Метотрексат как ингибитор

Г. Амплификация генов. Амплификация некоторых генов (см. гл. 38) обнаружена в клетках ряда опухолей. Как выяснилось, ее можно вызвать введением противоопухолевого препарата метотрексата— ингибитора дигидрофолатредуктазы. В результате опухолевые клетки становятся резистентными к действию метотрексата. Причиной резистентности является амплификация гена дигидрофолатредуктазы, при этом активность фермента повышается примерно в 400 раз. Амплифицированные гены, имеющие суммарную длину 1000 т. п. н. или даже больше, выявляются в виде гомогенно окрашенных участков на соответствующих хромосомах. Амплифицированные гены могут обнаруживаться также в двойных мини-хромосомах, не содержащих центромер. В настоящее время исследуется связь гомогенно окрашенных участков и двойных мини-хромосом. Процесс амплификации, а следовательно, и активации, может затрагивать и некоторые клеточные онкогены. Имеются данные, позволяющие предполагать, что увеличение количества продукта некоторых он- [c.361]

Другой подход заключается в использовании специфических ингибиторов ферментов, структурно родственных коферменту. Так, метотрексат (58) является мощным ингибитором дигидрофолатредуктазы, причем это его свойство мало меняется в случае ферментов, выделенных из различных источников. Это соединение было ковалентно присоединено к 6-аминоэтилСефарозе путем конденсации с карбодиимидом, затрагивающей карбоксильную группу метотрексата. Полученный сорбент был использован для крупномасштабного выделения дигидрофолатредуктазы из Е. соИ. Промывка колонки 1 мольным раствором хлорида натрия вызвала удаление менее чем 1 % связанного фермента, а последующая элюция тем же раствором, содержавшим дигидрофолиевую кислоту, позволила достичь количественного выхода фермента [131]. [c.644]

Как выяснилось, метотрексат ингибирует дигидрофолат-редуктазу, которая так прочно связывается с ингибитором, что этот процесс практически необратим. В результате, поскольку дигидрофолат-редуктаза выключается из цикла, нарушается синтез ДНК, клетки перестают делиться и рост опухоли замедляет- [c.174]

Системы Y2H, не требующие активации или подавления транскрипции. Использование синтеза РНК для обнаружения взаимодействия белков друг с другом является с биохимической точки зрения очень сложным подходом. Его реализация требует переноса гибридных белков в ядро с последующим влиянием на аппарат транскрипции, что открывает большой простор для артефактов, часть которых была отмечена выше. В этой связи, усилия исследователей направлены на создание дигибридных систем, не зависящих от транскрипции генов-репортеров. Некоторые из таких систем основаны на появлении новой ферментативной активности после объединения двух гибридных белков, каждый из которых сам по себе ею не обладает. Один из вариантов дигибридных систем основан на обнаружении активности дигидрофолатредуктазы, которая появляется в результате объединения двух фрагментов полипептидной цепи данного фермента, что является одной из разновидностей генетической комплементации [131]. У дигидрофолатредуктазы N-концевой и С-концевой домены (1-105 и 106-186 а.о., соответственно) не приобретают правильной пространственной конформации, не объединившись друг с другом. На этом основании их ассоциацию обнаруживают по появлению ферментативной активности или способности взаимодействовать с конъюгатом ингибитора метотрексата с флуоресцеином. Описаны системы и на основе зеленого флуоресцирующего белка (GFP) [70]. [c.363]

Микофеноловая кислота, являющаяся ингибитором 1МР-дегидрогеназы, предотвращает образование в клетках млекопитающих ХМР, а следовательно, и GMP. Блокировать альтернативный путь синтеза пуриновых нуклеотидов можно также с помощью аминоптерина или метотрексата, которые подавляют синтез IMP de novo (см. рис. 13.3). Ингибирующий эффект этих соединений можно преодолеть, добавляя в среду гуанин, а также гипоксантин или аденин. На среде, содержащей микофеноловую кислоту и аминоптерин, а также ксантин с аденином в качестве единственных предшественников пуриновых нуклеотидов, нормальные клетки животных расти не будут, так как они не способны переводить ксантин в ХМР. В таких условиях будет наблюдаться рост только тех клеток, в которых синтезируется бактериальный фермент XGPRT. [c.348]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология