Микрококковая ДНКаза

Панкреатическая дезоксирибонуклеаза (ДНКаза) II Микрококковая ДНКаза [c.167]

Б — существование двух типов прикреплений в ядерном матриксе из разных источников а—печень крысы, ядра обрабатывали микрококковой нуклеазой 6— культура клеток дрозофилы (линия КС) в — эритроциты кур в случаях 6. в ядра обрабатывали ДНКазой .Электрофорез в 1,4%-ном агарозном геле позволяет одновременно видеть оба типа защищенной ДНК [c.114]

B. Обработка нуклеосом трипсином влияет на их особую популяцию, а именно на нуклеосомы из активного хроматина. Этот вывод сделан в результате сравнения нуклеосом, обработанных трипсином, с ДНК эритроцитов, обработанной ДНКазой I. При расщеплении микрококковой нуклеазой нуклеосом, обработанных трипсином, получается ДНК, которая защищает глобиновую к ДНК и ДНК эритроцитов (25 и 83% соответственно) в той же степени, в какой это делает ДНК эритроцитов, обработанная ДНКазой I, (25 и 78% соответственно) (табл. 9-1). [c.393]

Г. Поскольку ДНК в составе отдельных нуклеосом в такой же степени чувствительна к ДНКазе I, как и хроматин в ядре, то свойство активного хроматина, отличающее его от суммарного хроматина, должно проявляться на уровне отдельных нуклеосом. Эту точку зрения подтверждают данные о том, что обработка нуклеосом трипсином делает нуклеосомы из активного хроматина чувствительными к микрококковой нуклеазе. Отдельные нуклеосомы из областей активного хроматина должны физически отличаться от других нуклеосом. [c.393]

Рис. 13.16. Введение метки ( Р) при синтезе ДНК с помощью ДНК-полимеразы I и последующая деградация ДНК под действием микрококковой ДНКазы и диэстеразы из селезенки. Матричная цепь не показана. Заметьте, что радиоактивный фосфор, первоначально связанный с нуклеотидом У, переносится при расщеплении на нуклеотид X.

Начало углубленному изучению структуры хроматина положило открытие в 1974 г. его основной структурной единицы-нуклеосомы. Благодаря наличию нуклеосом частично декомпактизованныи хроматин на электронных микрофотографиях напоминает нитки бус (рис. 9-22). Бусину -нуклеосомз можно отделить от длинной нити ДНК путем обработки препарата хроматина ферментами, расщепляющими ДНК. Ферменты, вызывающие деградацию как ДНК, так и РНК, называют нуклеазами, а ферменты, действующие только на ДНК,- дезоксирибонуклеазами или ДНКазами. Нуклеаза, с помощью которой выделяют индивидуальные нуклеосомы, получена из клеток микрококков (микрококковая нуклеаза). При непродолжительной обработке этим ферментом расщепляются только те участки ДНК, которые расположены между нуклеосомами остальная ДНК защищена связанными с ней гистонами. вследствие чего вся молекула полимера распадается на двухцепочечные фрагменты длиной 146 пар оснований. Эти ДНК-гисто-новые комплексы на электронных микрофотографиях выглядят как частицы дисковидной формы, имеющие диаметр около 11 нм Каждая нуклеосома содержит набор из восьми молекул гистонов - по две молекулы каждого из четырех высококонсервативных нуклеосомных гисто- [c.111]

Специфичность ДНК в местах прикрепления к скелету [125—129]. Все опыты ставятся по очень простой схеме. Клеточные ядра обрабатывают нуклеазами либо специфическими (рестриктазами), либо неспецифическими (микрококковая нуклеаза, ДНКаза I, ДНКаза II), после чего удаляют гистоны и отщепившуюся ДНК тем или иным способом (2 М Na l, детергент, экстракция при низкой ионной силе). Иногда нуклеазная обработка повторяется после этого еще раз. В других случаях удаление гистонов [c.109]

Чувствительность к действию нуклеаз. Судя по более высокой чувствительности к расщеплению под действием ДНКазы I или микрококковой нуклеазы, транскрипционно активные области хроматина упакованы менее плотно, чем области, содержащие неактивные гены. Такая чувствительность к нуклеа-зам часто распространяется на сегменты длиной несколько тысяч пар оснований, фланкирующие единицу транскрипции. Структурные особенности, лежащие в основе этой чувствительности, не установлены, но данные биохимических исследований свидетельствуют о том, что нуклеосомы, содержащие активные гены, характеризуются низким содержанием гистона Н1, обогащены ацетилирован- [c.137]

Участки хроматина дрожжей, содержащие элементы I-II1 в С Л -области, более устойчивы к действию ДНКазы 1 и микрококковой нуклеазы, чем окружающие их последовательности. Эта устойчивость сохраняется даже в том случае, когда EN находится в мини-хромосомных векторах. Отсюда следует, то хроматин в этих участках имеет необычную структуру. Возможно, устойчивость к действию нуклеаз определяется связыванием с центромерой специфических белков, прикреплением ДНК к микротрубочкам или одновременно тем и другим. Недавно такие ДНК-связывающие белки были обнаружены в экстрактах дрожжевых клеток [c.211]

Вы изучаете структуру хроматина из клеточных ядер печен крысы. Проведя кратковременную обработку ядер микрококково нуклеазой, затем вьщеление ДНК и электрофорез ДНК в агароз ном геле, вы получаете лесенку из широких полос с регулярнык интервалом, ширина которого соответствует разнице в длив между фрагментами примерно в 200 нуклеотидов. Если вмеси микрококковой нуклеазы использовать ДНКазу I, то на гел появляется растянутая зона шлейфа, на котором слабо видт полосы фрагментов, различающихся по длине на 200 нуклеотидш Если же перед нанесением на гель денатурировать ДНК, обрабо танную ДНКазой I, то образуется иная лесенка из полосн регулярным интервалом, соответствующим разнице в 10 ну леотидов. [c.134]

Для выяснения взаимосвязи между структурой хроматина и экспрессией гена вы изучаете два типа клеток цыпленка. Эритроциты цыпленка экспрессируют большие количества глобиновой мРНК, а в фибробластах глобин вообще не синтезируется. Вы хотите выяснить, в одинаковых или в разных хроматиновых структурах находятся последовательности ДНК, кодирующие глобин в этих двух типах клеток. Для изучения структуры хроматина вы используете две нуклеазы микрококковую нуклеазу и панкреатическую дезоксирибонуклеазу I (ДНКаза I). [c.139]

Вы повторяете некоторые из этих измерений, используя вместо глобиновой кДНК суммарную ДНК из эритроцитов, меченную Н-тимидином. Гибридизация с общей ДНК или с ДНК, обработанной микрококковой нуклеазой, обеспечивает защищенность более 90% ДНК, меченной Н-тимидином, а гибридизация с ДНК, обработанной ДНКазой I,-всего лишь 78% Н-ДНК (табл. 9-1). [c.139]

В последней серии экспериментов вы сначала получаете препарат нуклеосом, обрабатывая хроматин микрококковой нуклеазой. ДНК нуклеосом предохраняет более 90% глобиновой кДНК. После обработки нуклеосом ДНКазой I получается ДНК, предохраняющая всего лишь 25% глобиновой кДНК. Далее вы подвергаете нуклеосомы кратковременному воздействию трипсина, чтобы удалить 20-30 аминокислот с М-конца каждой молекулы гистонов, дополнительно расщепляете модифицированные нуклеосомы микрококковой нуклеазой и выделяете ДНК. Такая ДНК [c.139]

A. Какая из нуклеаз-микрококковая или ДНКаза I-расщепляя экспрессирующийся хроматин (активный хроматин) Как можно это определить [c.140]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология