Антитела к иодирование

Тиреоглобулин содержит 0,6% иода [10]. Молекулярный вес тиреоглобулина 700 000 [И]. Каждая молекула тиреоглобулина содержит, следовательно, 32 атома иода, входящие в состав 2—3 группировок тироксина и 8—12 групп дииодтирозина [11]. Тиреоглобулин устойчив только при определенных значениях pH, и вне этой зоны молекулы тиреоглобулина расщепляются на более мелкие субъединицы [12]. Тиреоглобулин не реагирует с антителами, образующимися при введении в организм иодированных белков [13]. Это указывает на то, что остатки тироксина находятся внутри большой молекулы тиреоглобулина, а не на ее поверхности и потому недоступны для специфических антиподных групп молекулы антитела. [c.314]

В основе всех иммунологических реакций лежит один и тот же первичный процесс соединения антигена с антителом. Преципитация, агглютинация, цитолиз и другие более сложные реакции являются вторичным выражением этого процесса. Самой простой из всех реакций антигена с антителом является реакция преципитации растворенного антигена соответствующим антителом. Используя антигены, содержащие окрашенные группы, изотопы или какие-нибудь легко определимые химическим путем элементы, можно провести количественный анализ преципитата и установить его состав при различных условиях. Подобные исследования были проведены многими авторами, использовавшими такие меченые антигены, как гемоглобин, иодированные белкИ, фосфопротеиды, азобелки и гемоцианин. [c.342]

Таблица 6.12. Иодирование моноклональных антител

Иодированное антитело (10 имп./мин/мл) в PBS, содержащем 3% БСА и [c.200]

Для того чтобы получить радиоактивно меченные антитела, обычно используют Следует иметь в виду, что некоторые моноклональные антитела при иодировании теряют связывающую активность (если у них в связывающем центре содержится тирозин). Вместе с тем высокая удельная активность и удобство использования гамма-счетчиков при применении заставляют примириться с коротким периодам полураспада изотопа. Если анализируется большое число разных антител, то выгодней метить вторичный реагент для их непрямого выявления. Правда, белок А можно использовать только для некоторых классов антител, а антитела против иммуноглобулинов не всегда могут применяться при работе с В-клетками. [c.218]

Некоторые авторы пытались объяснить специфичность антител тем, что при формировании молекулы антитела в ее состав входит детерминирующаяся группа антигена. Они предлагали поэтому рассматривать антитела как природные глобулины, включившие в состав своей молекулы указанную группу [63]. Это предположение опровергается тем, что антитела против иодированных и бронированных белков, арсанилазобелков и фосфобелков не содержат ни иода, ни брома, ни мышьяка, ни фосфора [64]. Известно также, что одна молекула антигена способна вызвать образование большого числа молекул антитела. Так, например, при иммунизации бактериями количество образующихся антител примерно в 600 раз больше количества, необходимого для агглютинации инъицированных бактерий [65]. [c.338]

Выше было уже упомянуто о получении белков, иодированных радиоактивным изотопом иода. В связи с работами по метаболизму был осуществлен биосинтез тироглобулинов, в состав которых входит J131 (189). В ряде лабораторий [67] изучалось иммуно-химическое поведение иодсодержащих белков, полученных либо прямым иодированием, либо внедрением иодированных радикалов. Белки, иодированные радиоактивным изотопом, оказались полезными при исследовании образования антител в зависимости от устойчивости соответствующих антигенов в тканях [4,7,31, 1316]. [c.319]

Очищенные моноклональные антитела легко модифицируются путем ковалентного связывания с биотиновыми группами. Этот простой метод может использоваться вместо иодирования [c.199]

Добавьте по 50 мкл иодированных антител (50 000 имп./мин) на каждую лунку и иккубнруйте в течение еще двух часов при комнатной температуре. [c.200]

Рис. 6.6. Сэндвич -радиоиммунотест на большой Т-антиген вируса SV-40 с использованием двух моноклональных антител к нему, взаимодействуюш,их с разными эпитопами. По оси ординат отложена радиоактивность (имп/мин) иодированных антител, связавшихся с аффинноиммобилизованным антигеном, а по оси абсцисс — концентрация антигена. Исследование проводили в двух параллельных пробах, и с целью демонстрации стабильности метода на рисунке представлены кривые, полученные для двух параллелей.

При кратковременной инкубации культивируемых in vitro клеток с меченой аминокислотой можно оценить скорость биосинтеза рецепторного белка той или иной специфичности. Для этого после солюбилизации рецепторов с использованием детергентов рецептор определенной специфичности извлекают из смеси на иммобилизованном лиганде. Скорость катаболизма того же рецептора можно оценить после введения в его молекулу радиоактивного иода в мягких условиях. Для этого используют ферментативный метод иодирования (окисляют иод в анионной форме до атомарного в присутствии пероксидазы и пероксидов в качестве субстрата). Клетки с иодированными рецепторами (иодируются только внеклеточные участки рецепторов) сохраняют жизнеспособность. В процессе их культивации можно оценить время, за которое они потеряют меченый рецептор. Для извлечения солюбилизированного рецептора используют как иммобилизованный лиганд, так и направленные против этого рецептора антитела, в том числе моноклональные. Измерение скоростей биосинтеза и катаболизма данного рецептора позволяет оценить время его обмена в мембране данного типа. На практике прибегают к определению времени полуобмена рецептора, т. е. периода, за который произойдет обновление данного рецептора на клеточной поверхности на 50%. [c.77]

Если гибридомная линия, синтезирующая необходимые моноклональные антитела, отсутствует, то приходится использовать один из перечисленных выше методов мечения антител. Однако и в этом случае можно в дальнейшем предусмотреть биосинтетическое введение метки в антииммуноглобулиновые моноклональные антитела, поскольку их можно использовать вместо иодированных реагентов. [c.218]

В. Иодирование антител к (х-цепям с помощью хлораминового метода [c.323]

Тритона Х-100). Затем туда добавляли 0,1 мл неразбавленной антисыворотки кролика, иммунизированного фактором роста,, и смесь инкубировали 30 мин при 4°. От несвязавшихся компонентов сыворотки бактерии дважды отмывали тем же буферош (по 3,5 мл). Меченый фактор роста получали иодированием. Затем выясняли соотношение реагентов, обеспечивающее необходимый для конкуренции недостаток антител в реакции,— сначала в реакции с одним только меченым фактором роста. [c.289]

Похожий прием был описан примерно в то же время Эрлихом и соавторами. Эта работа уже цитировалась подробно по другому поводу. Вместо пластиковой пленки авторы использовали диазобумагу (см. часть П) В роли радиоактивного маркера выступал иодированный белок А. Его сажали на индикаторные антитела, которые в этом случае были немеченными. Подобно предыдущему, авторадиографией диазобумаги можно было установить положение искомых колоний — продуцентов нужного бел- [c.292]

Недавно описан мягкий метод конъюгации ферментов с антителами, обеспечивающий почти полное сохранение активности обоих партнеров [O Sullivan et al., 1979]. Он открывает дополнительные возможности для постановки иммунохимических экспериментов описанного выше типа в тех случаях, когда радиоактивно меченные вторичные антитела нужной специфичности отсутствуют в продаже или плохо переносят реакции иодирования. [c.294]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология