5 М НаОН. Через 30 мин pH реакционной среды не меняется, что свидетельствует о завершении реакции. Модифицированный белок подвергают диализу или гель-фильтрации в 0,1 М бикарбонате аммония. Большинство белков в результате модификации переходит в раствор. Однако в случае необходимости реакцию можно проводить в растворе мочевины или гуанидин-НС1. [c.144]

Специфическое расщепление по остаткам аргинина. Специфичность трипсина можно ограничить благодаря обратимому блокированию остатков лизина (разд. 3.4.3). В этом случае гидролиз проходит только по остаткам аргинина. Наиболее распространена модификация цитраконилированием если продолжительность гидролиза трипсином слишком велика, используют малеилирование. Деблокирование малеильных или цитра-конильных групп проводят подкислением реакционной смеси до рН< 3,5, а затем осуществляют разделение полученных пептидов. При подкислении фермент инактивируется, однако для предотвращения его активации при последующем повышении [c.148]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология