Градиент плотности рабочие растворы

Образец вносят либо в виде узкой зоны, либо распределяют по всему объему колонки при создании градиента. Фракционирование идет наиболее быстро и эффективно в том случае, когда образец внесен вблизи зоны фокусирования. Для внесения в виде узкой зоны образец (при создании ступенчатого градиента) растворяют в одной или двух промежуточных фракциях рабочего раствора или (при создании плавного градиента) в рабочем растворе промежуточной плотности, вытекающем из смесителя. Плотность зоны образца не должна превышать плотность нижнего слоя рабочего раствора. Плотность слоев можно определить ориентировочно с помощью обычного сахариметра. При распределении образца по всему объему колонки белок растворяют в разбавленном, а иногда и в концентрированном растворах, приготовленных для построения градиента. В этом случае раствор с образцом следует отделить от верхнего и нижнего электролитов, соответственно разбавленным или концентрированным рабочими растворами. [c.310]

Швеция) в двух модификациях, имеющих одинаковую высоту, но раз-, личный объем (ПО и 440 мл). Рабочей частью колонки, в которой помещаются амфолиты-носители и создается градиент плотности, является камера, имеющая в поперечном разрезе вид кольца. Нижний электродный раствор обеспечивает контакт с нижним электродом, расположенным в -центральной трубке таким путем достигается отвод газов из электродного пространства без нарушения градиента плотности. Эффективное термостатирование, препятствующее конвекции вследствие возможного нагрева, достигается с помощью внутреннего и наружного холодильников [2 и 3). Внутренний холодильник фиксируется с помощью конического шлифа, расположенного непосредственно под верхним электродом. По окончании фокусирования нижний электродный буфер (в центральной трубке) изолируют от рабочей камеры с помощью крана 6, после чего содержимое камеры сливают через капилляр 7. [c.303]

Затем через второй патрубок медленно (4 мл/мин) по стенке подают в колонку рабочий раствор, формируя при этом ступенчатый или плавный градиент плотности. При создании ступенчатого градиента в 33 нумерованные пробирки помещают по О, 0,1, 0,2... 3,2 мл разбавленного раствора сахарозы с амфолитами и по 3,2, 3,1, 3,0, 2,9... О мл концентрированного раствора сахарозы. Содержимое пробирок тщательно перемешивают и поочередно, вручную или с помощью перистальтического насоса, вносят в рабочую камеру. [c.307]

По завершении опыта отключают напряжение и осторожно закрывают кран рабочей камеры. Вводят пластиковый шланг (диаметром 1—2 мм) через верхний патрубок и удаляют нижний электролит. Эта операция позволяет избежать загрязнения рабочего раствора в случае подтекания крана. Целесообразно также удалить верхний электролит (в количестве, примерно соответствующем исходному объему), поскольку кислота или основание быстро диффундируют в верхний слой рабочего раствора. Сливают содержимое колонки через короткий отрезок шланга (диаметр 1 мм), через кювету проточного денситометра и перистальтический насос (1 мл/мин) в коллектор. Для сохранения градиента плотности раствор подают в ячейку денситометра снизу вверх при этом следует избегать задержки пузырьков воздуха в ячейке. Элюат удобно собирать фракциями объемом 3—4 мл. [c.308]

Для фракционирования ферментов в градиенте плотности Веллер [60] использовал чрезвычайно простой по конструкции прибор, в основу которого положена ячейка, приведенная на рис. 7. Электрофокусирование проводят в правой части объемом II мл. Непосредственно под рабочим раствором и в левом, уравновешивающем плече находится катодный электролит, содержащий 40% сахарозы. Для заполнения ячейки 14 мл катодного электролита помещают в и-образную трубку, а затем в рабочей камере последовательно наслаивают И фракций по мл, причем разница при замене концентрированного раствора разбавленным составляет 0,1 мл. Катод погружают в левую камеру, а анод — в правую предварительно поверх рабочего раствора наслаивают 1— [c.318]

В самом начале центрифугирования следует задать центрифуге минимальное ускорение (см. главу 2). Именно в процессе набора скорости чаще всего происходит смешивание слоя препарата с верхней частью градиента, в результате чего существенно ухудшается разделение зон. Останавливать центрифугу при фракционировании в градиенте плотности следует без торможения. Рабочую скорость центрифугирования, как правило, выбирают максимально допустимой для данного ротора с учетом плотности раствора. Для сахарозы это в большинстве случаев несущественно ее плотность достигает значения 1,2 г/см лишь при концентрации 45%. Работа на максимальной скорости позволяет уменьшить продолжительность центрифугирования и расширение зон за счет диффузии. [c.220]

Фиг. 40 поясняет, как осуществляется фракционирование при помощи такого ротора. Для создания градиента раствор с возрастающей плотностью вводят в рабочий объем на периферии ротора. Под образовавшийся градиент тем же путем подслаивается более [c.187]

Гель-фильтрацию проводят на сефадексе G-200 в указанном рабочем растворе, что дает двукратное увеличение удельной активности. Ультрацентрифугирование проводят в градиенте плотности сахарозы (30 мл 25%-ного раствора МаСЦ-0,1 М орнитин [c.17]

В приборе для электрофокусирования в градиенте плотности должен быть предусмотрен отвод образующихся газов из электродного пространства без нарушения градиента. Наиболее простым прибором такого типа является О-образная трубка. Одно плечо трубки заполнено раствором с градиентом плотности, здесь же в растворе помещается один из электродов, второй электрод находится в другом плече с раствором, уравновешивающим содержимое основного плеча. Более сложный прибор Вестерберга и Свенссона [24] состоит из двух концентрически расположенных отделений вспомогательного — внутреннего и рабочего — наружного. Поскольку для электрофокусирования в градиенте [c.302]

Модель Ларкама, рассмотренная выше, является наиболее простой и приводит к решению одномерного уравнения конвективной диффузии. Однако эта простота была достигнута за счет очень сильных ограничений, которые не всегда можно реализовать. Например, трудно изготовить достаточно мелкую металлическую сетку, через которую мог бы беспрепятственно двигаться электролит. Кроме того, рабочая поверхность сетчатых электродов мала, в результате для увеличения нулевого тока /о и коэффициента преобразования k=S 0) приходится повышать концентрацию ионов с. Это приводит к увеличению градиента плотности раствора и усилению естественной конвективной диффузии, которая в данном случае вызывает флуктуации нулевого тока и увеличение собственных шумов ЭЯ. В этой связи возникает необходимость рассматривать диффузионные преобразующие элементы с сплошными электродами, среди которых можно выделить ЭЯ с осевой и сферической симметрией. [c.243]

В заключение упомянем о своеобразной конструкции колонок для ИЭФ в градиенте плотности раствора сахарозы, разработанной фирмой IS O (модель 212), Конструкторы этой фирмы стремились предоставить экспериментатору возможность следить за миграцией белков в ходе их фокусирования путем периодического сканирования всего градиента при 280 нм. На самой рабочей колонке это сделать не удается ввиду необходимости заключить ее в охлаждающую рубашку. Было найдено оригинальное, хотя и довольно сложное решение проблемы. Накачивая снизу в колонку плотный раствор сахарозы, ее содержимое, т. е. весь градиент pH, периодически поднимают в присоединенную сверху к колонке кварцевую трубку того же диаметра. При этом весь градиент последовательно проходит мимо облегающего эту трубку узла УФ-денситометра, для которого небольшой участок трубки играет роль цилиндрической кюветы. Затем весь столб жидкости возвращается обратно в колонку. Электрическое напряжение на рабочую колонку подается через расположенные по ее концам цилиндрические мембраны. На время сканирования напряжение выключается. Содержимое колонки элюируют в коллектор фракций также путем выдавливания градиента вверх. Объем колонки (охлаждаемой только снаружи) — 23 мл, а максимальная загрузка может составлять 10 мг белка. Все эти дорогостоящие усложнения не кажутся достаточно оправданными судя по публикациям последних лет, колонки IS O широкого распространения яе получили, [c.74]

Был использован промышленный карбид титана и карбид, очищенный соляной кислотой и отмытый до постоянной электропроводности промывных вод. -потенциал измеряли методом электроосмоса в модернизированном приборе Гортикова [6] и рассчитывали по уравнению Смо-луховского [7]. Поправку на поверхностную электропроводность во внешней обкладке двойного электрического слоя не вводили, поскольку уже в 10 -н. растворах она очень мала [8]. Диафрагмы из Т1С получали при центрифугировании предварительные опыты показали, что рассчитываемые величины -по-тенциала не зависят от длины диафрагмы и ее уплотнения. Отношение длины капилляров к их сечению, по-видимому, превышало некоторое минимальное значение, необходимое для установления стационарного электроосмотического переноса при заданном градиенте потенциала [8]. Устойчивость суспензий оценивали по скорости просветления жидкости в цилиндре, а также по оптической плотности центрифугированной суспензии. Рабочая концентрация суспензий составляла 10 вес.%. Суспензии карбида титана в чистой воде характеризуются небольшими отрицательными значениями -потенциала (рис. 1 и 2). Е-потенциал очищенного Т1С по абсолютному значению выше технического. Это связано, по всей вероятности, с наличием в промышленном продукте примесей железа [9]. Окислы железа в воде имеют положительный заряд на поверхности карбида титана. Добавление щелочи приводит к повышению отрицательного -потенциала, который достигает своего максимального значения при pH 11,5 для технического и pH 12,4 для очищенного образца. Дальнейшее повышение концентрации щелочи в системе резко снижает -потенциал Т1С. [c.44]

Затем через осевую трубку, наслаивают исследуемый образец (рис. 2.6, в), который вытесняют из трубки в объем ротора с помощью раствора меньшай плотности (рис. 2.6, г), при этом с периферии удаляется такой же объем подушки . После всех этих процедур скорость вращения ротора доводят до рабочей и в течение необходимого промежутка времени проводят либо зонально-скоростное, либо зо-нально-изопикническое фракционирование (рис. 2.6, 5). Извлечение фракций проводят при скорости вращения ротора 3000 об - мин Ч Содержимое ротора вытесняют путем добавления с периферии подушки , в первую очередь вытесняются менее плотные слои (рис. 2.6, е). Благодаря особой конструкции осевого канала ротора Андерсона смешивания зон при их вытеснении не происходит. Выходящий градиент пропускают через регистрирующее устройство, например ячейку спектрофотометра, с помощью которого по погло- [c.55]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология