Магний и пируваткиназа

Пируваткиназу исследовали [16], заменяя оба металла — магний и калий, которые необходимы для обеспечения каталитической активности. Задача в данном случае состояла в оценке расстояния между этими двумя ионами в ферменте. Она была решена путем замены магния на Мп + и наблюдения влияния ионов марганца на собственный ядерный резонанс ионов Т1+, заменяющих К" . По этим данным было определено расстояние Мп +—Т1+, оказавшееся равным 820 пм. Это расстояние при введении субстрата — фосфоенолпировиноградной кислоты — уменьшалось до 490 пм, что указывает на индуцированные субстратом конформационные переходы. Роль обоих ионов металла в катализе пируваткиназой неясна, но понятно, что данные ЯМР могут быть весьма полезны при обсуждении различных моделей. [c.389]

Конечной стадией гликолитического пути является взаимодействие фосфоенолпирувата с АДФ с образованием пирувата и АТФ. Эта обратимая реакция катализируется пируваткиназой, которая для проявления своей активности требует присутствия ионов калия и магния [19]. [c.114]

Магний необходим для многих ферментов гликолиза и цикла Кребса. В митохондриях при его недостатке наблюдается уменьщение количества, нарущение формы и в конечном счете исчезновение крист. Для девяти из двенадцати реакций гликолиза требуется участие металлов-активаторов и щесть из них активируются магнием. Это четыре киназы (гексо-, фосфофрукто-, фосфоглицерат-, пируваткиназы), енолаза и пируваткарбоксилаза. За исключением фумаразы, все ферменты цикла Кребса активируются магнием или содержат его как интегральный компонент структуры. Для двух из семи ферментов пентозофосфатного пути (глюкозо-6-фосфатдегидро-геназа и транскетолаза) также необходим Mg. Он требуется и для работы ферментов молочнокислого и спиртового брожения. [c.251]

Обычно применяемый способ определения киназной активности основан на измерении образования ADP с помощью пируваткиназы (Ер) и лактатдегидрогеназы (Eq). Этот пример будет использован для вычисления количеств сопрягающих ферментов. Оба фермента катализируют практически необратимые реакции (ЛО —большая отрицательная величина), поэтому достаточно, чтобы величины V raax/Z M составляли около 5 MИH . Величина /См для пируваткиназы в данном случае относится к ADP. В литературе существуют несколько противоречивые суждения о том, что служит истинным субстратом для этого фермента — ADP3- или MgADP- количество каждой из этих двух форм должно зависеть от присутствия свободных ионов магния, которые так или иначе необходимы для реакции. Ки, равная 0,2 мМ, — это вполне разумная величина. Фосфоенолпируват, другой субстрат этого фермента, обычно используется в концентрации 0,2—0,5 мМ, что близко к насыщению. Существенную роль в реакции играют также ионы калия, и они должны присутствовать в концентрации 0,1—0,15 М, чтобы реакция протекала в оптимальном режиме. Если при такой высокой концентрации ионов К+ соответствующую киназу нельзя тестировать, то необходимо ввести соответствующую поправку в величину l max для пируваткиназы. Количество фермента должно быть равно по крайней мере 1 ед.-мл (5 Ям ). Содержание фермента, указанное на коммерческих препаратах пируваткиназы, несомненно, относится к оптимальным условиям, поэтому целесообразно увеличить количество фермента в пробе до 2 (оптимум) ед.-мл . Если измерение проводится при pH 8, когда пируват- [c.302]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология