Фермент-субстратный комплекс рибонуклеазы

При связывании цитидин-3 -фосфата с рибонуклеазой значения рК остатков His-12 и His-119 резко увеличивается. Это согласуется с рассмотренными ранее результатами исследований стационарной кинетики, согласно которым образование фермент-субстратного комплекса приводит к увеличению значений рК двух групп фермента. [c.77]

Отправным пунктом в первых опытах по определению структуры фермент-субстратного комплекса, в котором субстрат связан продуктивно, была структура стабильных комплексов между ферментом и ингибитором. Классическим примером такого рода является установление структуры лизоцима (см. конец данной главы). Указанный подход можно реализовать несколькими способами. Например, можно связать определенную часть молекулы субстрата с ферментом и установить структуру остальной части путем построения модели. Другой способ состоит в использовании не способного к ферментативному превращению аналога субстрата, в котором модифицирована реакционноспособная связь. Показательным примером применения подобного подхода может служить связывание рибонуклеазой фосфоната вместо фосфата (гл. 12, разд. В). [c.36]

Это очень близкий аналог, отличающийся от субстрата только тем, что атом кислорода замещен в нем —СНг-группой, так что структура его комплекса с рибонуклеазой близка к структуре продуктивного фермент-субстратного комплекса. Установлено, что His-119 располагается на расстоянии длины водородной связи от уходящей группы, а His-12 — на расстоянии длины водородной связи от 2 -0Н-группы рибозы пиримидина. Ни одна из боковых цепей лизина не вступает в прямой контакт с субстратом, однако они, по-видимому, имеют важное значение для [c.390]

В принципе сканирующим методом можно получить больще всего сведений, так как он дает информацию об электронной структуре активного центра и о конформации фермент-субстратных комплексов. Однако его практическое использование часто затрудняется сложностями при разрещении широких перекрывающихся линий в спектрах больших белковых молекул, а также еще и необходимостью выполнения измерений протонного резонанса в DsO, для чего обычно требуется неоднократная лиофилизация белка. Первое осложнение преодолевается применением новейшей техники с большой разрешающей способностью [59]. О ее воз-можностях можно судить по работе Ярдецкого с сотр. [60], посвященной механизму действия рибонуклеазы. Предварительные эксперименты такого рода были выполнены и с аденилаткиназой (разд. 3.3). [c.671]

Химический механизм действия рибонуклеазы в том виде, в каком его себе сейчас представляют, был построен из общих соображений еще до установления кристаллической структуры фермента [170]. Известно, что график зависимости активности фермента от pH представляет собой колоколообразную кривую с максимумом при pH 7. рН-зависимостьйса1/ м показывает, что скорость гидролиза зависит от состояния ионизации в свободном ферменте основания с р/(а = 5,22 и кислоты с р/(а = 6,78, в то время как из рН-зависимости ft at следует, что в фермент-субстратном комплексе эти значения р/Са изменяются до 6,3 и 8,1. Было высказано предположение, что реакция катализируется по механизму общего кислотно-основного катализа с участием двух остатков гистидина, как выяснилось позднее,— His-12 и His-119 [c.389]

В рибонуклеазе имеется четко выраженная расщелина для связывания субстрата. В этой расщелине располагаются His-12, His-119 и боковые цепи остатков Lys-7, Lys-41 и Lys-66. Структура фермент-субстратного комплекса на стадии циклизации была построена исходя из данных кристаллографических исследований структуры комплекса фермента с аналогом субстрата Up A (12.39), представляющим собой фосфонатный аналог UpA. [c.390]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология