Двойные мини-хромосомы

Оказалось, однако, что синтез обеих новых цепей может идти не только в одном направлении, но и сразу в обе стороны от точки инициации. Такой механизм предполагает раскручивание двойной спирали сразу в двух местах-с образованием двух разветвлений реплика-ционных вилок на одной молекуле ДНК. Удвоение хромосомы у Е. соИ занимает примерно 40 мин. Между тем эта бактерия при благоприятных условиях делится со временем удвоения порядка всего лишь 20 мин. Этот факт можно объяснить тем, что обе дочерние хромосомы, по имеющимся данным, начинают новый цикл деления еще до того, как заканчивается предыдущий. О механизме репликаций ДНК получено гораздо больше детальных сведений, чем можно было здесь изложить. Между механизмами репликации фагов, плазмид и бактериальных хромосом существуют значительные различия. Для углубленного изучения этих вопросов следует обратиться к литературе по молекулярной биологии. [c.40]

Конкретные задачи генетического анализа диктуют выбор того или иного метода введения генетического материала в клетки-реципиенты. Так, прерываемая конъюгация позволяет установить последовательность генов на хромосоме. Однако этот метод неудобен при картировании маркеров, разделяемых 1—2 мин карты. В этих случаях необходимо картирование по трем точкам, которое проводят как на основе конъюгации, так и на основе трансдукции или трансформации. Для интеграции линейного фрагмента, внесенного в клетку, требуется двойной кроссинговер с кольцевой хромосомой. [c.214]

Г. Амплификация генов. Амплификация некоторых генов (см. гл. 38) обнаружена в клетках ряда опухолей. Как выяснилось, ее можно вызвать введением противоопухолевого препарата метотрексата— ингибитора дигидрофолатредуктазы. В результате опухолевые клетки становятся резистентными к действию метотрексата. Причиной резистентности является амплификация гена дигидрофолатредуктазы, при этом активность фермента повышается примерно в 400 раз. Амплифицированные гены, имеющие суммарную длину 1000 т. п. н. или даже больше, выявляются в виде гомогенно окрашенных участков на соответствующих хромосомах. Амплифицированные гены могут обнаруживаться также в двойных мини-хромосомах, не содержащих центромер. В настоящее время исследуется связь гомогенно окрашенных участков и двойных мини-хромосом. Процесс амплификации, а следовательно, и активации, может затрагивать и некоторые клеточные онкогены. Имеются данные, позволяющие предполагать, что увеличение количества продукта некоторых он- [c.361]

Изменение структуры хромосом. Амплификация генов часто (но не всегда) сопровождается существенными морфологическими изменениями хромосом. Эти изменения могут быть нескольких типов, и какой именно из них реализуется, зависит от вида клеток и самого гена. Иногда накапливаются очень маленькие дополнительные хромосомы, называемые двойными мини-хромосомами (рис. 10.88, ), которые, по-видимому, содержат амплифицированные последовательности. Двойные мини-хромосомы ацент-ричны и при делении клетки распределяются неравномерно. Этот факт, а также то, что клетки, содержащие много двойных мини-хромосом, растут хуже, чем нормальные клетки, означает, что в неселективной (не содержащей лекарственного вещества) среде резистентность клеток постепенно утрачивается. [c.309]

Морфологические изменения второго типа обнаруживаются в нормальных во всем остальном хромосомах и проявляются в атипичном характере исчерченности определенных областей при дифференциальном окрашивании (рис. 7.23) эти области называют гомогенно окрашивающимися (HSR). Как правило, они весьма протяженны, и хромосома, содержащая HSR, длиннее своего гомолога (рис. 10.88, ). В клетках, устойчивых к метотрексату, после гибридизации in situ с радиоактивным зондом, представляющим собой клонированный дигидрофолатредуктазный ген, и обработки фото-чувствительной эмульсией на HSR обнаруживаются зерна серебра. Таким образом, амплифицированные последовательности находятся внутри HSR. В хромосомах клеток сирийского хомячка, содержащих амплифицированные гены аспартат-карбамоил-трансферазы, также обнаруживаются лишние протяженные участки. Поскольку эти участки окрашиваются негомогенно, они не являются HSR, но тем не менее содержат амплифицированные сегменты ДНК (рис. 10.88, В). В некоторых случаях амплификация гена AD происходит и в нормальном локусе AD сирийского хомячка (в хромосоме В9р), хотя другие хромосомы тоже могут содержать много копий этого гена и иметь разнообразные аномалии (рис. 10.88, Г). Могут встречаться и двойные мини-хромосомы. Во всех исследованных случаях амплификация касается только одной пары гомологичных хромосом. В отличие от нестабильных амплифицированных генов в двойных мини-хромо- [c.309]

Любая модель амплификации должна учитывать следующие факты 1) амплификация может происходить в обычном локусе, в удаленных от него локусах и в независимых двойных мини-хромосомах 2) геномные сегменты, значительно превьина- [c.310]

Другой эксперимент, подтверждающий ту же идею, заключался в том, что рекомбинация изучалась, когда культура голодала и не росла. При этом, как видно из рис. 122, Б, ничто в принципе не изменяется. Здесь приемный штамм С"", и потому количество активных маркеров С " пе менялось. Количество маркеров Зш , принадлежащих доиорному штамму и введенных в бактерии при инициировании трансформации, слегка уменьшилось в результате процесса рекомбинации. Количество рекомбинантов Зш С нарастало в течение 50 мин. точно так же, как в растущей культуре, и достигало тех же значений. Следовательно, голодание клеток на процессе генетической рекомбинации не отразилось. Все выглядит так, как если бы образование двойных рекомбинантов произошло без копирования ДНК, а путем разрывов и соединений хромосомы с молекулами введенной ДНК. [c.357]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология