Элюирование различными солевыми концентрациями

Состав системы растворителей на колонке с сефадексом G-25 можно изменить таким образом, что некоторые компоненты станут нерастворимыми и благодаря этому задержатся на колонке, в то время как растворимые компоненты будут элюироваться. Подобное явление имеет место, например, при дифференцировании по В. Эпштейну и М. Тану [152] так называемых эуглобулинов и псевдоглобулинов сыворотки человека. Если образец сыворотки в 1М поваренной соли поместить на колонку с G-25, уравновешенную предварительно очень разбавленным буфером, и элюировать тем же самым буфером, то вначале белки отделяются от соли. Хорошо растворимые в разбавленном растворе соли псевдоглобулины (главная часть белков сыворотки) элюируются с колонки гораздо раньше, чем Na l. Однако эуглобулины, отделившись от соли, становятся нерастворимыми. При дальнейшем элюировании они вновь растворяются в солевом растворе и так далее. В итоге они выходят с колонки вместе с фронтом поваренной соли. Порат [153] развил этот принцип дальше. Вначале в колонке с сефадексом G-100 создают возрастающий градиент концентрации соли (сверху вниз). Если теперь на колонку нанести смесь белков и элюировать водой, то компоненты смеси будут мигрировать быстрее, чем будет изменяться градиент соли. Таким образом, белки в соответствии с их растворимостью в солевых растворах выпадают в осадок в разных местах колонки, вновь растворяются по мере сдвига градиента и так далее. Таким путем (т. е. зонным осаждением) можно разделить белки одинаковых размеров, но с различной растворимостью. [c.200]

Белковый характер ферментов. Выше уже отмечалось, каким путем были получены водные экстракты, соки или даже твердые аморфные осадки, содержащие различные ферменты. До выделения чистых ферментов невозможно было оценить концентрацию фермента в этих сырых ферментативных препаратах. Однако на этом этапе исследований удалось получить в результате различных операций очистки препараты, в тысячу раз более активные, чем исходные тем самым было доказано, что ферменты являются, как правило, крайне активными катализаторами, действующими дан е в очень малых концентрациях. Этот результат не давал, естественно, никаких указаний в отношении абсолютной концентрации фермента. Среди методов очистки и концентрирования, примененных прежними исследователями, следует особо отметить метод, которым пользовались Вильштеттер и его ученики, очень сходный с современньш хроматографическим методом, а именно адсорбцию на таких твердых материалах, как каолин или окись алюминия, и последующее элюирование солевыми растворами. Эти исследования показали, что ферменты имеют коллоидный (на современном языке макромолекулярный) характер, но они не позволили уточнить их химический характер. [c.792]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология