Нуклеазы микрококковые

Рис. 9-23. Строение нуклеосом. Нуклеосомные частицы состоят из двух полных витков ДНК (83 нуклеотидных пары на виток) закрученных вокруг кора, представляющего собой гистоновый октамер, и соединяются между собой линкерной ДНК. Нуклеосом-ная частица выделена из хроматина путем ограниченного гидролиза линкерных участков ДНК микрококковой нуклеазой. В каждой нуклеосомнои частице фрагмент двойной спирали ДНК, имеющий в длину 146 пар оснований, закручен вокруг гистонового кора. Этот белковый кор содержит по две молекулы каждого из гистонов Н2А, Н2В, НЗ и Н4. Полипептидные цепи гистонов насчитывают от 102 до 135 аминокислотных остатков, а общий вес октамера составляет приблизительно 100000 Да. В деконденсированной форме хроматина каждая бусина связана с соседней частицей нитевидным участком

Получение бесклеточной системы трансляции из ретикулоцитов кролика, обработанной микрококковой нуклеазой [c.221]

МИКРОКОККОВАЯ НУКЛЕАЗА. Эндонуклеаза, расщепляющая ДНК при обработке этим ферментом хроматина гидролиз ДНК происходит преимущественно между нуклеосомами. [c.523]

Обработка микрококковой нуклеазой не единственный способ выявить в хроматине регулярное чередование защищенных участков (нуклеосом) и открытых участков (линкеров). Такая структура подтверждается и с помощью некоторых химических проб, которые модифицируют или расщепляют ДНК- Эти соединения расщепляют ДНК там, где она не связана с белками. Гистоны в составе нуклеосомы защищают ДНК, поэтому при ограниченном расщеплении получается характерная нуклеосомная лесенка. [c.244]

По мере углубления гидролиза (это особенно четко проявляется в опытах с микрококковой нуклеазой) падает размер и уменьшается количество ДНК, удерживаемой в ядерном матриксе. Простые расчеты позволили определить, что средний размер петли ДНК, выявляемый в таких опытах, т. е. среднее расстояние между двумя соседними точками прикрепления, составляет от 60 до 70 т. п. н. [c.112]

А — выявление двух типов защищенных от нуклеаз фрагментов в составе ядерного матрикса клеток асцитного рака Эрлиха мышей. Электрофорез ДНК в агарозном геле вели в условиях, когда выявлялся лишь один из типов ДНК, а другой или удалялся из геля, или оставался на старте. Видно, что в обоих случаях защищенные от микрококковой нуклеазы фрагменты гомогенны по размеру. УП1 и УПИ — участки прикрепления I и II типа [c.114]

Б — существование двух типов прикреплений в ядерном матриксе из разных источников а—печень крысы, ядра обрабатывали микрококковой нуклеазой 6— культура клеток дрозофилы (линия КС) в — эритроциты кур в случаях 6. в ядра обрабатывали ДНКазой .Электрофорез в 1,4%-ном агарозном геле позволяет одновременно видеть оба типа защищенной ДНК [c.114]

Обработку лизата микрококковой нуклеазой проводят следующим образом [c.221]

Для выяснения взаимосвязи между структурой хроматина и экспрессией гена вы изучаете два типа клеток цыпленка. Эритроциты цыпленка экспрессируют большие количества глобиновой мРНК, а в фибробластах глобин вообще не синтезируется. Вы хотите выяснить, в одинаковых или в разных хроматиновых структурах находятся последовательности ДНК, кодирующие глобин в этих двух типах клеток. Для изучения структуры хроматина вы используете две нуклеазы микрококковую нуклеазу и панкреатическую дезоксирибонуклеазу I (ДНКаза I). [c.139]

A. Какая из нуклеаз-микрококковая или ДНКаза I-расщепляя экспрессирующийся хроматин (активный хроматин) Как можно это определить [c.140]

Рис. 126. Электрофорез фрагментов ДНК, образовавшихся при расщеплении микрококковой нуклеазой. хроматнна печени крысы (левая дорожка) н гриба нейроспоры (Правая дорожка)

В одной из недавних работ [ aiafa et al., 1981) белки хроматина после частичного гидролиза микрококковой нуклеазой сорбировали на оксиапатите (в объеме) в 0,001 М К-фосфатном буфере (pH 7,2), [c.235]

В случае полинуклеотида, фосфорилированного только по 5-концу, этой дополнительной стадии можно избежать. В этом случае для идентификации обоих концевых звеньев используют обработку микрококковой нуклеазой, как показано на примере гипотетического олигомера pApGp pU [c.47]

Субстрат для определения полинуклеотидкиназной активности можно получить, обработав 5 мг коммерческой ДНК из тимуса теленка 10 единицами микрококковой нуклеазы в растворе, содержащем 0,05 М трис (pH 7,5) и 0,005 М a l2, в течение 2-3 мин при 37°С. [c.286]

Смесь динуклеотидов получали, обрабатывая ДНК из твмуса теленка микрококковой нуклеазой (исчерпывающий гидролиз). Разделение в первом направлении растворитель — 95%-ный этанол— 1 М ацетат аммония с pH 7,5 (75 30) 72 час. при 25", Разделение во втором направлении растворитель—изопропанол—вода—насыщенный раствор сульфата аммония (2 [c.19]

РНК гидролизовали РНК-азой Т и затем панкреатической РНК-азой. К смесп добавляли динуклеотиды ЦЦ и УГ, полученные прп гидролизе РНК микрококковой нуклеазой, С п Р — положение синега и розового маркера соответственно. [c.64]

Микрококковая нуклеаза. Гидролиз олигонуклеотидов осуществляют 1 0,05 М боратном буфере с pH 8,8, содержащем 0,01 М СаСЬ и фермент и концентрации 0,1 мг/мл. Смесь инкубируют в течение 2 час при 37° и нродукты гидролиза разделяют нри pH 3,5. Этот метод используется очень редко, поскольку специфичность микрококковой нуклеазы не совсем ясна 15]. Однако известно, что иод действием этого фермента высвобождаются дннуклеотнды, и некоторые из них, например ЦЦ и УГ, занимают строго определенные места на электрофореграммах (фиг. 3) после ионофореза лрп pH 3,5. [c.65]

Начало углубленному изучению структуры хроматина положило открытие в 1974 г. его основной структурной единицы-нуклеосомы. Благодаря наличию нуклеосом частично декомпактизованныи хроматин на электронных микрофотографиях напоминает нитки бус (рис. 9-22). Бусину -нуклеосомз можно отделить от длинной нити ДНК путем обработки препарата хроматина ферментами, расщепляющими ДНК. Ферменты, вызывающие деградацию как ДНК, так и РНК, называют нуклеазами, а ферменты, действующие только на ДНК,- дезоксирибонуклеазами или ДНКазами. Нуклеаза, с помощью которой выделяют индивидуальные нуклеосомы, получена из клеток микрококков (микрококковая нуклеаза). При непродолжительной обработке этим ферментом расщепляются только те участки ДНК, которые расположены между нуклеосомами остальная ДНК защищена связанными с ней гистонами. вследствие чего вся молекула полимера распадается на двухцепочечные фрагменты длиной 146 пар оснований. Эти ДНК-гисто-новые комплексы на электронных микрофотографиях выглядят как частицы дисковидной формы, имеющие диаметр около 11 нм Каждая нуклеосома содержит набор из восьми молекул гистонов - по две молекулы каждого из четырех высококонсервативных нуклеосомных гисто- [c.111]

Рис. 9-28. Схема, показывающая, каким образом гистон Н1 (220 аминокислот) мог бы обеспечить контакт соседних нуклеосом Глобулярная часть НП связывается с каждой нуклеосомой вблизи сайта, в котором спираль ДНК входит и выходит с гисто нового октамера. В присутствии гистона П1 два полных витка ДНК (166 нуклеотидных пар) защищены от действия микрококковой нуклеазы (см. рис. 9-23). Однако до сих пор неизвестны ни фсхмерная структура гистона НИ, ни точные области взаимодействия выступающих амино концевых и карбоксиконцевых

Специфичность ДНК в местах прикрепления к скелету [125—129]. Все опыты ставятся по очень простой схеме. Клеточные ядра обрабатывают нуклеазами либо специфическими (рестриктазами), либо неспецифическими (микрококковая нуклеаза, ДНКаза I, ДНКаза II), после чего удаляют гистоны и отщепившуюся ДНК тем или иным способом (2 М Na l, детергент, экстракция при низкой ионной силе). Иногда нуклеазная обработка повторяется после этого еще раз. В других случаях удаление гистонов [c.109]

Первые опыты по характеристике ДНК, остающейся в ядерном матриксе после переваривания рестриктазами (E oRI и HindHI) или микрококковой нуклеазой, были проведены в нашей лаборатории С. В. Разиным и [c.112]

Г—Д — полная защищенность тяжелого компонента от микрококковой нуклеазы. Электрофорез ямДНК вели в 0,7%-ном нейтральном (Г) или щелочном (Л) агарозном геле. Препараты выделены после обработки возрастающими дозами нуклеазы. Ядерный матрикс содержал 1,75% (а), 0,73 (6), 0,29 (б), 0,11 (г), 0,04 (с)) и 0,02 % (е) от всей ДНК. Стрелки указывают позиции маркеров (10.8 и 5,4 т, п. И-)- Таким образом, тяжелый компонент имеет размер 10 т. п. и, и не содержит даже одноцепочечных разрывов (ио результатам, полученным С В- Разиным и соавт.) [c.115]

Наряду с этой группой данных имеются исследования, в которых авторы приходят к несколько отличным выводам. В. Гаррард и А. Ворсел (США), изучая состояние активных геиов в хроматине с помощью нуклеазного гидролиза и с помощью электронной микроскопии, пришли к выводу о том, что нуклеосомы в активном хроматине остаются, но претерпевают структурные изменения типа разворота, превращаясь в полунуклеосомы. В результате на электро-фореграммах гидролизатов микрококковой нуклеазой периодичность 200 п. н. заменяется периодичностью 100 п. н. При электронной микроскопии число бусин удваивается, а их размеры уменьшаются. Предполагается, что РНК-полимераза может проходить через такие развернутые нуклеосомы. [c.152]

Относительная легкость получения большого количества мРНК реовируса привела к тому, что последние широко использовались для изучения функций мРНК вообще и соответственно транслировались в разнообразных бесклеточных системах. В большинстве случаев наиболее удобен лизат ретикулоцитов кролика, обработанный микрококковой нуклеазой для подавления эндогенного синтеза белка. Если планируется небольшая работа по трансляции in vitro, наиболее удобно, по-видимому, купить компоненты бесклеточной системы у поставщика и пользоваться системой в соответствии с его рекомендациями. Исследователи, планирующие работу большего масштаба, найдут краткое описание метода получения лизата ретикулоцитов кролика в приложении к данной главе. [c.215]

Смотреть страницы где упоминается термин Нуклеазы микрококковые: [c.253] [c.311] [c.426] [c.492] [c.239] [c.243] [c.243] [c.253] [c.62] [c.13] [c.18] [c.119] [c.87] [c.87] [c.89] [c.97] [c.98] [c.120] [c.121] [c.121] [c.121] [c.159] [c.221] [c.249] [c.256]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология