Агарозные гели

Ниже описаны некоторые общие методики и реагенты, используемые при электрофорезе нуклеиновых кислот и белков в акриламидном и агарозном гелях. Приведены также работы, из которых взяты основные детали описываемых методик. [c.376]

Перенос НК на мембранные фильтры после их фракционирования в агарозном геле (Саузерн- или Нозерн-блоты). [c.96]

Молекулярно-ситовая хроматография. При данном виде хроматографии используется способность материалов с контролируемой пористостью сортировать и разделять компоненты смеси в соответствии с размерами и формой их молекул. Для осуществления процесса гель-хроматографии используются гели поперечно-емкостного декстрана (сефадексы и сефакрилы), поперечно-сшитые полиакриламидные гранулы (биогели), агарозные гели с выраженными в них цепями акриламидного полимера (ультрагели) и более жесткие поперечно-сшитые агарозы (СЬ-агарозы и сефакрилы-8), с помощью которых можно быстро разделить макромолекулы в соответствии с их размером. Степень удерживания растворенного вещества на колонке зависит от его способности проникать в поры геля. Поэтому при гель-фильтрации сначала выходят высокомолекулярные вещества, а затем вешества в порядке убывания их моле- [c.55]

РИС.2-18. Схематическое изображение сетчатой структуры агарозного геля (справа) и показанной для сравнения сетки из беспорядочно свернутых цепей (такая сетка, в частности, характерна для сефадекса). Агарозные гели содержат агрегаты из 10— 10 спиралей меньшее же число спиралей, как это показано здесь, обычно не наблюдается [58]. [c.121]

Рекомендуется использовать электрофоретический прибор с охлаждением. По окончании электрофореза область разделения исследуемого образца в агарозном геле вырезают в виде узкой продольной полосы, содержащей белковые фракции (фиг. 33), и помещают ее на пластинку агарозного геля с иммунной сывороткой. [c.155]

На эту пластинку кладут полоску геля с фракциями исследуемого белка и проводят электрофорез. Пластинку укрепляют в приборе так, чтобы миграция белковых фракций происходила под прямым углом к продольной оси наложенной полоски агарозного геля (фиг. 33). Электрофорез продолжается 30—90 мин при градиенте напряжения [c.156]

Реакция радиального гемолиза (РРГ). Реакция основана на феномене гемолиза сенсибилизированных антигеном эритроцитов под влиянием вирусспецифических антител в присутствии комплемента в агарозном геле. Метод широко применяется для серологической диагностики гриппа, ряда других респираторных инфекций, краснухи, паротита, арбовирусных инфекций, вызываемых тогавирусами. [c.273]

Анализ гидрофильных полимеров и биополимеров осуществляют на мягких и жестких гидрофильных сорбентах, таких как сефадексы, полиакриламидные и агарозные гели, макропористые силикагели и макропористые стекла. [c.82]

Декстрановые гели (сефадексы), полиакриламидные гели (биогель Р), агарозные гели (сефарозы, биогель А), агар, пористые стекла [c.68]

Поперечносшитые агарозные гели. ........... [c.55]

Агарозные гели предназначены для ГПХ в водных растворах (см. разд. 28). Им присущи все достоинства и недостатки, свойственные мягким гелям. В зависимости от скорости фильтрации и концентрации элюента высота слоя в колонке может довольно сильно изменяться. Для улучшения воспроизводимости результатов рекомендуется механически фиксировать положение слоя в колонке при максимальной скорости фильтрации и применять элюенты с высокой концентрацией солей или спирта. [c.57]

К гидрофильным мягким гелям относятся сефадексы, или декст-рановыегели, имеющие мостики типа —О—СН2СН(ОН)СН2—О—, агарозные гели, обладающие водородными мостиками, связывающими цепи агарозы, полиакриламидные гели и крахмал. [c.230]

Поперечносшитые агарозные гели [c.62]

Сопротивление потоку (падение давления) на колонках с сефадексами и агарозными гелями [c.79]

Скорость фильтрации на колонках с сефадексами и агарозными гелями [c.80]

В ионообменной хроматографии целлюлозоиониты применяются либо в виде порошка, которым заполняют колонку, либо в виде сефадексов и химически сшитых агарозных гелей в тонкослойной хроматографии (см. гл. IV). [c.117]

Для работы с органическими растворителями применяют ли-пофильный сефадекс, получаемый введением в матрицу гидрофильного сефадекса оксипропиловых групп, и поперечносшитые агарозные гели. [c.230]

Агарозные гели Агароза (в широких пределах) Остаточные фрагменты ДНК (до 1300 основных пар), ДДСН-белковые комплексы [c.102]

Различия между этими полимерными матрицами заключаются в основном в пористой структуре. Размеры пор и упругость встроенных в гель полимерных цепочек оказывают значительное влияние на работоспособность при разделении по молекулярным размерам. На рис. 100 представлена структура агарозного геля и ее формирование из мономерных волокон (слева). Гидроксиэтилагароза (рис. 100, справа) обладает сильно измененной структурой. Образование сдвоенной структуры приводит к сужению пор, и такой гель лучше применять для биополимеров с меньшими размерами. [c.103]

А. Иммуноэлектрофоретический анализ (ИЭА) [41], Антигены вначале разделяют путем электрофореза в агарозном геле, Верхняя часть рисунка демонстрирует классическое расположение ИЭА нижняя часть ИЭА называется тандемной стрелки показывают положение лунок, в которые заливают перед электрофорезом растворы антигенов. После электрофореза в геле параллельно направлению электрофоретической миграции прорезается канавка, которая заполняется иммунной сывороткой. Антитела и антигены диффундируют в гель, встречаются и образуют дуги преципитации, [c.102]

Для электрофоретического разделения нуклеиновых кислот среднего размера обычно применяют агарозные гели. Агароза — это особо чистая фракция, получаемая из агара или непосредственно из агарообразующих морских водорослей. В 1,0% агарозном геле можно разделять молекулы ДНК размером от 600 до 20 ООО п. н. Для фракционирования более крупных молекул ДНК (миллионы пар оснований), денатурированной ДНК и РНК приходится использовать специальные системы электрофореза. Иногда для решения специальных задач для разделения ДНК применяют полиакриламидные гели. Так, в 20% полиакриламидном геле можно разделить фрагменты ДНК, состоящие всего из шести оснований и различающиеся лишь одним нуклеотидом. [c.54]

Если расстояния от сайта А до сайта 1 и от сайта 1 до сайта В не совпадают, каждое из них не превышает 20 т. п. н. и существует одноко-пийный зонд, гибридизующийся с участком ДНК между сайтами А и 1 (рис. 20.11, Б), то после блот-гибридизации по Саузерну и разделения в агарозном геле фрагментов ДНК, полученных в результате обработки ЯшёПТ, мы сможем различить две ситуации. Первая - сайт 1 расщепляется, в результате чего образуется два фрагмента, и зонд гибридизуется с тем из них, который ограничивается сайтами А и 1. Вторая - сайт 1 не расщепляется и зогщ гибридизуется с фрагментом ДНК, ограниченным сайтами А и В (рис. 20.11, Б). [c.453]

Саузерн-блотгипг (Southern blotting) Обнаружение специфических нуклеотидных последовательностей путем переноса денатурированных молекул ДНК, подвергнутых электрофорезу, с агарозного геля на нитроцеллюлозный или найлоновый фильтр за счет капиллярного эффекта и гибридизации с меченым зондом, комплементарным искомой последовательности. [c.559]

Сефароза L-это носитель на основе поперечно-сшитого агарозного геля, получаемый в результате обработки соответствующего типа сефарозы 2,3-дибромпропаном. Поперечное сшивание повышает химическую, термическую и механическую стабильность. Устойчив при pH 3 -н 14, в 8 М мочевине, 6 М гуанидингидрохлориде, 3 М KS N. Можно использовать во многих органических растворителях и при температурах < 70°С устойчив к автоклавированию при 120°С и pH 7. Разрушается в присутствии окислителей. [c.442]

В предварительных опытах рекомендуется уточнить оптимальное соотношение раствора агарозы и иммунной сьшоротки в конкретных условиях, т. е. для данного исследуемого антигена и для имеющейся в распоряжении антисьшоротки. Если иммунная сыворотка достаточно активна, to ее концентрация в агарозном геле не должна превышать 1—5%. [c.156]

Основное практическое значение имеет электрофорез в гелях гель-электрофорез). При использовании гелей практически исчезает опасность конвекции, резко уменьшается коэффициент диффузии и размывание зон незначительно. В результате на одном геле длиной около метра можно получить до сотни или даже более зон. Наиболее широко используется электрофорез в сшитых полиакриламидных и агарозных гелях. Агароза является компонентом агар-агара, содержащегося в красных морских водорослях. Она построена из чередующихся остатков В-галак-тозы и 3,6-ангидро-1/-галактозы, связанных попеременно 0 —> 4)- и а(1 3)-связями [c.242]

Агарозные гели используются для фракционирования белкоа и нуклеиновых кислот (гель-фильтрация, электрофорез) и их характеристики (иммунодиффузия, иммуиоэлектрофорез). Б агаровых гелях иммобилизуют бактерии и лимфоидные клетки а молекуляр-но-биологических и иммунологических исследованиях. [c.501]

Реакция встречного иммуноэлектрофореза (РВИЭФ). Эта реакция основана на встречной диффузии в электрическом поле антигенов и антител и появлении внутри прозрачного геля видимого преципитата. В агаровом или агарозном геле делают лунки диаметром 2 — 3 мм, причем расстояние между лунками для сыворотки и АГ должно составлять 5 — 6 мм. Лунки располагают попарно (одна — для АГ, вторая — для сыворотки) или по три (одна — для АГ, вторая — для испытуемой сыворотки, третья — для контрольной сыворотки). Лунки для сыворотки располагают ближе к аноду, а для АГ — к катоду. Реакцию проводят с несколькими разведениями АГ, продолжительность электрофореза — 90 мин. Результаты реакции учитывают сразу же после окончания электрофореза, отмечая количество и локализацию линий преципитации при сравнении их с контрольной тест-системой. [c.69]

Применение поперечносшитых агарозных гелей в общем аналогично применению таких же гелей с водородными мостиками (см. разд. 29). Преимущества сшитых гелей, наиболее полно выявляются при использовании их для получения биоспецифических сорбентов для аффинной хроматографии (см. носители Affi-Gel, разд. 120). [c.62]

Полиакрилам ид агарозные гели. Полужесткие гели для ГПХ в водных растворах, обладают высокой механической прочностью. Выдерживают высокие давления без разрушения гранул, что позволяет работать с высокой скоростью фильтрации. Разрешающая способность гелей выше, чем у сефадексов. [c.70]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология