Элюирование солевыми растворами

Анионы и катионы элюируют водой или различными солевыми растворами. Показано [21], что при элюировании растворами солей не достигается полного разделения вследствие образования хвостов . В области низких значений pH порядок элюирования ионов изменяется, а хвосты сводятся к минимуму. Кроме того, от тина элюента зависит симметрия кривых элюирования [21]. [c.322]

Стеклянную трубку (внутренний диаметр 2—3 см, высота 20—50 см) с оттянутым концом располагают вертикально в узкую часть помещают тампон из стеклянной ваты, а затем надевают резиновый шланг с зажимом. Готовую колонку заполняют на одну треть 0,57о-ным раствором поваренной соли. Предварительно замачивают на 30 мин 17 г сефадекса 0-25 (тонкий), добавляя порошок к избытку 0,5%-ного, раствора поваренной соли. (Его используют в качестве растворителя на протяжении всего опыта.) Сливают избыток растворителя с набухшего геля, а суспензию количественно переносят в подготовленную колонку. Через 5 мин открывают зажим. Частицы геля начинают оседать в потоке вытекающий из колонки растворитель постоянно пополняют. В итоге формируется готовый к работе слой геля объемом около 87 мл. Чтобы при внесении смеси не нарушить верхний слой геля, зажим закрывают и избыток растворителя удаляют пипеткой. На гель затем осторожно наносят раствор 20 мг крахмала и 30 мг глюкозы в 2 мл солевого раствора. Зажим вновь открывают, чтобы дать раствору впитаться в гель. Аналогичным образом еще раз промывают верхний слой 2 мл растворителя, после чего наполняют им колонку и начинают элюирование. С момента внесения образца элюат собирают в мерный цилиндр, содержащий 1 мл раствора Гг + К1. После того как с колонки сойдет 32 мл раствора, элюат начинает окрашиваться в синий цвет, что свидетельствует о появлении в нем крахмала. Положительную реакцию на крахмал дают 12—13 мл элюата, затем она быстро исчезает. Когда будет собрано 66—67 мл элюата, в следующих порциях, общий объем которых составляет 13— [c.18]

В принципе в системе пламенно-ионизационного детектора с транспортирующей проволокой удаление растворителя происходит до того, как проба попадает в пламя. Поэтому сигнал этого детектора в основном не зависит от состава растворителя. На практике же растворитель редко удаляется полностью. Одностадийный процесс, применяемый для удаления растворителя с транспортирующей проволоки, может обеспечить полное удаление растворителя без улетучивания анализируемого вещества только в том случае, если существует огромная разница в летучести вещества и растворителя. Перенос растворителя в детектор вместе с анализируемым веществом делает этот детектор чувствительным к изменениям состава растворителя. При работе с буферными солевыми растворами применение пламенно-ионизационного детектора с транспортирующей проволокой невозможно в связи с их нелетучестью. В то же время, градиентное элюирование с использованием солевых бу- [c.150]

При повторном цикле анионообменная смола, которая находится в сульфатной форме, после элюирования переводится в хлоридную форму посредством регенерации хлористым натрием. Солевой раствор хлористого натрия используется снова почти таким же образом, как элюирующая кислота. На основе опытов, проведенных на экспериментальной установке, можно сказать, что извлечение аконитовой кислоты с помощью ионного обмена вполне возможно. Меласса возвращается с почти количественным выходом, за исключением извлеченных органических кислот [c.561]

В усовершенствованном варианте этого метода [6] возможно проведение процесса в микромасштабе. На рис. 24.2 показана используемая микроколонка. Для разделения 3—5 мкМ каждого гликозаминогликана берут 400 мг дауэкса 1-Х2 (100—200 меш) на колонку и элюирование выполняют с применением линейного солевого градиента в 8 М растворе мочевины. Кроме того, мочевина уменьшает до минимума неэлектростатические связи белков с ионитами на основе целлюлозы. Присутствие 8 М раствора мочевины в солевом градиенте сдвигает хроматографические зоны гликозаминогликанов в сторону более низких удерживаемых объемов, указывая тем самым, что в отсутствие мочевины значительную роль в процессе разделения играют гидрофобные связи. В присутствии мочевины пики лучше разрешаются, что свидетельствует о том, что неэлектростатическое связывание препятствует процессу разделения. Разделение микроколичеств гликозаминогликанов на дауэксе 1-Х2 является, согласно данным некоторых исследователей [6], лучшим классическим вариантом метода, использующего хлорид цетилпиридиния (без органических растворителей). [c.139]

Ступенчатое элюирование ведут элюентами более сильными, чем тот, в котором растворена анализируемая проба. Если колонка заполнена катионитом в Н+-форме, концентрация Н+-ио-нов должна быть более высокой, а для хроматографии на анионите в солевой форме необходима более высокая концентрация других противоионов в элюирующих буферных растворах. Для [c.278]

Обессоливание. В разделе, посвященном ионному обмену, уже отмечалось, что при анализе биохимических проб для сохранения активности ферментов или для проведения некоторых разделений часто используют буферные растворы. В результате выделения получают водный раствор искомых соединений, а также электролиты, которые входят в состав различных буферных растворов. Если работают с декстрано-вым гелем, который будет исключать молекулы пробы, то обессоливание раствора пробы можно выполнить посредством гель-фильтрации. Для этого нужно только ввести в колонку солевые растворы пробы, а элюирование проводить чистой водой. Относительно небольшие [c.598]

По количеству лиганда, обратимо или необратимо связанного с неизвестным количеством высокомолекулярного вещества, можно рассчитать их константу равновесия нли стехиометрию связывания [41] (рис. 16.7). Для этого проводят инкубирование данного вещества и лиганда с последующей гель-фильтрацией на сефадексе 0-50, причем уравновешивание и элюцию осуществляют с помощью раствора с такой же концентрацией лиганда, которая использовалась в эксперименте по связыванию. При элюировании концентрация лиганда в пике белка оказывается выше, чем в элюирующем буфере, за счет связывания лиганда с белком, который в этот момент находится в элюате. На участке кривой элюции, соответствующем общему, или солевому , объему элюата, образуется впадина. Здесь находится исходная инкубационная смесь, из которой удален лиганд, связавшийся с уже вышедшим из колонки белком. Площадь впадины равна площади пика. Определив количество лиганда, исходя из суммы площадей этих пиков, [c.223]

Белковый характер ферментов. Выше уже отмечалось, каким путем были получены водные экстракты, соки или даже твердые аморфные осадки, содержащие различные ферменты. До выделения чистых ферментов невозможно было оценить концентрацию фермента в этих сырых ферментативных препаратах. Однако на этом этапе исследований удалось получить в результате различных операций очистки препараты, в тысячу раз более активные, чем исходные тем самым было доказано, что ферменты являются, как правило, крайне активными катализаторами, действующими дан е в очень малых концентрациях. Этот результат не давал, естественно, никаких указаний в отношении абсолютной концентрации фермента. Среди методов очистки и концентрирования, примененных прежними исследователями, следует особо отметить метод, которым пользовались Вильштеттер и его ученики, очень сходный с современньш хроматографическим методом, а именно адсорбцию на таких твердых материалах, как каолин или окись алюминия, и последующее элюирование солевыми растворами. Эти исследования показали, что ферменты имеют коллоидный (на современном языке макромолекулярный) характер, но они не позволили уточнить их химический характер. [c.792]

Джеймсон [26 ] нашел, что градиентное элюирование обеспечивает разделение линейных полимеров фосфорной кислоты, содержагцих до 14 атомов фосфора в цени. Кривая элюирования изображена на рис. 16. 3. Высокополимерные анионы способы поглош,аться анионитом (гл. 2. 3 и 13,2), но они не удаляются при элюировании солевым раствором [48]. В случае, если поглош,ение полиметафосфата или других высокополимерных анионов оказывается необратимым, колонку наполняют 6М НС1 и оставляют на ночь. Время, необходимое для гидролиза полимеров, может быть сокраш ено за счет нагревания колонки. [c.393]

Если фермент адсорбировался на одной из колонок и был успешно элюирован солевым раствором, имеет смысл уточнить pH, при котором он адсорбируется. Для этого следует проверить, будет ли он адсорбироваться, например на КМ-целлюлозе при более йысоком значении pH и на ДЭАЭ-целлюлозе при более низком. В этих условиях может снизиться сорбция других белков. Необходимые для этого буферные растворы описаны ниже. Повышение ионной силы, например добавлением 50 мМ или 0,1 М КС к буферу при том же значении pH, дает тот же эффект. На рис. 4.16 приведена схема таких пробных опытов. [c.120]

Высшие спирты были разделены на колонке, наполненной дауэксом 50-Х8 (Н+) (200—400 меш), путем постепенного элюирования уксусной кислотой возрастающей концентрации (1—Зн.) [7] (табл. 18.3). Шерма и сотр. [8] также изучали возможность, разделения высших спиртов на дауэксе 1 (СНзСОО ) при элюировании водноорганическими солевыми растворами. При этих разделениях важное значение имеет как высаливание, так и растворимость, и, следовательно, зависимость логарифма коэффициента распределения выделенного вещества относительно концентрации электролита не всегда линейна. Эти работы показывают, что возможно неполное разделение высших спиртов (к-гексанола, н-гептанола и н-октанола) с использованием в качестве элюента 4 М раствора ЫС1 в метаноле. Однако наблюдалось существенное расширение кривых элюирования. Шерма и Лаури [9] изучили хроматографию на основе солюбилизации на макропористых ионообменных смолах. Разделение гомологического ряда алифатических спиртов с помощью хроматографии на основе солюбилизации на макропористых ионообменных смолах амберлист 15 было проведено не так успешно, как на гелях обычных смол. [c.27]

Состав системы растворителей на колонке с сефадексом G-25 можно изменить таким образом, что некоторые компоненты станут нерастворимыми и благодаря этому задержатся на колонке, в то время как растворимые компоненты будут элюироваться. Подобное явление имеет место, например, при дифференцировании по В. Эпштейну и М. Тану [152] так называемых эуглобулинов и псевдоглобулинов сыворотки человека. Если образец сыворотки в 1М поваренной соли поместить на колонку с G-25, уравновешенную предварительно очень разбавленным буфером, и элюировать тем же самым буфером, то вначале белки отделяются от соли. Хорошо растворимые в разбавленном растворе соли псевдоглобулины (главная часть белков сыворотки) элюируются с колонки гораздо раньше, чем Na l. Однако эуглобулины, отделившись от соли, становятся нерастворимыми. При дальнейшем элюировании они вновь растворяются в солевом растворе и так далее. В итоге они выходят с колонки вместе с фронтом поваренной соли. Порат [153] развил этот принцип дальше. Вначале в колонке с сефадексом G-100 создают возрастающий градиент концентрации соли (сверху вниз). Если теперь на колонку нанести смесь белков и элюировать водой, то компоненты смеси будут мигрировать быстрее, чем будет изменяться градиент соли. Таким образом, белки в соответствии с их растворимостью в солевых растворах выпадают в осадок в разных местах колонки, вновь растворяются по мере сдвига градиента и так далее. Таким путем (т. е. зонным осаждением) можно разделить белки одинаковых размеров, но с различной растворимостью. [c.200]

Влияние состава растворителя на характер элюирования иллюстрируется набором калибровочных кривых, показанных на рис. 7.10. Размер пор твердого геля порасила не зависит от растворителя, в то время как калибровочная кривая для декстрана сдвигается с изменением концентрации электролита в растворителе, показывая, что молекула декстрана в воде более вытянута, чем в солевом растворе. В подписи к рисунку объясняется, чем вызван сдвиг кривых. Известно, что наблюдаемый молекулярный вес полиэлектролита при переходе от воды к 0,1 н. раствору электролита [c.199]

Живые клетки, за исключением сперматозоидов, в норме содержат значительно больше рибонуклеиновой, чем дезоксирибонуклеиновой кислоты. На методы выделения дезоксирибонуклеиновых кислот оказало большое влияние то обстоятельство, что, тогда как рибонуклеопротеиды и рибонуклеиновые кислоты растворимы в разбавленном (0,15 М) растворе хлористого натрия, дезоксири-бонуклеопротеидные комплексы фактически в нем нерастворимы. Поэтому гомогенизированный орган или организм тщательно промывают разбавленным солевым раствором, из остатка с помощью крепкого солевого раствора экстрагируют дезоксирибонуклеиновую кислоту, которую осаждают затем добавлением этанола [307, 308]. С другой стороны, элюирование того же остатка водой дает [c.415]

Так с помощью наложения элезстрического поля в одной и той же адсорбционной колонке представилась возможность для осуществления двух весьма важных в адсорбционной технике процессов концентрирования металлов на ионитах и регенерации ионообменных смол. Наблюдения показали, что обменная емкость ионитов при этом не только не понижается, но несколько увеличивается за счет реакций восстановления. Благородные металлы, отлагающиеся на катоде, получаются в достаточно чистом виде. Получение кристаллических порошков металлов в данном случае имеет определенные преимущества перед получением металлов в виде солевых растворов, что является неизбежным при обычных методах элюирования. [c.238]

Если из образца необходимо полностью удалить Na l путем однократного элюирования, то для этого можно использовать только 10% объема колонки. Поскольку эффективный объем колопки невелик, то разбавленные солевые растворы перед нанесением на колонку можно сконцентрировать, так что из раствора одинаково легко удалить, нанример, как 5 71/, так н 0,5 М NHiBr. [c.94]

После нанесения нуклеиновых кислот все примеси радиоактивного ортофосфата можно удалить с колонки, промывая ее 50 мл или несколько большим количеством 0,1—0,2 М забуференного солевого раствора. Элюирование нуклеиновых кислот можно начать, пропустив сначала 50 мл 0,4 забуференного солевого раствора, а затем элюировать градиентом концентрации забуференной соли от 0,4 М до 1,0 М (по 150 мл каждого раствора). Нри этом разделяются тРНК, ДНК, рРПК и меченая нРПК (фиг. 3). [c.120]

Нуклеиновую кислоту элюируют, пропуская через колонку поочередно ряд забуференных солевых растворов с возрастающей концентрацией соли (начинают с раствора, которым уравновешивали колонку). Каяадый новый раствор начинают пропускать после того, как закончат элюирование предыдущим раствором (этот раствор должен опуститься до верхнего слоя кизельгура). Количество каждого элюента подбирают таким, чтобы при этом обеспечивалось фракционирование материала. Как правило, для фракционирования ДНК достаточно двух объемов каждого солевого раствора на один объем суспензии МАК (в данном случае объем суспензии МАК равен 30 мл). Для того чтобы обеспечить лучшее разделение, подбирают также соответствующие концентрации растворов на каждой ступени элюирования [2, 3]. Количество нуклеиновой кислоты [c.123]

С аффинной хроматографией во многом сходна хроматография, при которой в качестве лигандов используются красители (голубая, зеленая или красная сефароза), а также хроматография на гидрофобных лигандах, где носителем является октил- или фе-нилсефароза. В первом случае в качестве иммобилизованного лиганда используют органический краситель, являющийся аналогом субстрата, кофермента или аллостерического эффектора. Элюирование обычно осуществляют солевым раствором увеличивающейся концентрации. [c.70]

ПОЛНОСТЬЮ, неважно, адсорбируются ли при зтом другие белки). Например, очень разбавленный белковый раствор, элюированный с ДЭАЭ-целлюлозы при низкой ионной силе и pH 6, можно адсорбировать на маленькой колонке с ДЭЛЭ-целлюло-зой, повысив pH раствора до 8, а затем элюировать белок небольшим объемом солевого раствора. [c.27]

После заполнения колонки ионитом, обработки буферным раствором и BBo.jM пробы приступают к элюированию — пропусканию элюента через колонку. Элюирование может быть простое, когда используют один элюент, такой же, как взятый для растворения пробы, и ступенчатое, при котором элюирование ведут более сильными элюентами, чем растворитель, использованный для растворения пробы. Если хроматографическая колонка заполнена катионитом в Н + -форме, то концентрация ионов Н + в элюенте должна быть более высокой. Для колонок, заполненных анионитом в ОН -форме, концентрация ОН -ионов в элюенте должна возрастать. Если применяется ионит в солевой форме, то используют элюенты с возрастающей концентрацией других противоионов, чтобы обеспечить условия десорбции. Для создания необходимой ионной силы в элюент добавляют нейтральные электролиты (K I, Na l). [c.360]

Если раствор содержит катионы только щелочных металлов, то их общее содержание удобно определять по методу, изложенному в главе И. 1 (стр. 223). В тех случаях, когда выделяющаяся при ионном обмене кислота неустойчива или не может быть с достаточной точностью онределена алкалиметрическим титрованием, рекомендуется произвести элюирование катионов соляной кислотой и затем определить ее весовым методом в виде хлорида [173, 176 ]. Этот метод имел большое значение в те времена, когда еще не получили распространения аниониты сильноосновного тина. В настоящее время такого рода проблемы успешно решаются с помощью анионообменного метода определения общей солевой концентрации (гл. И. 2). Необходимо, однако, подчеркнуть, что анионообменный метод неприменим [c.260]

Потенциометрическое детектирование тиолов [96]. Тиолы количественно окисляются иодом до дисульфидов. Следовательно, количество тиола, элюируемое с хроматографической колонки, можно обнаружить, измеряя изменение окислительно-восстановительного потенциала стандартного раствора иода и иодида, поскольку по мере элюирования относительные количества двух веществ будут меняться. Стандартный раствор готовят, добавляя 0,025 М раствор иода (0,2 мл) в абсолютном этаноле и 0,05 раствор иодида калия (0,4 мл) в воде к 70-процентному (по объему) этанолу (50 мл). Раствор перемешивают в электродном сосуде, снабженном небольшой мешалкой и платиновым электродом. Выходная линия хроматографа ведет в этот раствор. Полуячейку соединяют солевым мостом, заполненным агартагаром, с полуячейкой Ag + Ag . Эту ячейку соединяют с самописцем через последовательное сопротивление 20 ком. Зависимость между изменением окислительно-восстановительного потенциала и количеством тиола, элюированного в ячейку, не строго линейна, поскольку величина pH не поддерживается постоянной и отношение [1г]/[1] при меньших концентрациях иода уменьшается быстрее, чем при высоких его концентрациях. Чувствительность детектора в конце опыта будет, однако, только на 5% выше, чем в начале, если общее элюированное количество (в молях) тиола только на 20% меньше исходной молярности иода (5 микромолей). В противном случае во время опыта раствор следует менять. [c.281]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология