Антитела рибосомным белкам

Сейчас проводится много экспериментов с использованием реагентов, образующих поперечные связи между белковыми молекулами. В частности, используются бифункциональные соединения, способные ковалентно связываться с двумя различными —SH- или —ЫНг-груп-пами [93—95]. Использование этого подхода дало возможность идентифицировать следующие связанные поперечными связями пары [93, 95] S2-S3, S4-S6, S4-S8, S4-S9, S4-S12, S5-S8, S5-S9, S7-S8, S7-S9, S11-S18, S13-S19 и S18-S21. Другой подход состоит в том, чтобы получать специфические антитела к отдельным рибосомным белкам и изучать при помощи электронного микроскопа места их связывания на поверхности рибосомных субчастиц [96, 97]. Этим методом была установлена локализация многих белков на поверхности как 30S-, так и 505-субчастиц (рис. 15-13). В ряде случаев антитела к определенному белку связывались сразу в нескольких участках. Тот факт, что связывающие места для антител к белкам S2, S12, S15 и S18 отстоят друг от друга на 8—19 нм, свидетельствует о том, что эти белки в 305-субчастице находятся в вытянутой, фибриллярной [c.230]

Рис. 69. Электронные микрофотографии рибосомных 30S субчастиц с антителами, присоединенными к модифицированным З -концу 16S РНК (а) и 5 -концу 16S РНК (б), а также фотографии двух проекций модели 30S субчастицы с обозначениями местоположений З -конца 16S РНК (звездочка) и 5 -конца РНК (кружок) (в) (предоставлены В. Д. Васильевым, Институт белка АН СССР, Пущино)

Изучение топографии компонентов рибосом. Эта задача служит важной составной частью изучения проблемы биосинтеза белка. Один из перспективных подходов для ее решения — имму но электронная микроскопия. Например, с ПОМОЩЬЮ антител против определенного рибосом ного белка можно специфически сшить соответствующие рибосомные субчастицы. Выделив затем димеры сшитых бивалентными IgG-антителами субчастиц, их изучают с помощью электронной микроскопии и определяют локализацию соответствующего белка. [c.264]

Некоторую информацию о пространственном расположении рибосомных белков, участвующих в инициации, можно получить на основании того, что антитела к белкам S19 и S21 блокируют образование инициирующего комплекса с fMet-тРНК. Известно также, что антитела к белкам S2, S18 и S20 блокируют связывание фактора IF-3. Эксперименты с использованием агентов, образующих поперечные мостики, показали, что IF-2 и S19 расположены близко друг к другу, а IF-3 находится рядом с S12. [c.233]

Рис. 66. Электронные микрофотографии рибосомных 50S субчастиц, прореагировавших с антителами а —антитела против белка L7 / L12 (по W. А. Stry harz et al. V-Mol. Biol., 1978, V. 126, p. 123-140) оригинал предоставлен д-ром Дж. Лейком, Калифорнийский университет, Лос-Анджелес) б —антитела против белка L1 (предоставлено д-ром Г. Штоффлером, Институт молекулярной генетики им. М. Планка, Зап. Берлин) в — антитела против 5S РНК-белкового комплекса SOS частицы видны, с их выпуклой ( задней ) стороны (предоставлено В. Д. Васильевым, Институт белка АН СССР, Пущино) [c.111]

Для идентификации белковых компонентов 50S субчастицы, формирующих факторсвязьшающий участок, были использованы, в частности, антитела против различных рибосомных белков. Оказалось, что только антитела против белка L7 / L12 ингибировали связьшание EF-G, в то время как антитела против большого разнообразия других белков не влияли на эту функцию. Первоначально из этих опытов был сделан вьшод, что местом присоединения EF-G является белок L7 / L12. Действительно, избирательное удаление белка L7 / L12 то 50S субчастицы (с помощью диссоциации 0,5 М NH4 I с этанолом) приводило к значительному падению связьшания EF-G с рибосомой. Однако сродство не исчезало совсем, а лишь уменьшалось. Было показано, что даже при полном отсутствии белков L7 / L12 на рибосоме EF-G способен, хотя и гораздо менее эффективно, не только связываться, но и осуществлять свои функции в гидролизе ГТФ и в транслокации. Следовательно, белок L7 / L12 лишь помогает связьшанию EF-G, а основным связьшающим компонентом, ввиду отсутствия других причастных белков, должна быть рибосомная РНК. В прямых экспериментах это было подтверждено было найдено специфическое сродство определенного района 23S РНК к EF-G. [c.145]

Особенно аажная роль принадлежит электронной микроскопии а исследовании комплексов рибосом с антителами к индивидуальным рибосомным белкам или отдельным участкам рРНК. модифицированным низко молекулярными химическими агентами (гаптена-ми) или несущим природную модификацию (6,6-днметиладенин, 7-метилгуанин). Этот подход называется иммунной электронной [c.403]

При использовании метода в иммунной электронной микроскопии получают антитела к индивидуальным рибосомным белкам. Этими антителами обрабатывают ин-тактные субчастицы и затем с помощью электронного микроскопа определяют места связывания. Таким способом была определена локализация всех белков 308-субча-стицы, а также многих белков 508-субчастицы. [c.107]

Рис. 5-16. Трехмерная модель бактериальной рибосомы (вид с двух разных сторон). Положение многих рибосомных белков в этой структуре выявлено с помощью электронного микроскопа, позволяющего обнаружить места прикрепления специфических антител, а также но рассеянию нейтронов от рибосом, содержащих один или несколько дейтерированных белков. (По J. А. Lake, Ann. Rev. Bio hem., 54, 507-530, 1985.)

Оказалось, что поверхность рибосомы не гладкая и можно видеть много особенностей ре тьефа Эго очень сущесгвенный момент, поскольку эти особенности дают координаты на поверхности рибосом, относительно которых можно сориентировать расположение отдельных рибосомных белков. С этой целью под электронным микроскопом наблюдают присоединение к шверхности рибосомных субчастиц антител к отдельным рибосомным белкам, (см Рис. 2.1а) Такие антитела в свое время научился делать Штоффлер (это не просто ) [c.15]

Рис. 88. ЭлектЬонные микрофотографии рибосомных 50S субчастиц с присоединенным EF-G, прореагировавших с антителами против EF-G (а), и фотография модели 50S субчастицы с обозначением (черный кружок) приблизительного местоположения EF-G на субчастице (б) (предоставлены В. Д. Васильевым, Институт белка АН СССР, Пущино)

Антитела образуются в особых клетках, называемых плазмо-бластами, плазмобласты — вполне нормальные клетки, имеющие все, что нужно, для производства белков (рибосомный аппарат), но продукция их состоит из антител. Одной из удивительных биологических загадок является вопрос о том, каким образом плазмобласты принимают заказ на то или иное антитело. [c.186]

Описанная выше схема исследования по ряду причин недостаточно эффективна. Во-первых, таким способом нельзя решить важный вопрос о расположении в субчастице РНК, прежде всего ее концевых участков, так как получить к ним антитела при иммунизации собственна РНК невозможно. Во-вторых, достаточно трудно получить в иммунохимически чистом виде различные белки, входящие в состав рибосомы, что позволило бы иметь антитела к строго определенному белку. Обе эти трудности можно обойти в случае модификации рибосомной РНК и белков гаптенами и последующей димеризации рибосомных частиц антителами против этих гаптенов. В качестве примера подобного исследования можно привести работу, выполненную И. Шатским, М. Кожухаро-вой, Л. Мочаловой и А. Богдановым (1978—1982). [c.264]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология